何永盛
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
- 供职机构：华南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 抗克伦特罗单链抗体在毕赤酵母GS115中的表达被引量：1
- 2011年
- 构建表达抗克伦特罗单链抗体(CBL scFv)的毕赤酵母菌株,筛选高拷贝转化子并诱导CBL scFv在毕赤酵母中的分泌表达。将构建的含有CBL scFv基因的重组真核表达载体pPICZαA-CBL经BstX I酶切线性化后,利用电转化方法转化毕赤酵母菌GS115感受态细胞,通过Zeocin抗性平板筛选高拷贝转化子,以甲醇诱导蛋白表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定及ELISA活性分析。结果显示,通过筛选出的重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为41kDa的蛋白,该蛋白可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合,且可被游离的CBL竞争性抑制,IC50值为5.1ng/mL。经检测,重组抗体表达量为0.095g/L。这说明分泌表达CBL scFv的毕赤酵母菌株构建成功,为后期CBL scFv发酵与制备奠定了基础。
- 陈舒迟何永盛徐小艳陆田珍王弘
- 关键词：克伦特罗单链抗体毕赤酵母蛋白表达
- 一种用于检测农药残留的重组家蚕乙酰胆碱酯酶的制备方法
- 本发明公开了一种用于检测农药残留的重组家蚕乙酰胆碱酯酶的制备方法。本发明将家蚕乙酰胆碱酯酶基因与锚定蛋白基因<I>AGα1</I>相连插入到酵母表达载体pPIC9K中构建成表面展示载体并转化毕赤酵母GS115，筛选阳性重...
- 王弘杨金易崔孟姣谢曦何永盛卢临萍孙远明徐振林
- 文献传递
- 重组乙酰胆碱酯酶的表达及其分子进化研究进展被引量：3
- 2012年
- 乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是酶抑制法检测农药残留的核心试剂。但天然提取的AChE存在含量低、纯化困难、稳定性差等不足,因此,高性能的重组AChE制备成为研究学者关注的热点。文中综述了重组AChE的表达、和分子进化等方面的研究成果,并指出酶定向进化策略与表面展示技术结合是重组AChE活性改造的未来趋势。
- 董洁娴李振峰雷红涛何永盛王弘孙远明
- 关键词：农药残留
- 一种用于检测农药残留的重组家蚕乙酰胆碱酯酶的制备方法
- 本发明公开了一种用于检测农药残留的重组家蚕乙酰胆碱酯酶的制备方法。本发明将家蚕乙酰胆碱酯酶基因与锚定蛋白基因AGα1相连插入到酵母表达载体pPIC9K中构建成表面展示载体并转化毕赤酵母GS115，筛选阳性重组子，并利用甲...
- 王弘杨金易崔孟姣谢曦何永盛卢临萍孙远明徐振林
- 文献传递
- 家蚕乙酰胆碱酯酶在毕赤酵母中的表达与表面展示研究
- 有机磷农药作为广谱、高效的杀虫剂，被广泛应用于各种农作物的生产，然而，部分高毒性的有机磷农药的大量使用会造成环境污染、作物药害及人畜中毒，其在农作物中的残留问题已引起了人们的普遍关注。目前检测有机磷农药残留的方法主要有仪...
- 何永盛
- 关键词：有机磷毕赤酵母
- 家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace在毕赤酵母GS115中的表达及其分析被引量：2
- 2012年
- 【目的】构建表达家蚕乙酰胆碱酯酶(BmAChE)的毕赤酵母菌株,实现BmAChE在毕赤酵母中分泌表达并对其活性进行分析。【方法】从家蚕头部提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,通过PCR扩增出家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace并进行序列测定。采用PCR及重叠延伸PCR去除原bmace中的信号肽和疏水肽,并对序列中存在的2个A+T富含区进行同义密码子替换的改造。将改造后的bmace与表达载体pPIC9K连接,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白,以Ellman法测定酶活力,毒扁豆碱和有机磷及氨基甲酸酯类农药抑制试验分析重组BmAChE(rBmAChE)的生物活性。【结果】改造后的bmace经重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为70 kD的蛋白,具有AChE活性,酶比活力约为1 187 U.mg-1。抑制试验显示,该rBmAChE能够被毒扁豆碱强烈抑制,并且可被皮蝇磷等10种有机磷农药和克百威等5种氨基甲酸酯类农药抑制,最低抑制浓度IC50值可达2.78×10-10mol.L-1。【结论】成功构建分泌表达BmAChE的毕赤酵母菌株,其表达了具有良好活性的rBmAChE,可用于进一步制备有机磷及氨基甲酸酯类农药快速检测分析制剂。
- 何永盛陈舒迟王弘韩双艳杨琼刘细霞董洁娴杨武英孙远明
- 关键词：毕赤酵母活性分析氨基甲酸酯类农药
