赵洁
- 作品数：21 被引量：42H指数：4
- 供职机构：新疆大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家公益性行业科研专项转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生社会学更多>>
- 一种抗棉铃虫转基因棉花的制备方法
- 本发明公开了一种抗棉铃虫转基因棉花的制备方法，通过结合花粉管通道转化技术和植物诱导昆虫RNAi技术，将能表达针对棉铃虫中肠CYP6B6基因的dsRNA的植物干扰片段转入棉花基因组内，并通过棉花的自花授粉育种，获得能持续产...
- 刘小宁赵洁刘宁李芬王威颜国荣
- 酵母单杂交筛选棉铃虫CYP6B6基因相应2-十三烷酮过量表达的调控因子
- 昆虫细胞色素P450 在有毒物质的解毒过程中起重要的作用.因为CYP6B6 的表达使棉铃虫可以耐受2-十三烷酮,这个表达过程受DNA 序列和转录调控因子的控制,因此CYP6B6 的2-十三烷酮相应元件和转录调控因子对于棉...
- 赵洁刘小宁
- 关键词：棉铃虫酵母单杂交
- 棉铃虫β-actin基因的克隆、表达及多克隆抗体制备被引量：3
- 2015年
- 克隆获得了棉铃虫β-actin基因,生物信息学分析表明,基因序列长1 131 bp,编码376个氨基酸,理论分子量为41.77 k D,理论等电点5.16。氨基酸序列与其他物种肌动蛋白比较有98%-99%的一致性,与鳞翅目的家蚕具有99%的一致性。分析棉铃虫β-actin和小家鼠β-actin的抗原决定簇位点,发现两者抗原表位有70.63%的一致性。同时原核表达、纯化了棉铃虫β-actin蛋白,Western-blot结果表明表达正确。将纯化后的蛋白免疫ICR小鼠4次后,小鼠抗血清效价最高可达388 800,并且能与天然棉铃虫蛋白特异性结合。
- 黄丽娜程婷婷王新绘魏原杰赵洁李金耀刘小宁
- 关键词：棉铃虫Β-ACTIN克隆原核表达多克隆抗体
- 基于傅利叶拉曼光谱的薰衣草精油品种的快速检测方法
- 本发明涉及薰衣草精油辨别技术领域，是一种基于傅利叶拉曼光谱的薰衣草精油品种的快速检测方法；按下述步骤进行：第一步，光谱采集；第二步，特征波长的选择分析；第三步，待测样品的识别，将预处理后的三个特征波长段的拉曼散射强度值作...
- 符继红赵洁唐军史岷山王强
- 文献传递
- 棉蚜P450 CYP6CY3的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备被引量：5
- 2017年
- 【目的】克隆得到棉蚜(Aphis gossypii)P450 CYP6CY3,将其开放阅读框(ORF)在原核细胞中进行表达,纯化融合蛋白,多次免疫小鼠获得CYP6CY3多克隆抗体,为进一步分析CYP6CY3在棉蚜不同组织部位的分布及其在抗性中的作用打下基础。【方法】利用RT-PCR及3′-RACE技术克隆获得CYP6CY3的ORF,并对其进行生物信息学及系统进化分析。构建重组质粒pET32a-CYP6CY3,转化大肠杆菌transetta(DE3)进行原核表达,利用切胶回收法获得纯化的融合蛋白,继而用纯化得到的融合蛋白免疫昆明白小鼠制备鼠抗棉蚜CYP6CY3多克隆抗体;ELISA检测鼠抗CYP6CY3蛋白多克隆抗体的效价,并通过Western blot及免疫组化检测该抗体特异性。【结果】棉蚜CYP6CY3 ORF长1 266 bp,编码421个氨基酸,预测蛋白分子量为48.8 k D,理论等电点为8.99,不含有信号肽序列,属亲水性蛋白;氨基酸序列包括W×××R、AG××T、E××R、P××F×PE/DRT和F××G×××C×G 5个P450家族的特征基序。