刘小宁
- 作品数：86 被引量：212H指数：8
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 杨枝把诱集棉铃虫技术与作用机理被引量：2
- 2008年
- 杨树枝把是棉铃虫预测预报和防治的重要手段之一,其使用效果在棉铃虫的3、4代发生期更优于性诱剂。概述了诱集棉铃虫的杨树枝把制作、使用技术及作用效果,分析了杨枝把诱集棉铃虫的性别、代次差异,诱集时间的特异性,以及杨树枝叶挥发性物质的分离提取,室内分析与田间诱集测试,阐述了棉铃虫诱集杨树枝把的作用机理,并分析了杨树枝把在害虫防治中的应用前景。
- 刘宁刘小宁李娜边洋
- 关键词：杨枝把棉铃虫诱集
- 一种适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的方法及试剂盒
- 本发明公开一种适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的方法及试剂盒。通过获得敏感品系棉蚜用0.05%的TritonX-100将杀虫剂稀释并获得药剂诊断浓度50mg·L<Sup>-1</Sup>和60mg·L<Sup>-1</S...
- 刘小宁刘宁张学涛高希武张东海李芬马纪
- 文献传递
- 荒漠昆虫小胸鳖甲几丁质酶抗血清的制备及抗体效价检测被引量：1
- 2014年
- 目的几丁质酶是昆虫重要的防御物质,本研究采用DNA-蛋白质联合免疫策略制备荒漠昆虫小胸鳖甲几丁质酶(MpCHI786)的抗血清,用于检测小胸鳖甲在外界不良条件下几丁质酶的变化。方法从小胸鳖甲成虫中提取总RNA,反转录后RT-PCR扩增Mpchi786 cDNA,构建原核表达载体pET30a-Mpchi786,在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达获得融合蛋白His-MpCHI786。对融合蛋白切胶纯化后与弗氏佐剂混合作为抗原。另外,构建真核表达质粒pcDNA3.0-Mpchi786,对小鼠尾静脉高压注射,8 h后RT-PCR检测其在肝脏的瞬时表达。以pcDNA3.0-Mpchi786肌肉注射免疫小鼠3次后,再用His-MpCHI786融合蛋白加强免疫2次,DNA免疫和免疫结束后收集免疫小鼠的血清,ELISA和Western blot法检测抗血清效价和特异性。结果 RT-PCR结果显示尾静脉高压注射8 h后,pcDNA3.0-Mpchi786质粒在小鼠肝脏有特异性表达。Western blot检测表明,用His-MpCHI786融合蛋白作为抗原,pcDNA3.0-Mpchi786DNA质粒免疫3次的抗血清和His-MpCHI786融合蛋白加强免疫2次后的抗血清都显示了特异性反应条带。ELISA检测结果显示抗血清效价高达1∶204 800以上。结论利用DNA-蛋白质联合免疫法能够获得效价高、特异性的小胸鳖甲几丁质酶MpCHI786的抗血清。
- 陆雪莹李洁琼庄淑珍刘小宁马纪
- 关键词：几丁质酶抗血清抗体效价
- 有机棉的种植与加工被引量：3
- 2002年
- 刘宁于明刘小宁张鹏忠
- 关键词：有机棉
- 2-十三烷酮胁迫下棉铃虫FoxAl调控CYP6B6的表达
- 2022年
- 旨在研究2-十三烷酮胁迫对棉铃虫Helicoverpa armigera叉头框A类似蛋白(forkhead box A-like protein,FoxAl)基因表达水平的影响,及FoxAl蛋白是如何调控解毒酶基因CYP6B6表达,为进一步明确FoxAl参与棉铃虫解毒代谢和生长发育过程提供依据。