范昌发
- 作品数：131 被引量：279H指数：10
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：“重大新药创制”科技重大专项国家自然科学基金中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学环境科学与工程更多>>
- ATP7B基因敲除小鼠模型的构建方法
- 本发明公开了一种ATP7B基因敲除小鼠模型的构建方法。利用CRISPR‑Cas9基因敲除技术，敲除ATP7B基因第2外显子。ATP7B基因敲除后的小鼠均表现为明显的肝脏铜离子淤积等人WD患者临床表现。本发明构建的模拟人W...
- 黄坚范昌发李潇瑾刘甦苏周冬虎曹愿
- 2种Gal抗原缺失小鼠的免疫学特性比较研究被引量：10
- 2018年
- 目的:考察2种Gal抗原缺失小鼠对外来抗原刺激的免疫应答特性,分析其用于Gal抗原阳性材料免疫毒性评价的敏感性。方法:采用外来Gal抗原(兔血红细胞,RRBC)免疫刺激2种Gal抗原缺失小鼠(GGTA1单基因敲除,KO与GGTA1/iGb3S双基因敲除,DKO),比较分析经免疫刺激后2种小鼠的免疫应答特性和敏感性,包括:特异性抗-Gal抗体水平,与免疫排斥反应及炎症反应相关的细胞因子表达水平和脾脏淋巴细胞亚型分型比例。结果:GGTA1/iGb3S DKO小鼠经腹腔内RRBC免疫刺激2次后,血清抗-Gal IgG和抗-Gal IgM水平与未接受免疫刺激的小鼠相比,分别升高约41倍和184倍;同时,脾脏T细胞亚型标志物(CD3^+CD8^+)水平轻度增高。GGTA1 KO小鼠经RRBC免疫刺激2次后,血清抗-Gal IgG和抗-Gal IgM水平与未接受免疫刺激小鼠相比,分别升高约92倍和407倍;同时,脾脏B细胞亚型标志物(CD3^-CD19^+)水平轻度升高。然而,与GGTA1/iGb3S DKO小鼠相比,可能由于个体间差异较大,除了2次免疫后抗-Gal IgG在800倍稀释,抗-GalIgM在3 200倍稀释时略高之外,其他并不存在显著性差异。2种Gal抗原缺失小鼠在RRBC免疫刺激后的NK细胞亚型标志物水平及细胞因子(IFN-gama,IL-4与IL-12P70)表达水平未见明显变化。结论:2种Gal抗原缺失小鼠均对外来抗原刺激具有较强的敏感性,表现为特异性抗-Gal抗体的显著升高,然而,GGTA1/iGb3S DKO小鼠与GGTA1 KO小鼠相比,未表现出更高的敏感性。因此,作为异种免疫原的免疫学评价模型,GGTA1 KO小鼠和GGTA1/iGb3S DKO小鼠都是敏感的实验动物模型。本研究采用的RRBC预免疫方法既能够提升小鼠的抗-Gal抗体水平,又不引起显著的免疫毒性反应,为后期用于动物源性生物材料的免疫学评价实验动物模型的应用奠定了基础。
- 邵安良魏利娜范昌发陈亮徐丽明
- 关键词：免疫毒性
- 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立FcγR基因大片段敲除小鼠模型被引量：4
- 2019年
- 目的使用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除长度约为90kb的小鼠FcγR2b,FcγR3,FcγR4基因簇,为构建FcγR基因人源化小鼠奠定基础。方法使用在线预测软件在FcγR2b,FcγR3外显子区设计sgRNA,在每一位点挑选脱靶效应较低的五个候选sgRNA。通过CRISPR/Cas9活性检测试剂盒检测sgRNA在体外的活性。选取活性较高的sgRNA体外转录,与Cas9mRNA一并注射受精卵。通过PCR检测及测序,得到1只敲除片段为89711bp的基因修饰小鼠,且同时敲除FcγR2b基因5’端,FcγR3基因3’端及FcγR4基因。而且还利用软件预测了8个脱靶可能性最高的位点,并对首建鼠基因组的上述8个脱靶位点全部测序确认。结果结果显示未在预测脱靶位点附近发现小片段插入或缺失。结论建立了利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除基因组超大片段的技术,该技术结合BAC转基因技术,将为建立含有复杂基因族的人源化小鼠提供新的途径。
- 吴曦霍桂桃刘甦苏谷文达曹愿柳全明吕建军范昌发
- 关键词：小鼠
- Gal抗原缺失小鼠的应用示范:动物源性硬脑膜补片的免疫原性反应评价被引量：9
- 2018年
