黄晨
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：成都军区成都总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肺癌细胞条件培养液刺激成骨细胞增殖但抑制其分化被引量：2
- 2012年
- 目的:体外研究肺癌细胞条件培养液(conditioned medium,CM)对前骨细胞亚克隆14细胞株MC3T3-E1Subclone14增殖、分化和矿化的作用。方法:收集人肺腺癌A549细胞CM,以10%A549CM和20%A549CM加入MC3T3-E1Subclone14细胞培养液,采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测MC3T3-E1Subclone14细胞增殖,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测MC3T3-E1Subclone14细胞中ALP的活性,茜素红染色检测MC3T3-E1Subclone14细胞的矿化能力,实时荧光定量PCR检测MC3T3-E1Subclone14细胞中ALP、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、Ⅰ型胶原蛋白α1(collagen typeⅠalpha1,Col1α1)及RUNX2(runt-related transcription factor2)mRNA的表达。结果:MC3T3-E1Subclone14细胞培养24和48h时,10%A549CM组和20%A549CM组的细胞增殖率均高于不加A549CM的对照组(P<0.05);10%A549CM组和20%A549CM组MC3T3-E1Subclone14细胞中ALP活性低于对照组(P<0.05);A549CM组矿化结节的数量和面积均小于对照组(P<0.05);A549CM组MC3T3-E1Subclone14细胞中ALP、OCN、Col1α1和RUNX2mRNAs的表达水平明显低于对照组(P<0.05)。结论:肺癌A549细胞CM可促进MC3T3-E1Subclone14细胞的增殖,抑制其分化和矿化。
- 黄晨刘栓得许红飞张超初同伟周跃
- 关键词：肺肿瘤成骨细胞细胞增殖细胞分化
- PDGF-D抗体对体外破骨前体细胞分化过程影响的相关研究被引量：2
- 2013年
- 目的:用外源性血小板衍生生长因子-D抗体(Platelet-derived growth factor D antibody,PDGF-DAb)体外刺激外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),观察其对破骨前体细胞分化过程的影响。方法:采集血并分离单个核细胞,将所得细胞分为三组:诱导组(PDGF-D+PBMCs)、阻断组(PDGF-D+PDGF-D Ab)和对照组(细胞培养基+PBMCs)。于第15天应用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色和骨吸收实验观察破骨样细胞(Osteoclastlike cells,OLCs)的分化及活性;Real-time PCR检测OLCs标志基因TRAP、Cathepsin K、MMP-9(Matrix metalloproteinases 9)mR-NA的表达;Western blot检测各组细胞中Cathepsin K蛋白的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞上清液中MMP-9的表达。结果:TRAP染色和骨吸收实验见诱导组有大量具有骨吸收功能的OLCs,而阻断组和对照组均未见。阻断组和对照组TRAP、Cathepsin K、MMP-9 mRNA的相对表达量均显著低于诱导组(P<0.05),且二组间无显著差异(P>0.05)。对照组和阻断组中Cathepsin K蛋白(Western blot检测)和MMP-9(ELISA检测)表达均低于诱导组(P<0.05),且两组间无显著差异(P>0.05)。结论:外源性PDGF-D抗体可阻断由PDGF-D诱导的PBMCs向OLCs分化过程。
- 刘栓得黄晨许红飞胡旭张超初同伟
- 关键词：PBMCS
- MMP-3在强直性脊柱炎棘上韧带退变中的作用被引量：2
- 2012年