通过酵母自激活检测FoxAl蛋白的转录激活能力;通过凝胶阻滞检测FoxAl蛋白与CYP6B6启动子的结合能力;通过RNAi沉默棉铃虫5龄幼虫中肠内FoxAl基因,检测不同时间(24,48,72和 96 h)后FoxAl和CYP6B6的表达变化情况;最后通过qPCR检测不同浓度(5,10和20 mg/g)2-十三烷酮处理不同时间(6,12,20,30和48 h)后棉铃虫6龄幼虫中肠内FoxAl和CYP6B6的表达谱,并分析FoxAl和CYP6B6表达谱的相关性。FoxAl蛋白具有激活酵母MEL1报告基因转录的能力,且该蛋白能与CYP6B6启动子中响应植物次生物质应答的核心片段结合。利用dsFoxAl沉默棉铃虫5龄幼虫中肠内FoxAl的表达量后,CYP6B6的表达量也显著降低。2-十三烷酮处理棉铃虫6龄幼虫后,中肠内FoxAl和CYP6B6的表达量变化情况相似,基本都呈抛物线趋势,在短时间12 h内两者的表达量迅速上升后,随胁迫时间的延长两者的表达量逐渐降低;此外,FoxAl和CYP6B6的表达量变化基本呈正相关,甚至在20 mg/g的胁迫浓度以及12 h和48 h的胁迫时间下两者都是高度正相关(r=0.819,P=0.045;r=0.987,P=0.007;r=0.978,P=0.011)。棉铃虫FoxAl蛋白可能是CYP6B6的转录激活因子,在植物次生物质2-十三烷酮短期胁迫下,FoxAl的表达量增加,进一步上调CYP6B6的表达,从而参与棉铃虫对2-十三烷酮的解毒作用。
- 魏倩刘小宁赵洁
- 关键词：棉铃虫细胞色素P450酶转录因子
- 酵母单杂交筛选棉铃虫CYP6B6基因相应2-十三烷酮过量表达的调控因子
- 昆虫细胞色素P450 在有毒物质的解毒过程中起重要的作用.因为CYP6B6 的表达使棉铃虫可以耐受2-十三烷酮,这个表达过程受DNA 序列和转录调控因子的控制,因此CYP6B6 的2-十三烷酮相应元件和转录调控因子对于棉...
- 赵洁刘小宁
- 关键词：棉铃虫酵母单杂交
- 棉铃虫β-actin基因的克隆、表达及多克隆抗体制备被引量：3
- 2015年
- 克隆获得了棉铃虫β-actin基因,生物信息学分析表明,基因序列长1 131 bp,编码376个氨基酸,理论分子量为41.77 k D,理论等电点5.16。氨基酸序列与其他物种肌动蛋白比较有98%-99%的一致性,与鳞翅目的家蚕具有99%的一致性。分析棉铃虫β-actin和小家鼠β-actin的抗原决定簇位点,发现两者抗原表位有70.63%的一致性。同时原核表达、纯化了棉铃虫β-actin蛋白,Western-blot结果表明表达正确。将纯化后的蛋白免疫ICR小鼠4次后,小鼠抗血清效价最高可达388 800,并且能与天然棉铃虫蛋白特异性结合。
- 黄丽娜程婷婷王新绘魏原杰赵洁李金耀刘小宁
- 关键词：棉铃虫Β-ACTIN克隆原核表达多克隆抗体
- 新疆一枝蒿与黄花蒿粗提物抗棉铃虫与棉蚜的特性研究被引量：5
- 2011年
- 【目的】为利用新疆一枝蒿研制新型无公害植物杀虫药剂奠定基础。【方法】采用97%乙醇对新疆一枝蒿(Artemisia rupestris)和黄花蒿(Artemisia annua)进行了总提,将所得粗提物对棉花重要害虫—棉铃虫(Helicoverpa armigera)与棉蚜(Aphis gossypii)进行了生物活性测定,同时还使用新疆一枝蒿粗提物对棉铃虫开展了室内、室外的驱避实验。【结果】(1)新疆一枝蒿与黄花蒿粗提物对棉铃虫半致死浓度LC50分别为3.515 7与4.781 1 mL/100g;(2)新疆一枝蒿与黄花蒿粗提物对棉蚜半致死浓度LC50分别为0.956与2.047 4 g/100 mL;(3)新疆一枝蒿粗提物对棉铃虫室内室外趋避率分别为28.39%与80.68%。【结论】新疆一枝蒿粗提物对棉铃虫与棉蚜的毒杀作用较好并高于黄花蒿粗提物,且新疆一枝蒿粗提物对棉铃虫有驱避和生长抑制等作用。
- 何海黄丽张学涛张雷李芬刘小宁
- 关键词：新疆一枝蒿黄花蒿棉铃虫棉蚜粗提物
- 准噶尔小胸鳖甲短时低温胁迫响应的转录组分析被引量：13
- 2016年
