王笑峰
- 作品数：84 被引量：170H指数：6
- 供职机构：青岛大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金青岛市科技局资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- EBV即刻早期基因BZLF1腺病毒表达载体的构建及初步应用被引量：2
- 2007年
- 目的构建EBV即刻早期基因BZLF1的重组腺病毒表达载体,探讨其表达诱导潜伏状态EBV进入裂解期增殖的作用。方法采用AdEasy系统构建携带BZLF1的重组腺病毒载体pAd- BZ,脂质体法转染人胚肾293细胞,包装产生重组腺病毒vAd-BZ。vAd-BZ感染EBV阳性细胞NEC后,采用RT-PCR、Western blot、流式细胞术和MTT等方法检测目的基因表达,以及目的基因表达对EBV阳性细胞的影响。结果PCR、序列测定以及限制性酶切证实BZLF1基因正确插入穿梭质粒,并与病毒骨架质粒pAdEasy-1重组,重组腺病毒表达载体构建成功。经293细胞包装获得具有稳定感染性的重组腺病毒vAd-BZ,感染重组腺病毒的NEC靶细胞可以检测到BZLF1基因的表达,进而诱导EBV从潜伏期进入裂解期。结论重组腺病毒vAd-BZ可有效感染EBV阳性细胞NEC,诱导潜伏状态的EBV活化,进而特异性杀伤EBV阳性肿瘤细胞。
- 孙淑红王云王笑峰孙坚萍朱伟罗兵
- 关键词：腺病毒载体EBV即刻早期基因
- 血清肿瘤标记物联合动态检测在肺癌早期诊断和监控治疗中的临床价值被引量：5
- 2016年
- 目的：探讨血清肿瘤标记物糖类抗原CA50、癌胚抗原CEA、鳞状上皮癌抗原Scc- Ag、细胞角蛋白19片段抗原21-1（CYFRA21-1）、人多效蛋白PTN、神经元特异性烯醇化酶NSE联合动态检测在肺癌早期诊断和监控治疗中的临床应用价值。方法：采用电化学发光法和酶联免疫法分别检测201例肺癌患者（肺癌组）、50例肺部良性病变患者（良性对照组）及50例健康体检者（正常对照组）血清肿瘤标记物CA50、CEA、Scc- Ag、CYFRA21-1、PTN、NSE水平，采用回顾性统计方法分析血清肿瘤标记物与肺部良恶性疾患的相关性，探讨其联合动态检测在肺癌早期诊断和监控治疗中的临床价值。结果：（1）肺癌患者血清CA50、CEA、Scc- Ag、CYFRA21-1、PTN、NSE水平明显高于肺部良性病变组及正常对照组（＜0.01）；（2）肺癌患者血清CA50、CEA、Scc- Ag、CYFRA21-1、PTN、NSE水平与患者性别、年龄、肿瘤发生部位无明显相关性（均＞0.05），与肿瘤大小、临床分期、组织学类型、复发转移、伴胸腔积液及治疗后明显相关（均＜0.01）；（3） CA50、CEA分别在肺腺癌患者血清表达水平及阳性检出率较高，Scc- Ag、CYFRA21-1分别在肺鳞癌患者血清表达水平及阳性检出率较高，PTN、NSE分别在肺小细胞癌患者血清表达水平及阳性检出率较高（均＜0.01）；（4） CA50、CEA、Scc- Ag、CYFRA21-1、PTN、NSE诊断肺癌的敏感性分别为46.27%（93/201）、49.75%（100/201）、50.75%（102/201）、44.28%（89/201）、50.25%（101/201）、48.76%（98/201），准确性分别为55.38%（139/251）、57.77%（145/251）、59.36%（149/251）、53.39%（134/251）、58.57%（147/251）、56.97%（143/251），六项肿瘤标记物联合检测诊断肺癌特异性虽有所降低86%（43/50），但敏感性、准确性明显提高，分别为95.02%（191/201）、93.23%（234/251），与各单项检测比较差异有统计学意义（均＜0.01）�
- 邹见刚王笑峰
- 关键词：肺癌肿瘤标记血清学
- 献血者EBV、HHV-6和HHV-7DNA检测对输血意义被引量：1
- 2010年
