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PrV上海株TK基因缺失株的构建及其生物学特性研究: 提取伪狂犬病病毒(PrV)SH株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank发表的PrV基因序列(NC006151,BK001744),选择保守序列设计两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧(含部分TK基因)...; 苏鑫铭于春梅王敏秀曹瑞兵周斌陈溥言; 关键词：伪狂犬病病毒 TK基因生物学特性半数致死量; 文献传递

插入单个loxP位点的伪狂犬病病毒上海株TK基因缺失株的构建被引量：3: 2006年; 根据GenBank已发表的pEGFP-C1序列,设计并合成两对引物,PCR扩增出两端各含一loxP位点的GFP表达盒GFP-loxP。克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-GFP-loxP。基于同源重组原理,pSKLR-GFP-loxP与PRVSH株基因组DNA共转染293T细胞,在BrdU的筛选压力下,利用蚀斑法在TK-143细胞上筛选出表达GFP的TK基因缺失的重组毒株rPRV1。将表达Cre酶的质粒载体pPOG231与rPRV1基因组DNA共转染293T细胞,在Cre酶的作用下去除GFP表达盒以及一个loxP位点,筛选得到含单个loxP位点的重组病毒株rPRV2。PCR扩增证实所获得的重组病毒TK缺失270bp,只有一个34bp的loxP位点,并且能在RK-13细胞上稳定传代。LD50试验表明rPrV2的毒力下降。; 王敏秀苏鑫铭于春梅曹瑞兵陈溥言; 关键词：TK基因 CRE LOXP

PrV上海株TK基因缺失株的构建及其生物学特性研究: 伪狂犬病病毒(PrV)SH株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank发表的PrV基因序列(NC-006151,BK001744),选择保守序列设计两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧(含部分TK基因)的...; 苏鑫铭于春梅王敏秀曹瑞兵周斌陈溥言; 关键词：伪狂犬病病毒 TK基因生物学特性半数致死量基因序列

猪流行性腹泻病毒嵌套式RT-PCR检测方法的建立被引量：2: 2004年; Two pairs of primers were designed according to the N gene sequence of PEDV-CV777 strain in Genebank (No. AF353511). PCR amplification product of outer-primers was 1328bp, and the inter-primers amplification product was 538bp. With the primers, a nested PCR assay was established to detect PEDV. This method was sensitive and specific and could be used in PEDV diagnosis and epidemiological investigation.; 张素芳贾赟王敏秀倪艳秀何孔旺陈溥言; 关键词：猪流行性腹泻病毒 PED 分子生物学技术

猪α<,1>-干扰素全基因大肠杆菌偏嗜性密码子改造及高效原核表达: 为了比较研究本组已克隆和表达的poIFN-α(另文发表)与poIFN-α1的抗病毒等生物学特性的差异,本研究人工合成了密码子改造的poIFN-α1基因,在大肠杆菌中进行表达,并测定其抗病毒活性.; 曹瑞兵王旭东王敏秀郑其生李学仁陈德胜陈溥言; 关键词：干扰素大肠杆菌原核表达; 文献传递

从伪狂犬病病毒中删除Cre/LoxP介导的报告基因被引量：3: 2006年; 根据pEGFP-C1序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出两端各含一个同向LoxP位点的GFP表达盒,克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-G-LoxP。通过经典同源重组方法,得到表达GFP的TK基因缺失伪狂犬病毒重组毒株S03109。该重组病毒在转染了pOG231(表达Cre重组酶)的293T细胞上连续传代,筛选得到重组病毒株S0419。荧光显微镜观察、Western blot及PCR检测结果表明,S03109感染细胞后持续表达GFP,而S0419不表达GFP。PCR证实S0419为含单个LoxP位点的TK基因缺失病毒,并且在细胞培养上遗传稳定,测序结果(GenBank登录号AY822465)表明,在Cre重组酶的作用下,两个同向LoxP序列之间的GFP表达盒被正确除去。对BALB/c小鼠的半数致死量(LD50)及免疫保护实验结果表明,S03109和S0419对BALB/c小鼠的LD50值均大于3×105PFU,免疫BALB/c小鼠,攻毒后平均存活率分别为67.5%与70%。以上结果表明,利用Cre/LoxP位点特异性重组系统,成功去除了插入重组伪狂犬病病毒基因组中的GFP报告基因。; 苏鑫铭于春梅王敏秀陈勇军曹瑞兵周斌陈溥言; 关键词：疱疹病毒科伪狂犬病病毒 TK基因 CRE重组酶 GFP

猪α1-干扰素全基因大肠杆菌偏嗜性密码子改造及高效原核表达: 干扰素(interferon,IFN)是一类具有抗病毒、抗肿瘤和免疫激活功能的细胞因子。IFN可分为两个型,IFN-α多基因家族属于Ⅰ型干扰素,目前已知人类IFN-α可分为2个亚型,20多种。IFN-α因具有显著的抗病毒...; 曹瑞兵王旭东王敏秀郑其生李学仁陈德胜陈溥言; 文献传递

Cre//loxP系统在重组伪狂犬病病毒中的应用: 伪狂犬病/(Pseudorabies/)又称Aujeszky氏病,是由疱疹病毒科/(Herpesviridae/)α亚科中的猪疱疹病毒Ⅰ型/(suid herpes virus Ⅰ/)所引起的猪、牛、羊等多种家畜及野生动...; 王敏秀; 关键词：GFP 重组病毒; 文献传递

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王敏秀