通过NCBI Blastx进行同源序列的比对分析,棉蚜CYP6CY3氨基酸序列与豌豆长管蚜(Acyrthosiphon pisum)(XP_001948581.1)氨基酸一致性最高,达到81%,与麦双尾蚜(Diuraphis noxia)(XP_015379193.1)一致性为79%,与桃蚜(myzus persicae)(AHB52749.1)氨基酸序列一致性为76%,4种蚜虫的氨基酸序列都含有位于螺旋K中参与稳定核心结构的E××R完全保守序列及P450基因标志性的F××G×××C×G(358—367)血红素结合位点的共有序列。使用MEGA5软件构建系统进化树,显示棉蚜、豌豆长管蚜、麦双尾蚜及桃蚜聚为一类,亲缘关系较近。通过原核表达得到的CYP6CY3融合蛋白的相对分子量约为66 k D,基于纯化的CYP6CY3重组蛋白多次免疫昆明白小鼠制备多克隆抗体,ELISA检测获得的鼠抗CYP6CY3抗体效价达到1﹕409 600。Western blot和免疫组化进一步证实,该抗体既能与异源表达的CYP6CY3蛋白特异性结合,也能与棉蚜组织中存在的天然CYP6CY3蛋白特异�
- 魏原杰王亚美黄丽娜刘宁赵洁艾新宇刘小宁
- 关键词：棉蚜原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- RNAi在昆虫控制领域的研究进展被引量：4
- 2015年
- RNAi技术在研究昆虫功能基因组学方面已经越来越成熟,基本涉及了昆虫的所有目,并为害虫的控制和益虫种群保护筛选出许多合适的基因,越来越多的研究结果证明了这一方法的可行性。为了在这一领域更好地运用RNAi技术就必须了解干扰片段的不同递呈方式及其在昆虫体内的吸收机制。因此,就目前在昆虫中常用的干扰片段递呈方法和吸收途径进行了简要介绍,对近年RNAi在害虫控制和昆虫种群保护等方面的研究进展进行了综述与展望。
- 赵洁刘小宁
- 关键词：昆虫RNA干扰种群控制双链RNA
- 棉铃虫类肌钙蛋白基因的克隆、原核表达纯化及其时空表达谱分析
- 2018年
- 为探索棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)类肌钙蛋白基因HaCal的生理功能及其所编码蛋白的生物特性,采用PCR方法克隆了HaCal的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,借助在线软件对其进行生物信息学分析,通过原核表达技术诱导表达和纯化其编码的蛋白,并通过实时荧光定量PCR技术分析其在棉铃虫不同发育龄期和组织中的表达量。结果显示,HaCal的ORF序列长度为564 bp,编码187个氨基酸,理论分子量为20.52 kD,理论等电点为7.64。其保守结构域与Calponin家族一致,但不含跨膜区和信号肽,系亲水性蛋白。原核表达结果显示,融合蛋白大小与理论值一致,纯化获得了纯度较高的目的蛋白。HaCal在棉铃虫幼虫不同发育阶段和不同组织中均有表达,在6龄幼虫体内表达量最高,是1龄幼虫的2.34倍;在5龄幼虫中肠中表达量最高,是头部的257.14倍。表明棉铃虫类肌钙蛋白基因HaCal可能与棉铃虫的生长发育过程密切相关。
- 艾新宇赵洁王亚美魏原杰刘小宁
- 关键词：生物信息学分析棉铃虫
- 棉铃虫P450 CYP6B6响应2-十三烷酮调控机制的研究
- 昆虫细胞色素P450(CYP)酶系在有毒物质的分解和代谢过程中发挥着重要作用,已有研究表明P450酶系可被杀虫剂、药物、化学物质等诱导。棉铃虫在取食植物时,CYP会受到次生物质的诱导表达并参与解毒代谢过程,CYP6B家族...
