王磊
- 作品数：12 被引量：31H指数：3
- 供职机构：东南大学医学院神经生物学研究所更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胚胎大鼠腹侧中脑区域神经干细胞的培养及鉴定
- 2006年
- 目的:探讨胚胎大鼠腹侧中脑区域神经干细胞(neural stem cell,NSCs)的分离、培养、传代及鉴定的方法。方法:分离E14.5胚胎大鼠腹侧中脑组织,用机械吹打方法形成细胞悬液,接种到含有表皮生长因子(ep i-derm al growth factor,EGF)、碱性成纤维生长因子(fibrob last growth factor-basic,bFGF)、B27(B27 sup lem ent)的DMEM/F12(1∶1)的无血清培养液中培养,待形成原代克隆球后,用有限稀释法进行单细胞克隆和传代扩增,以获得大量来源相同的NSCs克隆球,并且进行B rdu和Nestin检测;然后取培养细胞诱导分化后行GFAP,NeuN,TH检测。结果:E14.5胚胎大鼠腹侧中脑组织细胞培养两周后可以形成较多的悬浮生长的神经球,经单细胞克隆和传代扩增后得到大量的同源细胞克隆球。经过B rdu和Nestin的免疫细胞化学检测90%以上的细胞呈阳性;诱导分化后细胞呈GFAP,NeuN阳性,少量细胞呈TH阳性。结论:从E14.5胚胎大鼠腹侧中脑组织分离得到的细胞具有不断增殖和自我更新的能力,是胚胎大鼠中枢神经系统的NSCs,并可以分化为TH阳性神经元。
- 王磊曾水林雷志年朱建宝李涛闫福麟
- 关键词：中脑
- 不同年龄大鼠脑组织中MHC、CD4及CD8分子的表达及其意义被引量：1
- 2006年
- 目的：探讨MHC、CD4及CD8分子在不同年龄的大鼠脑组织中的表达及其意义.方法：将实验大鼠按胎龄和日龄分为7组：E15、E19、P0、P7、P14、P28及老年组（24月龄）;采用免疫组化方法,检测MHC、CD4和CD8分子在大鼠脑组织中海马区、脉络丛、大脑皮质及结缔组织的表达.结果：（1）E15d大鼠脑组织未见MHC Ⅰ类分子的表达;其他年龄组在结缔组织和脉络丛有MHC Ⅰ类分子的表达.其中从P0 d组～P14 d组大鼠的海马和部分大脑皮质神经元上MHCⅠ类分子的表达逐渐升高,P14 d组的表达最高（P＜0.05）;P28 d组的表达明显下降（P＜0.05）;老年组大鼠海马神经元上的表达再次升高（P＜0.05）.（2）E15 d组大鼠脑组织中未见MHC Ⅱ、CD4和CD8分子的表达;其他年龄组MHC Ⅱ、CD4和CD8除在结缔组织和脉络丛脉络膜表达外,在神经元上未见表达.（3）各年龄组在小脑皮质神经元上未见MHC Ⅰ、Ⅱ、CD4和CD8分子的表达.结论：胚胎后期脑内开始有MHC、CD4和CD8分子的表达,表明此时脑内已有可能出现免疫反应.在新生鼠及出生早期,部分皮质和海马神经元上有MHC Ⅰ类分子的表达,可能与调节神经元活动和突触可塑性连接有关.老年组大鼠MHC Ⅰ类分子在海马神经元上的表达升高,可能与神经元的功能衰退和记忆识别能力下降有关.
- 阎蓉曾水林张建琼李升宋嵬朱建宝王磊
- 关键词：MHCCD4CD8脑组织
- 大鼠脊髓背根神经节内神经前体细胞的观察被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨大鼠脊髓背根神经节(DRG)内是否存在神经前体细胞.方法:取成年和胚胎大鼠DRG冰冻切片,进行B rdu,Nestin,P75免疫荧光组织化学检测,分别取成年和胚胎大鼠DRG进行原代细胞培养,观察其增殖与分化情况,并行Nestin免疫组织化学和B rdu,P75,NF,GFAP免疫荧光组织化学鉴定.结果:在成年和胚胎大鼠DRG冰冻切片上均见有B rdu/Nestin和Nestin/P75免疫荧光双标细胞.细胞培养观察到取自DRG的细胞有分裂增殖,呈Nestin免疫组织化学阳性反应和B rdu,P75免疫荧光组织化学阳性反应;培养第三代细胞加入胎牛血清后出现分化,分化细胞呈NF和GFAP免疫荧光组织化学阳性反应.结论:大鼠DRG内存在有分裂增殖的神经前体细胞,这些细胞可以分化为神经元和神经胶质细胞.