- 目的探讨基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase3,MMP-3)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)棘上韧带中的表达及在韧带退变中的作用。方法免疫组化检测MMP-3、Ⅰ型胶原在韧带中的表达,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测韧带中蛋白聚糖(proteoglycan)的含量,扫描电镜及透射电镜对棘上韧带进行形态学观察。Image-Pro Plus(IPP)量化分析胶原原纤维分布密度及胶原阳性染色面积百分比。结果 MMP-3在研究组韧带血管平滑肌细胞及内皮细胞中高表达,对照组未见表达;蛋白聚糖含量对照组为(19.462±2.174)μg/mg,研究组为(7.477±2.512)μg/mg;电镜下对照组胶原纤维排列规律,研究组胶原原纤维裸露明显,大量基质降解;对照组胶原原纤维分布密度为(218.02±10.39)/μm2,研究组为(122.47±22.42)/μm2;对照组Ⅰ型胶原的阳性染色面积百分比为(60.23±3.41)%,研究组为(43.37±5.96)%,2组差异有统计学意义(P<0.05)。结论活动期AS患者棘上韧带血管中MMP-3高表达,可能通过促进血管生长、降解蛋白聚糖、破坏韧带正常的微观结构,从而参与韧带退变骨化的病理过程。
- 许红飞初同伟张超张莹黄晨刘栓得
- 关键词：强直性脊柱炎基质金属蛋白酶3蛋白聚糖
- 肺癌细胞条件培养液活化Notch通路促进破骨细胞分化被引量：1
- 2014年
- 目的 :体外检测肺腺癌A549细胞条件培养液(conditioned medium,CM)对人外周血CD14+单核细胞破骨分化和增殖的影响,探讨Notch通路相关因子在其中所起的作用。方法 :用含巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)的α-MEM细胞培养液培养健康成人外周血CD14+单核细胞,作为对照组;用M-CSF和人肺腺癌A549细胞CM培养人外周血CD14+单核细胞,作为A549 CM组;用M-CSF、A549细胞CM和γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S-苯基甘氨酸t-丁酯{N-[N-(3,5-dil uorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl ester,DAPT}培养人外周血CD14+单核细胞,作为DAPT组。各组均在培养6 d后加入核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)继续培养。实时荧光定量-PCR法检测破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CK)、降钙素受体(calcitonin receptor,CTR)及Notch靶基因HES-1、HEY-1的mRNA表达;TRAP染色法检测破骨细胞形成;扫描电子显微镜下观察破骨细胞溶骨功能;免疫荧光法检测Notch活性片段NICD的表达情况;CCK-8法检测CD14+单核细胞增殖情况。结果 :A549 CM组TRAP、CK和CTR表达水平以及TRAP+多核细胞数、溶骨面积和细胞核内Notch活性片段NICD的荧光强度均较对照组明显上调(P<0.05),而DAPT组较A549 CM组明显下调,但仍高于对照组(P<0.05);A549CM组HES-1和HEY-1 mRNA的表达水平明显高于DAPT组和对照组(P<0.05),后2者无明显差异;A549CM组细胞增殖率高于对照组,而DAPT组的细胞增殖率最高。结论 :肺腺癌A549 CM可能通过活化Notch通路,促进CD14+单核细胞向破骨细胞分化;同时Notch通路活化可抑制CD14+单核细胞增殖。
- 王汝杰沈伟伟黄晨刘复州胡旭张超初同伟周跃
- 关键词：破骨细胞NOTCH细胞分化
- CCR1参与肺癌分泌因子诱导破骨细胞生成被引量：3
- 2012年
