殷凡
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
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- 靶向EBV潜伏期基因EBNA2小干涉RNA系统的构建
- 2007年
- [目的]构建携带靶向EBV核抗原EBNA2(EBV nuclear antigen,EBNA)的pSUPER.retroRNAi逆转录病毒载体,进而筛选出稳定产毒的细胞克隆。[方法]用DNA重组技术将60nt能转录产生靶向EBNA2小发夹RNA(smallhairpin RNA,shRNA)的寡核苷酸序列定向插入逆转录病毒载体pSUPER.retro,并用限制性内切酶酶切和测序鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒载体转染包装细胞系PheonixA,G418筛选稳定产生逆转录病毒的细胞克隆。[结果]重组逆转病毒载体经限制性内切酶酶切,电泳后可观察到7167bp和281bp两条DNA条带;测序鉴定结果表明序列正确;重组载体转染的包装细胞经G418筛选获得能产生逆转录病毒的抗性细胞克隆,病毒滴度为2.5×104CFU/ml。[结论]成功构建和筛选出靶向EBV潜伏期基因EBNA2的pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体以及稳定产毒的细胞系,为深入探讨EBNA2基因的细胞转化和抗凋亡作用提供了实验基础。
- 孙淑红胡晓峰王笑峰殷凡罗兵
- 关键词：小发夹RNA逆转录病毒载体EB病毒
- EB病毒早期基因BHRF1—Bcl-2的病毒性同源基因被引量：3
- 2005年
- BHRF1是近年来得到确认的EBV新的致癌基因,在结构上和功能上与细胞原癌基因Bcl-2相似,属Bcl-2家族成员。由于其抑制细胞凋亡和细胞转化作用而受到广泛关注,本文就BHRF1的作用特点、与bcl-2的关系以及应用前景作一综述。
- 殷凡孙萍罗兵
- 关键词：同源基因EB病毒病毒性原癌基因BCL-2BHRF1BCL-2
- 特异性沉默EBV潜伏期基因LMP1 pSUPER retro RNAi系统的构建被引量：2
- 2006年
- 目的构建并筛选携带针对Epstein-Barr病毒(EBV)潜伏膜蛋白基因LMP1的pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体以及稳定产毒的细胞克隆。方法用DNA重组技术,将60 bp能转录产生靶向LMP1小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPER retro,脂质体法将重组逆转录病毒载体转染包装细胞系PA317,G418筛选建立稳定产生逆转录病毒的细胞克隆。结果重组逆转录病毒载体经限制性内切酶酶切,电泳后可观察到7 167 bp和281 bp两条DNA条带;测序鉴定结果表明序列正确;重组载体转染包装细胞,可表达绿色荧光蛋白,经G418筛选,得到抗性细胞克隆。结论特异性沉默EBV潜伏期基因LMP1的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体以及稳定产毒的细胞系构建和筛选成功。
- 殷凡王笑峰罗兵
- 关键词：LMP1逆转录病毒载体EPSTEIN-BARR病毒
- EBV相关胃癌ras基因突变及法尼基转移酶β-亚单位基因的表达被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨EBV相关胃癌(EBVaGC)、EBV阴性胃癌(EBVnGC)及相应癌旁组织中ras基因突变和法尼基转移酶(FTase)的表达意义.方法:应用PCR-RFLP技术检测EBVaGCs13例、EBVnGCs45例以及相应癌旁组织58例中H-ras12和K-ras12,13密码子点突变情况;RT-PCR技术检测FTaseβ亚单位mRNA的表达水平.结果:共检测到H-ras12位点突变2例,突变率为3.45%(2/58),均发生在EBVnGCs,未发现K-ras12和13密码子点突变.58例癌组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平为0.93±0.39,癌旁组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平为0.78±0.26,两者有显著性差异(t=2.44,P=0.02).EBVaGCs组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平为0.80±0.19,EBVnGCs组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平为0.96±0.43,两者无显著性差异(t=1.93,P=0.06);EBVaGCs和癌旁组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平无显著性差异(t=0.54,P=0.60);EBVnGCs和癌旁组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平有显著性差异(t=2.39,P=0.02);2例BHRF1阳性和11例BHRF1阴性EBVaGCs组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平无显著性差异(t=0.26,P=0.80);6例BARF1阳性和7例BARF1阴性EBVaGCs组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平亦无显著性差异(t=1.59,P=0.14).结论:胃癌组织ras基因突变率较低,胃癌组织中FTaseβ亚单位mRNA明显高于癌旁组织.EBVaGC组织中ras基因突变、FTaseβ亚单位表达与EBV感染无明显相关性.
- 孙佰秀殷凡朱伟高玉孙淑红罗兵
- 关键词：EB病毒RAS
- 应用RNA干涉技术阻断EBV潜伏期基因LMP1表达的实验研究
- 目的 构建携带针对EBV潜伏膜蛋白基因LMP1的pSUPER.retro.neo gfp RNAi逆转录病毒载体,并筛选出稳定产毒的细胞克隆,探讨LMP1特异性沉默对EBV阳性细胞凋亡的影响。
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- 殷凡
- 关键词：小发夹RNAEBV
- 文献传递