- 宋嵬曾水林朱建宝王磊李升阎荣李凤飞
- 关键词：神经前体细胞细胞培养技术免疫荧光组织化学
- 帕金森病大鼠黑质区神经干细胞分化的观察被引量：7
- 2007年
- 目的:探讨帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠中脑黑质区神经干细胞(NSCs)的分化情况。方法:将6-OHDA注入纹状体内制作PD大鼠模型。随机将成功模型分为3 d5、d7、d1、4 d2、8 d组,每组6只;另设假手术及正常对照组各3只。向成功模型鼠腹腔注射5-溴脱氧尿苷(Brdu)。用Brdu/NeuN、Br-du/GFAP、Brdu/TH免疫双标组织化学方法检测黑质区内源性NSCs向神经元、神经胶质细胞和多巴胺(DA)能神经元的分化情况。结果:PD模型7 d组,在黑质区Brdu+/GFAP+、Brdu+/NeuN+细胞开始出现,14 d组双标的阳性细胞数量逐渐增加,28 d达到高峰,14 d、28 d组与其它组比较差异显著(P<0.05)。在这些双标细胞中,Brdu+/GFAP+细胞数量较多,Brdu+/NeuN+细胞数量较少(P<0.05),未发现Brdu+/TH+细胞。结论:PD大鼠模型黑质区NSCs多数分化为神经胶质细胞,少数分化为神经元,在没有诱导和干预下,未见有向DA能神经元分化。
- 曾水林王磊朱建宝李涛刘卫国束汉生闫福麟
- 关键词：帕金森病神经干细胞分化黑质
- 不同月龄大鼠脑室下区胶质细胞源性神经营养因子受体α_1的表达
- 2006年
- 目的:观察胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)受体α1(Glial cell line-derived growth factor recepterα1, GFR-α1)在1、3、8、12月龄大鼠脑室下区(SVZ)中的表达。方法:取不同月龄大鼠SVZ行冰冻切片,采用GFRα1多克隆抗体结合5′-BrdU单克隆抗体免疫组织化学单标与双标的方法染色。结果:在不同年龄大鼠SVZ可见GFR-α1、BrdU单标与双标细胞,但主要分布在SVZ前部的背外侧部分。随着年龄的增长,3种标记细胞的数量逐渐减少,且12月龄组的减少更明显。结论:GDNF可能通过GFR-α1参与调节哺乳动物脑内SVZ细胞的增殖和分化。随着年龄的增加,GFR-α1表达逐渐减少,SVZ细胞增殖、分化的能力亦减弱。
- 曾水林刘方舟杨宁雷志年王磊朱建宝李涛
- 关键词：脑室下区年龄
- 帕金森病大鼠同种异体脑内移植免疫反应的实验研究被引量：8
- 2005年
- 目的: 观察帕金森病(Parkison' s disease, PD)模型大鼠同种异体脑内移植是否存在免疫反应以及免疫反应的特点.方法: 取新生SD大鼠腹侧中脑(ventral mesencephalon, VM)组织制成单细胞悬液, 借助脑立体定位仪移植到SD大鼠PD模型的纹状体内, 于2、 4、 6 wk时采用行为学检测后分批处死, 再行HE、酪氨酸羟化酶(TH)和MHCⅡ抗原免疫组化染色.结果: PD模型移植组2 wk时, MHCⅡ表达明显增高(P＜0.05), 4 wk时开始下降, 6 wk以后消失; 2 wk时移植区可见少量TH阳性神经元, 4～6 wk数量显著增加(P＜0.05).假手术组在2 wk时见少量MHCⅡ阳性细胞(P＞0.05), 4 wk时消失, 各时间点都未见TH阳性神经元; 对照组在各时间点都未见TH阳性神经元和MHCⅡ阳性细胞.各实验组各时间点行为学检测无明显改变(P＞0.05).结论: 同种异体脑内移植是存在免疫排斥反应的, 这种反应可能是由MHCⅡ抗原不同而诱发的, 免疫反应与移植物内TH神经元的存活和发育密切相关, 同种异体脑内移植加用免疫抑制剂还是必要的.