- 目的建立肺癌细胞与单核/巨噬细胞间接共培养模型,观察在肺癌细胞条件培养基作用下抑制前体破骨细胞(RAW264.7)的CCR1对破骨细胞生成的影响。方法收集肺癌细胞A549的条件培养基,将条件培养基以不同浓度加入RAW264.7培养基中共培养,在共培养体系中加或不加CCR1特异性拮抗剂BX471。细胞培养至第5天进行TRAP染色,提取不同条件作用后RAW264.7细胞的总RNA,采用Real-time PCR检测CCR1及破骨细胞标志基因cathepsin K、TRAP mRNA的表达,使用细胞免疫荧光和Western blot检测不同时期RAW264.7细胞中CCR1及Cathepsin K蛋白的表达量。结果加入A549细胞条件培养基的RAW264.7细胞TRAP阳性细胞显著增多,条件培养基明显上调RAW264.7的CCR1、Cathepsin K、TRAP的表达且呈浓度依赖,CCR1特异性拮抗剂BX471可抑制肺癌分泌因子对破骨细胞的活化。结论肺癌细胞分泌因子可促进破骨前体细胞向破骨细胞分化,CCR1参与了肺癌细胞分泌因子对破骨细胞的活化过程。
- 黄晨余世明刘栓得张超初同伟周跃
- 关键词：肺癌骨转移破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶
- CCN3在肺癌骨转移灶中高表达及其对破骨细胞的作用被引量：1
- 2012年
- 背景与目的:肺癌易转移至骨并导致溶骨性破坏的具体机制目前还不清楚,本研究观察CCN3在肺癌骨转移灶中的表达水平以及在前体成骨细胞(MC3T3-E1)与前体破骨细胞(RAW264.7)共培养体系研究CCN3重组蛋白对前体破骨细胞分化的影响。方法:采用免疫组化检测9例肺癌骨转移转灶组织及相应癌旁组织中CCN3的表达;构建RAW264.7细胞与MC3T3-E1细胞共培养模型,向共培养体系中加或不加800 ng/mL的CCN3重组蛋白,采用Real-time PCR检测RAW264.7细胞的破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CK)、降钙素受体(calcitonin receptor,CTR)mRNA的表达,并通过TRAP染色法对破骨细胞进行鉴定。结果:肺癌骨转移灶组织中的CCN3表达量明显高于癌旁组织;CCN3重组蛋白可显著促进共培养体系中的RAW264.7细胞的破骨细胞标志基因TRAP、CK、CTR的mRNA的表达量;TRAP染色可见对照组TRAP阳性细胞数[(6.2±1.48)个]明显低于加了CCN3重组蛋白的试验组[(21.4±3.04)个],差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CCN3在肺癌骨转移灶中高表达及其可诱导破骨细胞分化,CCN3可能在肺癌骨转移和溶骨性破坏中具有重要作用。
- 黄晨胡旭张超刘栓得初同伟周跃
- 关键词：骨转移成骨细胞破骨细胞
- 血小板衍生生长因子D对体外破骨细胞分化过程的影响被引量：1
- 2013年
- 目的用外源性血小板衍生生长因子D(platelet-derived growth factor D,PDGF-D)体外刺激外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),观察其对破骨细胞(osteoclasts,OCs)分化过程的影响。方法采集外周血并分离单个核细胞,实验分为3组:阳性对照组为NF-κB配体激活因子(receptor or activator of NF-κB Ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)联合诱导,阴性对照组(细胞培养基)和实验组(PDGF-D)。应用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察各组破骨细胞前体细胞向破骨样细胞(osteo-clast like cells,OLCs)的分化情况,Real-time PCR检测破骨细胞标志基因TRAP、Cathepsin K、MMP-9mRNA的表达情况,Western blot检测各组细胞中Cathepsin K蛋白的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞上清液中MMP-9的表达。结果①TRAP染色可见阳性对照组和实验组的OLCs显著多于阴性对照组。②阳性对照组和实验组TRAP、Cathepsin K、MMP-9mRNA的相对表达量均显著高于阴性对照组(P<0.05),但阳性对照组和实验组间无统计学差异(P>0.05)。③阳性对照组和实验组MMP-9(ELISA检测)、Cathepsin K蛋白(Western blot检测)表达均显著高于阴性对照组(P<0.05),但阳性对照组和实验组间无统计学差异(P>0.05)。结论外源性PDGF-D可在无RANKL/M-CSF的条件下于体外独立诱导破骨前体细胞向OLCs分化。
- 刘栓得初同伟张超黄晨余世明周跃
- 关键词：破骨细胞