- 目的:采用Gal抗原缺失模式小鼠评价动物源性硬脑膜补片残余免疫原风险,考察Gal抗原缺失模式小鼠的应用价值。方法:在经外源性Gal抗原(兔血红细胞)预免的Gal抗原缺失小鼠皮下分别植入硬脑膜补片(产品)与牛心包(原材料)4周,分析小鼠血清总抗体,特异性抗-Gal抗体,与免疫排斥反应及炎症反应相关的细胞因子表达水平,脾脏淋巴细胞亚型及胸腺、局部病理,综合考察各实验组的差异。结果:牛心包植入组与对照组相比,小鼠血清抗-Gal IgG和抗-Gal IgM水平显著升高(分别为约4倍和约1.7倍);而硬脑膜补片植入组小鼠血清抗-Gal IgG、抗-GalIgM水平与对照组相比均无明显差异。除硬脑膜补片植入组小鼠血清IL-4含量下降之外,其余细胞因子包括IL-1β、IL-10、IL-2、IL-6、IL-12P70与IFN-γ含量,血清总IgG、IgM水平在各组间均无显著差异。脾脏淋巴细胞亚型分析显示,硬脑膜补片植入组和心包植入组与对照组相比均无显著性变化。胸腺病理未见异常;局部病理显示硬脑膜补片植入组炎症:Ⅰ-Ⅱ级,纤维化:Ⅰ-Ⅱ级,较心包植入组(炎症:Ⅱ-Ⅲ级,纤维化:Ⅱ-Ⅲ级)反应减轻。研究结果表明动物源性硬脑膜补片产品的Gal抗原介导的免疫原性反应与原材料相比显著降低。然而,硬脑膜补片植入组的植入物局部仍存在一定程度的炎症反应和纤维化现象。结论:硬脑膜补片残余免疫原风险与原材料相比显著降低,与对照组无显著性差异;Gal抗原缺失模式小鼠血清抗-Gal IgG、抗-Gal IgM能够科学地评价动物源性生物材料Gal抗原相关的免疫原性,可以作为动物源性生物材料脱抗原处理工艺有效性的特异性指标之一;提示Gal抗原缺失模式小鼠对动源性生物材料的异种免疫原性风险评价具有极高的应用价值。
- 邵安良魏利娜范昌发陈亮徐丽明
- 关键词：牛心包免疫原性
- 对C57-ras致癌性转基因小鼠2细胞期和桑椹期胚胎冷冻保存的比较
- 目的 探讨快速胚胎冷冻在致癌性转基因动物模型C57-ras小鼠保种繁殖中的应用.方法 对4周龄的正常C57BL/6J雌鼠进行超数排卵和选取性成熟C57-ras转基因阳性雄鼠进行交配，分别取得2细胞期胚胎和桑椹胚后进行胚胎...
- 左琴刘甦苏周舒雅王金恒范昌发
- 关键词：胚胎冷冻桑椹胚
- 基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因小鼠的建立
- 目的 构建基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因(c-Ha-ras)的小鼠,以获得hRas基因在特定组织器官条件性表达的小鼠模型,用于药物的临床前致癌性安全评价及相关机制研究.方法 首先构建hRas打靶...
- 刘甦苏吴曦周舒雅王辰飞左琴李保文范昌发
- 关键词：癌症
- 一种制备GGTA1和iGb3S双基因敲除的非人哺乳动物的方法及应用
- 本发明涉及制作基因敲除动物模型的领域，具体讲，涉及一种制备GGTA1和iGb3S双基因敲除的非人哺乳动物的方法及应用。其制备方法为：分别构建打靶载体；将打靶载体转入到胚胎细胞，将重组胚胎细胞注入代孕动物胚胎中，移植到假孕...
- 徐丽明邵安良范昌发
- 一种便捷而经济的显微注射针填充方法
- 2007年
- 介绍了一种便捷而经济的将DNA溶液填充至显微注射针的方法。将通常用于转移胚胎的口吸管稍加改进，吸取DNA溶液，从尾部直接注入显微注射针，可在2~5min完成DNA填充，大大提高了效率。
- 范昌发左琴李保文李波岳秉飞
- 关键词：显微注射
- 小鼠2细胞期胚胎移植方法的探讨被引量：3
- 2007年
- 目的以近交系C57BL/6J小鼠作为供体胚小鼠,封闭群ICR小鼠及昆明鼠作为假孕体,对2细胞期的胚胎移植方法和假孕鼠品系进行对比探讨。方法经超数排卵的C57BL/6J雌鼠于正常雄鼠交配,取受精卵,培养到2细胞期,进行输卵管伞移植和输卵管壁移植,妊娠产仔。结果从KM为假孕鼠,对2细胞期胚胎进行的输卵管壁移植的妊娠数量最多18只,90%的妊娠率,产仔数最多188只,产仔率达34.8%。结论输卵管壁移植的技术简单易行具有较高的妊娠率及产仔率。
- 左琴范昌发胡培丽岳秉飞
- 关键词：近交系小鼠胚胎移植
- 一种基于hSCARB2基因敲入的肠道病毒71型感染模型的构建方法及所述感染模型的用途
- 本发明涉及一种基于hSCARB2基因敲入的肠道病毒71型感染模型的构建方法及所述感染模型的用途，特别用于为EV71疫苗和抗病毒药物的体内评价提供了有效手段。
- 范昌发周舒雅刘强吴星陈盼吴曦王佑春毛群颖刘甦苏左琴黄维金李保文梁争论李文辉贺争鸣
- 文献传递