- 【目的】拟步甲科昆虫小胸鳖甲Microdera punctipennis是分布于中国新疆古尔班通古特沙漠的特有物种,具有很强的耐寒性,但其低温响应的分子机制尚不明确。本研究旨在利用转录组测序技术丰富小胸鳖甲的已知基因信息,分析在短时低温胁迫下,上调表达基因的主要类群及参与的主要代谢通路。【方法】利用Trinity软件对分别在4℃低温和25℃(对照)下处理3 h的小胸鳖甲成虫RNA-Seq数据进行从头组装,利用Blast2go软件进行基因注释。通过DESeq和GFOLD软件分析差异表达基因,并对上调表达基因进行GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)代谢途径富集分析。【结果】测序过滤后得到68 165 001个有效读序,51 712个平均长度为984 bp的非冗余基因,其中29 925个基因(约57.87%)有同源序列(E-value<10-5),与拟步甲科的赤拟谷盗Tribolium castaneum相应基因相似性最高(核苷酸序列一致性为72.75%)。低温响应上调表达基因有514个,富集到35个GO类群,18个KEGG途径。其中胁迫响应类群、生物调节类群和免疫系统过程类群都占有重要比例,嘌呤代谢、硫胺素代谢、糖酵解/糖异生等代谢通路显著富集。在胁迫响应类群中,热激蛋白Hsp90基因、超氧化物歧化酶(SOD)基因和钙联接蛋白Calnexin基因等8个非生物胁迫相关基因显著上调表达。【结论】荒漠昆虫小胸鳖甲低温转录组揭示,在4℃冷驯化过程中,代谢过程、胁迫响应、生物调节和免疫系统等生物学过程相关基因表达显著上调,其中几个非生物胁迫响应基因提示小胸鳖甲可能从分子伴侣、细胞周期阻滞、线粒体稳定性、抗氧化胁迫等多方面应对低温胁迫。KEGG富集分析所揭示的小胸鳖甲在低温下的转录组代谢通路与其他物种有较大差异。研究结果为后续生物信息学分析及小胸鳖甲耐寒关键基因的发掘及耐寒机制的揭示提供了基础数据。
- 库尔班·吐松陆雪莹刘小宁马纪
- 关键词：低温胁迫冷驯化转录组差异基因
- 荒漠甲虫小胸鳖甲几丁质酶基因MpCht8c的克隆、鉴定与低温表达被引量：2
- 2019年
- 为了挖掘荒漠昆虫小胸鳖甲Microdera punctipennis的耐寒性相关基因,从其4℃转录组数据库筛选出差异表达的几丁质酶基因片段394seq2,检测其编码蛋白的几丁质酶活性,研究该基因的表达对低温胁迫的响应情况。采用RACE技术扩增394seq2的5′端和3′端,克隆全长序列,将其ORF构建至原核表达载体pET28a,导入Transetta(DE3)感受态细胞,诱导表达融合蛋白,Western blot法检测表达蛋白的正确性;二硝基水杨酸法测定几丁质酶活性,qRT-PCR技术探究低温表达谱。结果表明,394seq2的5′-UTR为39 bp,3′-UTR为181 bp;ORF为1 140 bp。系统进化树显示该序列与赤拟谷盗几丁质酶8(TcCHT8)聚为一支,命名为MpCht8c。MpCht8c编码379个氨基酸,分子量为41.2 kDa,理论等电点pI为4.67。MpCHT8c含有完整的几丁质酶结构基序,其N端含有几丁质酶催化域,内有一个类18家族几丁质酶的保守基序KXXXXXGGW,中部是一段富PEST的连接区,C端是几丁质酶结合域,属于IV型昆虫几丁质酶。Western blot结果表明His-MpCHT8c在大肠杆菌中正确表达;融合蛋白粗酶液的几丁质酶活性为1.89 U/mL。在4℃冷胁迫0.5 h和5-9 h时Mpcht8c出现两个上调表达峰值,约为对照的2倍。研究表明荒漠昆虫小胸鳖甲的几丁质酶MpCHT8c具有几丁质酶活性,MpCht8c基因的表达可快速响应4℃低温胁迫。研究结果有助于深入研究几丁质酶在小胸鳖甲耐寒性方面的作用机理。
- 郭晓星蔡卿龄刘小宁马纪
- 关键词：荒漠昆虫几丁质酶融合蛋白