- 韩洋曾水林王磊雷志年
- 关键词：同种异体脑移植酪氨酸羟化酶免疫排斥
- 同种异体神经干细胞脑内移植免疫排斥反应的实验研究被引量：3
- 2006年
- 目的观察帕金森病(PD)模型大鼠同种异体神经干细胞(NSC)脑内移植是否存在免疫排斥反应。方法取E14.5d SD胚鼠腹侧中脑组织进行分离、培养、扩增,经Brdu、Nestin免疫组化染色鉴定确认为NSC后,借助脑立体定位仪移植到SD大鼠PD模型的纹状体内,分别于10、21、35、60d时检测其旋转行为后分批处死,再行HE、CD4、CD8、酪氨酸羟化酶(TH)和MHC-Ⅱ抗原免疫组化染色。结果移植组10d时,CD4、CD8、、MHC-Ⅱ少量表达,以21d时较为明显,35d时明显减少,60d消失;10d、21d时移植区未见明显TH阳性神经元,35d后数量显著增加。阳性对照组在10d、21d时见少量CD4、CD8、和MHC-Ⅱ阳性细胞,35d时消失,各时间点都未见TH阳性神经元。阴性对照组在各时间点都未见TH阳性神经元和CD4、CD8、MHC-Ⅱ阳性细胞。PD模型移植组旋转行为35d时出现改善。结论神经干细胞脑内移植未见明显免疫排斥反应。
- 曾水林韩洋王磊雷志年朱建宝李涛
- 关键词：神经干细胞脑移植帕金森病免疫排斥
- 成年大鼠脑室下层细胞表达GFR-α_1的免疫组织化学研究被引量：1
- 2005年
- 观察胶质细胞源性神经营养因子受体-α1 (GFR -α1 )在成年大鼠脑室下层(SVZ)细胞的表达,探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对SVZ细胞的作用。成年大鼠SVZ组织冰冻切片,采用GFR -α1 结合5- 溴脱氧尿苷(BrdU)的免疫组织化学单标记与双标记方法,对成年大鼠SVZ进行观察。在成年大鼠SVZ可见GFR- α1 阳性细胞、BrdU阳性细胞和GFR- α1 /BrdU双标记细胞,且三种阳性细胞的分布趋势相似。结果提示GDNF可能参与调节成年哺乳动物脑内SVZ细胞的增殖、分化和迁移。
- 刘方舟杨宁雷志年曾水林李涛王磊
- 关键词：成年大鼠免疫组织化学胶质细胞源性神经营养因子
- 嗅鞘细胞对神经干细胞增殖与分化的影响被引量：10
- 2006年
- 观察嗅鞘细胞（OECs）对神经干细胞（NSCs）增殖与分化的影响。取孕14d的SD胚鼠嗅球和腹侧中脑组织，分为OECs＋NSCs共培养组和NSCs单独培养组进行培养。用p75免疫组化法，p75、BrdU／nestin、GFAP、NF（神经原纤维）和p75／nestin免疫荧光法分别鉴定OECs和NSCs并观察其增殖与分化。在培养7d时，绝大多数OECs呈梭形且发出2～3个突起，少量呈扁平椭圆形，两者均呈p75阳性。在7d时，单独培养的NSCs表现为典型的神经球悬浮生长，呈BdU／nestin阳性；14d后偶见神经球贴壁分化，球中的少数细胞呈绿色荧光标记的NF阳性，大部分呈GFAP阳性。在5d时，OECs＋NSCs共培养组形成神经球；10d时球体积不断增大，球心透亮度良好；12d后神经球的体积不再增大，开始贴附在OECs上生长。可见神经球向四周伸出突起并开始分化；14d时NSCs紧贴OECs生长并同OECs广泛交织在一起，可见NSCs和OECs分别呈nestin和p75阳性，NSCs中的大部分呈NF阳性，小部分为GFAP阳性。NSCs单独培养组和OECs＋NSCs共培养组中NF阳性细胞率分别为47．2％和69．5％，前者明显少于后者（P〈0．05）。以上研究结果提示OECs有促进NSCs增殖和诱导其分化的作用。
- 李升曾水林王磊阎蓉宋嵬朱建宝李凤飞
- 关键词：嗅鞘细胞神经干细胞细胞培养免疫组织化学免疫荧光
- 同种异体胚脑移植免疫排斥反应实验研究被引量：2
- 2006年
- 目的观察同种异体胚脑组织脑内移植是否存在免疫排斥反应以及免疫抑制剂治疗对移植物存活的影响。方法将孕14.5d胚鼠腹侧中脑(VM)细胞悬液移植到帕金森病(PD)模型大鼠纹状体内,术后部分动物每天给予甲基强的松龙(MP)腹腔注射(30mg/kg),分别存活10d、21d、35d和60d,经旋转行为测试后分批处死,行CD4、CD8、主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(MHC-Ⅱ)和酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色。结果移植组10d、21d时,CD4+、CD8+和MHC-Ⅱ+细胞的数量较对照组明显增多,21d时更为显著,35d时部分移植区出现排斥反应,60d时移植区未见移植组织存活。MP治疗组在10d、21d时,移植区CD4+、CD8+和MHC-Ⅱ+细胞数量较未治疗组明显减少,35d时未见明显排斥反应;60d时,CD4+、CD8+和MHC-Ⅱ+细胞的数量较35d显著增加,部分移植物被排斥。MP治疗组各时间点TH+细胞数量明显多于非治疗组,但大鼠的旋转行为在各时间点均未见改善。假手术组在10d、21d时,见少量CD4+、CD8+和MHC-Ⅱ+细胞,35d时消失,各时间点都未见TH+神经元。结论同种异体胚脑组织脑内移植存在免疫排斥反应。MP治疗在一定程度上可以减弱或延缓免疫排斥反应的发生。
- 曾水林韩洋王磊雷志年朱建宝李涛
- 关键词：胚脑同种异体移植免疫排斥帕金森病
