刘栓得
- 作品数:10 被引量:14H指数:2
- 供职机构:第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- CCN3在肺癌骨转移灶中高表达及其对破骨细胞的作用被引量:1
- 2012年
- 背景与目的:肺癌易转移至骨并导致溶骨性破坏的具体机制目前还不清楚,本研究观察CCN3在肺癌骨转移灶中的表达水平以及在前体成骨细胞(MC3T3-E1)与前体破骨细胞(RAW264.7)共培养体系研究CCN3重组蛋白对前体破骨细胞分化的影响。方法:采用免疫组化检测9例肺癌骨转移转灶组织及相应癌旁组织中CCN3的表达;构建RAW264.7细胞与MC3T3-E1细胞共培养模型,向共培养体系中加或不加800 ng/mL的CCN3重组蛋白,采用Real-time PCR检测RAW264.7细胞的破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CK)、降钙素受体(calcitonin receptor,CTR)mRNA的表达,并通过TRAP染色法对破骨细胞进行鉴定。结果:肺癌骨转移灶组织中的CCN3表达量明显高于癌旁组织;CCN3重组蛋白可显著促进共培养体系中的RAW264.7细胞的破骨细胞标志基因TRAP、CK、CTR的mRNA的表达量;TRAP染色可见对照组TRAP阳性细胞数[(6.2±1.48)个]明显低于加了CCN3重组蛋白的试验组[(21.4±3.04)个],差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CCN3在肺癌骨转移灶中高表达及其可诱导破骨细胞分化,CCN3可能在肺癌骨转移和溶骨性破坏中具有重要作用。
- 黄晨胡旭张超刘栓得初同伟周跃
- 关键词:骨转移成骨细胞破骨细胞
- 肺癌细胞条件培养液刺激成骨细胞增殖但抑制其分化被引量:2
- 2012年
- 目的:体外研究肺癌细胞条件培养液(conditioned medium,CM)对前骨细胞亚克隆14细胞株MC3T3-E1Subclone14增殖、分化和矿化的作用。方法:收集人肺腺癌A549细胞CM,以10%A549CM和20%A549CM加入MC3T3-E1Subclone14细胞培养液,采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测MC3T3-E1Subclone14细胞增殖,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测MC3T3-E1Subclone14细胞中ALP的活性,茜素红染色检测MC3T3-E1Subclone14细胞的矿化能力,实时荧光定量PCR检测MC3T3-E1Subclone14细胞中ALP、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、Ⅰ型胶原蛋白α1(collagen typeⅠalpha1,Col1α1)及RUNX2(runt-related transcription factor2)mRNA的表达。结果:MC3T3-E1Subclone14细胞培养24和48h时,10%A549CM组和20%A549CM组的细胞增殖率均高于不加A549CM的对照组(P<0.05);10%A549CM组和20%A549CM组MC3T3-E1Subclone14细胞中ALP活性低于对照组(P<0.05);A549CM组矿化结节的数量和面积均小于对照组(P<0.05);A549CM组MC3T3-E1Subclone14细胞中ALP、OCN、Col1α1和RUNX2mRNAs的表达水平明显低于对照组(P<0.05)。结论:肺癌A549细胞CM可促进MC3T3-E1Subclone14细胞的增殖,抑制其分化和矿化。
- 黄晨刘栓得许红飞张超初同伟周跃
- 关键词:肺肿瘤成骨细胞细胞增殖细胞分化
- PDGF-D抗体对体外破骨前体细胞分化过程影响的相关研究被引量:2
- 2013年
- 目的:用外源性血小板衍生生长因子-D抗体(Platelet-derived growth factor D antibody,PDGF-DAb)体外刺激外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),观察其对破骨前体细胞分化过程的影响。方法:采集血并分离单个核细胞,将所得细胞分为三组:诱导组(PDGF-D+PBMCs)、阻断组(PDGF-D+PDGF-D Ab)和对照组(细胞培养基+PBMCs)。于第15天应用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色和骨吸收实验观察破骨样细胞(Osteoclastlike cells,OLCs)的分化及活性;Real-time PCR检测OLCs标志基因TRAP、Cathepsin K、MMP-9(Matrix metalloproteinases 9)mR-NA的表达;Western blot检测各组细胞中Cathepsin K蛋白的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞上清液中MMP-9的表达。结果:TRAP染色和骨吸收实验见诱导组有大量具有骨吸收功能的OLCs,而阻断组和对照组均未见。阻断组和对照组TRAP、Cathepsin K、MMP-9 mRNA的相对表达量均显著低于诱导组(P<0.05),且二组间无显著差异(P>0.05)。对照组和阻断组中Cathepsin K蛋白(Western blot检测)和MMP-9(ELISA检测)表达均低于诱导组(P<0.05),且两组间无显著差异(P>0.05)。结论:外源性PDGF-D抗体可阻断由PDGF-D诱导的PBMCs向OLCs分化过程。
- 刘栓得黄晨许红飞胡旭张超初同伟
- 关键词:PBMCS
- MMP-3在强直性脊柱炎棘上韧带退变中的作用被引量:2
- 2012年
