王泽楠
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省教育部产学研结合项目广东省高等学校人才引进项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 十二种人肝细胞株肝脏功能水平的比较研究
- 2013年
- 目的初步研究12种常见人肝细胞株所具有的合成、代谢、解毒等肝脏的功能,了解它们作为人工肝生物材料的价值、不足与缺陷。方法通过实时定量PCR检测各肝细胞株肝脏功能相关基因的表达情况,细胞免疫荧光检测部分相关功能蛋白的表达,以及全自动生化分析仪检测各细胞培养上清中白蛋白和尿素氮的含量,并与新鲜分离的原代正常成人肝细胞相关功能指标进行比较。结果实时定量PCR检测发现肝脏功能相关基因的mRNA表达水平在不同肝细胞株中差异较大,HepG2、C3A和Hep3B2.1-7肝细胞特异性功能相对较好,尤其是合成功能。细胞免疫荧光证实了部分相关基因的蛋白水平表达,培养上清中白蛋白和尿素氮的含量与实时定量PCR检测结果基本相符。结论现有肝细胞株虽然具有正常肝细胞的一些特异性功能,但其活性水平均较低,需要进一步开展高活性的肿瘤来源人工肝专用肝细胞株的构建研究。
- 邓丽娟李爱民赵芯梅王泽楠燕群罗晓蓓林建华张亚历刘思德
- 关键词：生物人工肝肝脏功能肝脏肿瘤生物材料原代肝细胞肝细胞株
- 无病毒可回复性肝细胞永生化载体的构建和结构鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的构建不携带病毒基因且可回复的肝细胞永生化载体,优化目前的肝细胞永生化方法。方法构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的无病毒可回复性肝细胞永生化载体,PCR扩增attB1-Kozak-hTERT(前端)-attB2和attB1-hTERT(后端)/E2A/eGFP/F2A/neo-attB2,对相应大小条带切胶回收后,通过Gateway重组克隆技术BR反应和LR反应,以及酶切连接,构建最终目的载体PB-hTERT/E2A/eGFP/F2A/neo。结果 PCR及酶切和测序鉴定均证实成功构建了肝细胞永生化载体PB-hTERT/E2A/eGFP/F2A/neo,目的基因序列与GenBank报道一致。结论成功构建不携带病毒基因且可实现回复的肝细胞永生化载体,有望提高永生化肝细胞临床应用的安全性。
- 李爱民王亚东王泽楠张洁罗晓蓓燕群白杨林建华刘思德
- 关键词：生物人工肝人端粒酶逆转录酶PIGGYBAC转座子
- 肝腺瘤组织肝脏功能水平的研究
- 2012年
- 目的初步探索肝腺瘤组织细胞所具备的合成、代谢、解毒等肝脏功能活性水平,为其能否成为人工肝新型细胞材料来源提供依据。方法收集近三年来南方医院手术切除并经病理证实为肝腺瘤的组织标本3例,HE染色后电子显微镜下观察其细胞形态及组织结构,并通过糖原染色、免疫组化及qRT-PCR等方法检测肝细胞合成、代谢和转化等功能相关基因的表达情况,同时与正常肝组织细胞的功能水平进行对比。结果肝腺瘤细胞形态与正常肝细胞相似,细胞核无明显异型性,qRT-PCR检测发现肝腺瘤各肝功能相关基因的表达均与正常肝组织细胞相当,部分指标甚至高于正常肝组织细胞。免疫组化检测发现肝腺瘤和正常肝组织中ALB、P450和CK18均有较强表达,AFP除一例肝腺瘤组织有部分表达外余2例和全部正常组织均无表达。结论肝腺瘤细胞有望在解决生物人工肝细胞来源缺乏问题上产生重大突破,有必要进一步开展肝腺瘤的建株研究。
- 燕群李爱民邓丽娟林建华王泽楠罗晓蓓王亚东张亚历刘思德
- 关键词：肝腺瘤生物人工肝生物材料肝细胞功能
