陈舒迟
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 供职机构：华南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学农业科学更多>>
- 抗克伦特罗单链抗体在毕赤酵母GS115中的表达被引量：1
- 2011年
- 构建表达抗克伦特罗单链抗体(CBL scFv)的毕赤酵母菌株,筛选高拷贝转化子并诱导CBL scFv在毕赤酵母中的分泌表达。将构建的含有CBL scFv基因的重组真核表达载体pPICZαA-CBL经BstX I酶切线性化后,利用电转化方法转化毕赤酵母菌GS115感受态细胞,通过Zeocin抗性平板筛选高拷贝转化子,以甲醇诱导蛋白表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定及ELISA活性分析。结果显示,通过筛选出的重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为41kDa的蛋白,该蛋白可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合,且可被游离的CBL竞争性抑制,IC50值为5.1ng/mL。经检测,重组抗体表达量为0.095g/L。这说明分泌表达CBL scFv的毕赤酵母菌株构建成功,为后期CBL scFv发酵与制备奠定了基础。
- 陈舒迟何永盛徐小艳陆田珍王弘
- 关键词：克伦特罗单链抗体毕赤酵母蛋白表达
- 原核表达抗克伦特罗重组单链抗体及其纯化研究被引量：2
- 2009年
- 目的:原核表达抗克伦特罗重组单链抗体,对表达的包涵体蛋白进行提取和纯化,并鉴定重组抗体特性。方法:通过温度诱导大肠杆菌表达抗克伦特罗单链抗体,超声破碎菌体细胞,采用不同洗涤溶液提取包涵体。以不同变性剂溶解包涵体,Ni-NTA亲和柱纯化后,经脉冲稀释法将其复性。超滤及透析浓缩蛋白复性液,经Ni-NTA亲和柱二次纯化,得到纯化重组目的蛋白。通过SDS-PAGE电泳分析重组目的蛋白纯度,采用Western blotting和间接竞争ELISA对所制备的抗克伦特罗重组单链抗体特异性进行鉴定。结果:以大肠杆菌Es-cherichia coli BL21(DE3)为宿主菌诱导表达重组单链抗体,产率最高,占菌体蛋白的31%。以1mol/L尿素洗涤包涵体,6mol/L盐酸胍为变性剂,经Ni-NTA亲和柱纯化,所得复性重组单链抗体蛋白的纯度达96%。Western blotting分析显示,纯化并复性后的单链抗体可与鼠抗His标签蛋白单克隆抗体发生特异性的结合反应。间接竞争ELSIA结果表明,该重组抗体IC50值为3.35ng/mL,与沙丁胺醇等结构类似物无交叉反应。结论:原核表达制备的抗克伦特罗重组单链抗体具有较好的抗原结合活性及特异性,为进一步开展克伦特罗的免疫快速检测研究奠定基础。
- 王弘刘细霞梁艳张宏斌孙远明陈舒迟
- 关键词：克伦特罗单链抗体原核表达纯化
- 抗克伦特罗单链抗体在毕赤酵母中的表达研究
- 克伦特罗(clenbuterol，CBL)是一种禁用的动物促长剂，但违禁使用现象仍较普遍，危害严重。免疫分析法快速、简便、灵敏，特异性好，在食品安全快速筛查分析中优势突出。其中抗体是免疫分析的核心原材料。相比起制备周期长...
- 陈舒迟
- 关键词：克伦特罗单链抗体毕赤酵母蛋白表达食品安全
- 家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace在毕赤酵母GS115中的表达及其分析被引量：2
- 2012年
- 【目的】构建表达家蚕乙酰胆碱酯酶(BmAChE)的毕赤酵母菌株,实现BmAChE在毕赤酵母中分泌表达并对其活性进行分析。【方法】从家蚕头部提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,通过PCR扩增出家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace并进行序列测定。采用PCR及重叠延伸PCR去除原bmace中的信号肽和疏水肽,并对序列中存在的2个A+T富含区进行同义密码子替换的改造。将改造后的bmace与表达载体pPIC9K连接,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白,以Ellman法测定酶活力,毒扁豆碱和有机磷及氨基甲酸酯类农药抑制试验分析重组BmAChE(rBmAChE)的生物活性。【结果】改造后的bmace经重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为70 kD的蛋白,具有AChE活性,酶比活力约为1 187 U.mg-1。抑制试验显示,该rBmAChE能够被毒扁豆碱强烈抑制,并且可被皮蝇磷等10种有机磷农药和克百威等5种氨基甲酸酯类农药抑制,最低抑制浓度IC50值可达2.78×10-10mol.L-1。【结论】成功构建分泌表达BmAChE的毕赤酵母菌株,其表达了具有良好活性的rBmAChE,可用于进一步制备有机磷及氨基甲酸酯类农药快速检测分析制剂。
- 何永盛陈舒迟王弘韩双艳杨琼刘细霞董洁娴杨武英孙远明
- 关键词：毕赤酵母活性分析氨基甲酸酯类农药