- 目的探讨基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase3,MMP-3)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)棘上韧带中的表达及在韧带退变中的作用。方法免疫组化检测MMP-3、Ⅰ型胶原在韧带中的表达,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测韧带中蛋白聚糖(proteoglycan)的含量,扫描电镜及透射电镜对棘上韧带进行形态学观察。Image-Pro Plus(IPP)量化分析胶原原纤维分布密度及胶原阳性染色面积百分比。结果 MMP-3在研究组韧带血管平滑肌细胞及内皮细胞中高表达,对照组未见表达;蛋白聚糖含量对照组为(19.462±2.174)μg/mg,研究组为(7.477±2.512)μg/mg;电镜下对照组胶原纤维排列规律,研究组胶原原纤维裸露明显,大量基质降解;对照组胶原原纤维分布密度为(218.02±10.39)/μm2,研究组为(122.47±22.42)/μm2;对照组Ⅰ型胶原的阳性染色面积百分比为(60.23±3.41)%,研究组为(43.37±5.96)%,2组差异有统计学意义(P<0.05)。结论活动期AS患者棘上韧带血管中MMP-3高表达,可能通过促进血管生长、降解蛋白聚糖、破坏韧带正常的微观结构,从而参与韧带退变骨化的病理过程。
- 许红飞初同伟张超张莹黄晨刘栓得
- 关键词:强直性脊柱炎基质金属蛋白酶3蛋白聚糖
- 脊索瘤新型标记物Brachyury相关研究的进展
- 2013年
- 脊索瘤是一种较为罕见的恶性原发性骨肿瘤,它起源于原始胚胎脊索组织残余物,其年发生率约为0.51~8.00/1000000,占原发恶性骨肿瘤的1%~4%。脊索瘤好发于脊柱中轴的两端,其中,骶尾部占40%~50%,颅底部占35%~40%,只有少数发生于其余椎体,约占15%~20。
- 刘栓得初同伟
- 关键词:脊索瘤肿瘤标记物
- 血小板衍生生长因子D对体外破骨细胞分化过程的影响被引量:1
- 2013年
- 目的用外源性血小板衍生生长因子D(platelet-derived growth factor D,PDGF-D)体外刺激外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),观察其对破骨细胞(osteoclasts,OCs)分化过程的影响。方法采集外周血并分离单个核细胞,实验分为3组:阳性对照组为NF-κB配体激活因子(receptor or activator of NF-κB Ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)联合诱导,阴性对照组(细胞培养基)和实验组(PDGF-D)。应用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察各组破骨细胞前体细胞向破骨样细胞(osteo-clast like cells,OLCs)的分化情况,Real-time PCR检测破骨细胞标志基因TRAP、Cathepsin K、MMP-9mRNA的表达情况,Western blot检测各组细胞中Cathepsin K蛋白的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞上清液中MMP-9的表达。结果①TRAP染色可见阳性对照组和实验组的OLCs显著多于阴性对照组。②阳性对照组和实验组TRAP、Cathepsin K、MMP-9mRNA的相对表达量均显著高于阴性对照组(P<0.05),但阳性对照组和实验组间无统计学差异(P>0.05)。③阳性对照组和实验组MMP-9(ELISA检测)、Cathepsin K蛋白(Western blot检测)表达均显著高于阴性对照组(P<0.05),但阳性对照组和实验组间无统计学差异(P>0.05)。结论外源性PDGF-D可在无RANKL/M-CSF的条件下于体外独立诱导破骨前体细胞向OLCs分化。
- 刘栓得初同伟张超黄晨余世明周跃
- 关键词:破骨细胞
- 不同前列腺癌细胞对成骨前体细胞增殖和成熟能力的影响
- 2013年
- 目的 :探讨前列腺癌LNCaP和PC-3细胞条件培养液(conditioned medium,CM)对成骨前体细胞MC3T3-E1增殖和分化的影响。方法 :分别用含20%LNCaP CM、20%PC-3 CM和不含CM的α-MEM培养液(作为对照组)处理MC3T3-E1细胞。CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测试剂盒检测各组细胞中ALP的活性,茜素红染色法检测各组细胞的钙化情况,实时荧光定量-PCR法检测各组细胞中Ⅰ型胶原蛋白α1(collagen typeⅠalpha 1,Col1α1)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)和RUNX2(runt-related transcription factor 2)的mRNA表达水平。结果 :与对照组和LNCaP CM组相比,PC-3CM组MC3T3-E1细胞的增殖能力明显增高(P<0.05);LNCaP CM组MC3T3-E1细胞中ALP的活性明显高于对照组(P<0.05),钙化面积大于对照组(P<0.05);PC-3 CM组MC3T3-E1细胞中ALP的活性较对照组明显降低(P<0.05),钙化面积明显小于对照组(P<0.05);LNCaP CM组MC3T3-E1细胞中Col1α1、OCN和RUNX2的mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.05),而PC-3 CM组MC3T3-E1细胞中Col1α1、OCN和RUNX2的mRNA表达水平均明显低于对照组(P<0.05)。结论 :PC-3 CM可明显促进成骨前体细胞增殖,但抑制其分化成熟;而LNCaP CM可显著促进成骨前体细胞分化成熟,说明该模型能够充分反映不同前列腺癌细胞对成骨前体细胞增殖和分化的差异,可以作为后续研究前列腺癌骨转移机制的体外模型。
- 刘复州邱浩王汝杰邹传奇刘栓得胡旭沈伟伟张超周跃初同伟
- 关键词:前列腺肿瘤细胞增殖细胞分化体外研究
- PDGF-D在转移性骨肿瘤中对破骨样细胞分化成熟影响的研究
- 研究背景和目的: 诸多恶性肿瘤,如肺癌,乳腺癌,前列腺癌,甲状腺癌等,于疾病晚期常常发生肿瘤骨转移,并多表现为溶骨性骨破坏从而引发众多种严重并发症,如骨质疏松、进行性顽固性骨痛、病理性骨折、脊髓压迫综合征、高钙血症等,这...