- 赵洁
- 关键词：棉铃虫酵母单杂交酵母双杂交基因调控网络
- 棉铃虫叉头框蛋白A类似蛋白基因HarmFoxAl的克隆及表达谱分析被引量：3
- 2019年
- 【目的】本研究旨在克隆并分析一种棉铃虫Helicoverpa armigera叉头框蛋白A (forkhead box protein A, FoxA)类似蛋白基因HarmFoxAl,探讨2-十三烷酮胁迫下棉铃虫中肠中HarmFoxAl的表达情况,为进一步明确棉铃虫FoxA的功能和参与棉铃虫生长发育的调控通路提供依据。【方法】从棉铃虫幼虫中肠中扩增得到HarmFoxAl的cDNA序列,并对其氨基酸序列和蛋白结构进行分析。将HarmFoxAl的ORF序列连接至pET32a载体并转化大肠杆菌Escherichia coli Transetta菌株,IPTG诱导后检测目的蛋白的表达形式,并利用镍柱亲和层析法纯化融合蛋白。通过qPCR检测棉铃虫不同发育阶段(1-6龄幼虫和预蛹),6龄幼虫不同组织(脂肪体、中肠、体壁和头部)以及10 mg/g 2-十三烷酮处理6龄幼虫不同时间后中肠中HarmFoxAl的表达谱。【结果】HarmFoxAl(GenBank登录号:XM021331806)的开放阅读框为669 bp,编码222个氨基酸,蛋白的相对分子质量和等电点分别为25.03 kD和6.34。氨基酸序列分析表明,HarmFoxAl单体蛋白无信号肽、跨膜区和二硫键,核心区域是由4个α螺旋和3个β折叠组成的球状结构。将重组的Transetta (pET32a-HarmFoxAl)菌株用0.5 mmol/L IPTG在25℃条件下诱导5 h,约45 kD的融合蛋白His-HarmFoxAl能以可溶的形式存在于重组菌中,这与预测的分子量(42.8 kD)相一致。发育阶段特异性表达谱表明,HarmFoxAl在棉铃虫1-3龄幼虫期、6龄幼虫期和预蛹期均有表达,且预蛹期的表达量最高。组织表达谱结果表明,该基因在6龄幼虫的脂肪体、中肠和体壁中表达,且脂肪体内的表达量最高,而在头部中不表达。10 mg/g 2-十三烷酮处理棉铃虫6龄幼虫后中肠中HarmFoxAl的表达量显著降低,但随着时间延长其表达量逐渐升高,处理48 h后表达量显著高于对照。【结论】棉铃虫HarmFoxAl在预蛹期和幼虫脂肪体中表达量最高,2-十三烷酮处理幼虫后HarmFoxAl的表达量急速降低后逐渐升高,推测
- 赵洁赵洁任苏伟刘小宁
- 关键词：棉铃虫原核表达
- 棉铃虫磷脂酰乙醇胺结合蛋白的克隆及表达分析被引量：3
- 2018年
- 【目的】克隆获得棉铃虫(Helicoverpa armigera)磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidylethanolamine binding protein,PEBP)的c DNA序列,分析Ha PEBP在棉铃虫体内的表达规律,检测2-十三烷酮处理条件下棉铃虫体内Ha PEBP的变化情况,为进一步明确棉铃虫PEBP的功能和选择该基因作为调控棉铃虫种群数量的分子靶标提供依据。【方法】利用RACE技术从棉铃虫6龄幼虫的中肠组织中扩增得到Ha PEBP的c DNA序列,并对其氨基酸序列和蛋白结构进行分析。将Ha PEBP的ORF序列连接至p ET32a载体并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后检测目的蛋白的表达形式,并通过镍柱的亲和层析纯化融合蛋白。最后通过实时荧光定量PCR检测棉铃虫幼虫不同时期和6龄幼虫不同组织中Ha PEBP的表达规律,以及2-十三烷酮处理棉铃虫6龄幼虫后中肠内Ha PEBP的变化规律。【结果】获得的Ha PEBP c DNA序列长760 bp,其中ORF为588 bp,编码195个氨基酸,蛋白质分子量和等电点分别为21.76 k D和5.93。氨基酸序列分析表明Ha PEBP无信号肽、跨膜结构域和二硫键,是一个由4个α螺旋和9个β折叠片组成的胞质单体蛋白。将BL21(DE3)-p ET32a-Ha PEBP重组菌用1 mmol·L-1的IPTG在37℃条件下诱导4 h,约40 k D的融合蛋白His-Ha PEBP能以可溶的形式存在于重组菌中。按照同样的方法诱导1 L的重组菌,将超声处理后的上清液与Ni-NTA柱结合,进行咪唑缓冲液梯度洗涤,200 mmol·L-1的咪唑洗涤两次后得到约40 k D的单一蛋白,与融合蛋白的大小一致。将此流出液超滤浓缩,获得183.3 ng·μL-1的融合蛋白,能被抗His-Tag的单克隆抗体识别发生免疫反应。Ha PEBP在棉铃虫幼虫的1—6龄期和预蛹期均表达,且6龄幼虫的表达量最高。该基因在6龄幼虫的脂肪体、中肠、头部和体壁中也均有表达,且脂肪体内的表达量最高。不同浓度的2-十三烷酮处理后,棉铃虫6龄幼虫中肠内Ha PEBP的表达量均有所降低;低
- 赵洁任苏伟刘宁艾新宇马纪刘小宁
- 关键词：棉铃虫磷脂酰乙醇胺结合蛋白原核表达