- 刘栓得
- 关键词:转移性骨肿瘤外周血单核细胞
- 文献传递
- CD147抗体对破骨细胞中基质金属蛋白酶活性影响的体外研究被引量:3
- 2012年
- 目的:建立人破骨细胞(Osteoclast,OCs)体外诱导分化模型,研究CD147单克隆抗体对OCs分化过程中基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases 9,MMP-9)和基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinases 2,MMP-2)表达及活性的影响。方法:通过采集健康成年志愿者外周血所分离的单个核细胞贴壁培养,应用NF-κB配体激活因子(Receptor or Activator ofNF-KB Ligand,RANKL)与巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage colony stimulating factor,M-CSF)诱导单个核细胞向OCs分化。本实验分为抗体组(RANKL+M-CSF+CD147单克隆抗体)与对照组(RANKL+M-CSF)。抗酒石酸酸性磷酸酶染色(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)与骨吸收实验检测鉴定OCs分化及活性情况,Real-Time PCR技术检测CD147、MMP-9和MMP-2 mRNA在破骨前体细胞(Osteoclast precursor cells,OPCs)中表达情况,明胶酶谱法检测细胞培养上清中MMP-9、MMP-2酶蛋白的活性变化情况。结果:①对照组经TRAP染色和骨吸收实验检测到破骨样细胞形成并具有骨吸收功能,而抗体组OCs分化及活性均受到抑制;②在24、48小时时相点上抗体组CD147、MMP-2及MMP-9 mRNA的相对表达量均低于相应的对照组(P<0.05),且MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量与CD147 mRNA的表达量呈正相关。③明胶酶谱检测细胞培养上清,可见在24、48小时两时相点上抗体组OCs细胞中MMP-2、MMP-9酶原及活性酶的酶解量均较相应对照组明显降低(P<0.05)。结论:CD147单克隆抗体可以抑制OCs分化成熟过程中MMP-9及MMP-2的表达与活性;CD147对MMP-2、MMP-9活性的调节,可能是其对OCs活化调节的机制之一。
- 余世明初同伟廖通权胡旭刘栓得周跃
- 关键词:破骨细胞CD147基质金属蛋白酶明胶酶谱
- CCR1参与肺癌分泌因子诱导破骨细胞生成被引量:3
- 2012年
- 目的建立肺癌细胞与单核/巨噬细胞间接共培养模型,观察在肺癌细胞条件培养基作用下抑制前体破骨细胞(RAW264.7)的CCR1对破骨细胞生成的影响。方法收集肺癌细胞A549的条件培养基,将条件培养基以不同浓度加入RAW264.7培养基中共培养,在共培养体系中加或不加CCR1特异性拮抗剂BX471。细胞培养至第5天进行TRAP染色,提取不同条件作用后RAW264.7细胞的总RNA,采用Real-time PCR检测CCR1及破骨细胞标志基因cathepsin K、TRAP mRNA的表达,使用细胞免疫荧光和Western blot检测不同时期RAW264.7细胞中CCR1及Cathepsin K蛋白的表达量。结果加入A549细胞条件培养基的RAW264.7细胞TRAP阳性细胞显著增多,条件培养基明显上调RAW264.7的CCR1、Cathepsin K、TRAP的表达且呈浓度依赖,CCR1特异性拮抗剂BX471可抑制肺癌分泌因子对破骨细胞的活化。结论肺癌细胞分泌因子可促进破骨前体细胞向破骨细胞分化,CCR1参与了肺癌细胞分泌因子对破骨细胞的活化过程。
- 黄晨余世明刘栓得张超初同伟周跃
- 关键词:肺癌骨转移破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