- 目的了解青岛地区献血者单个核细胞(PBMC)和唾液标本中EB病毒(EBV)、人疱疹病毒6型(HHV-6)和人疱疹病毒7型(HHV-7)的感染情况。方法采用PCR-Southern blotting检测109名健康无偿献血者外周血PBMC和唾液标本中EBV DNA,巢式PCR技术检测HHV-6和HHV-7 DNA,限制性酶切分析分别对HHV-6、HHV-7进行分型和鉴定。结果109名献血者外周血PBMC中EBV DNA检出率为21.10%(23/109),HHV-6 DNA检出率为50.46%(55/109),HHV-7 DNA检出率为57.80%(63/109)。唾液标本中EBV、HHV-6和HHV-7 DNA检出率分别为24.77%(27/109)、66.06%(72/109)和90.83%(99/109)。PBMC中EBV、HHV-6和HHV-7均阳性者7例,占6.4%;唾液标本中均阳性者17例,占15.6%。酶切分析结果显示,55例献血者外周血PBMC HHV-6阳性标本中HHV-6A型占18.2%(10/55),HHV-6B型占81.8%(45/55);72例唾液HHV-6阳性标本中HHV-6A型占16.7%(12/72),HHV-6B型为83.3%(60/72)。结论外周血PBMC和口咽部上皮细胞是EBV、HHV-6和HHV-7潜伏的重要部位,献血员中存在上述病毒的共感染。
- 杨永洁尼宏莉李欣王笑峰王云于琦罗兵
- 关键词：输血
- HHV6感染与风湿性和类风湿性关节炎相关性的研究
- 2005年
- 目的 探讨人疱疹病毒 6型(humanherpesvirus6,HHV6)感染在风湿性关节炎 (rheumaticarthritis,RhA)和类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis,RA)病因学中的作用。方法 用套式PCR(nested PCR)检测 40例RhA、62例RA患者和 138例健康献血员外周血白细胞(PBWC)和血浆中HHV6DNA。结果 RhA组和RA组PBWC中HHV6DNA阳性率与正常对照组比较均无显著性差异(P>0. 05);部分RhA和RA患者血浆中可检出HHV6DNA,而对照组血浆中HHV6DNA阴性。结论 部分RhA、RA患者血浆中存在HHV6DNA,提示这些患者可能存在HHV6活动性感染。
- 孙迎娟罗兵李慧王笑峰王云于维林
- 关键词：RA血浆类风湿性关节炎DNANESTED-PCR阳性率
- 鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤与EB病毒感染的相关性被引量：4
- 2014年
- 目的检测鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKTCL)组织EB病毒(EBV)感染情况,以及EBV基因型别和LMP1编码基因的变异情况,初步探讨ENKTCL的发生与EBV感染的相关性。方法采用原位杂交技术检测75例ENKTCL组织标本中EBER1的转录,筛选鉴定出EBV阳性标本;PCR技术检测EBV 1/2分型,PCR结合限制性片段长度多态性(RFLP)分析检测EBV C/D分型和F/f分型;PCR技术检测LMP1缺失型和野生型基因。结果 75例瘤组织中有67例ERER1阳性,阳性率为89.3%。56例EBV阳性标本的EBV基因分型结果:1型80.4%,2型19.6%;F型87.5%,f型12.5%;C型66.1%,D型33.9%。48例EBV阳性肿瘤组织标本中,野生型8例(16.7%),缺失型40例(83.3%)。结论本地区ENKTCL存在高水平EBV感染;肿瘤组织中感染的EBV的主要基因型别为1型、F型和C型;LMP1基因缺失型可能在ENKTCL的发生中发挥重要作用。
- 王海娟李慧王笑峰王云邢晓明罗兵
- 关键词：基因型
- 胃癌及癌旁组织中Bcl-2和Ki-67蛋白表达及其意义被引量：2
- 2005年
- ①目的探讨胃癌及癌旁组织中Bcl-2和Ki-67蛋白表达的意义及其相关关系.②方法采用S-P免疫组织化学染色法检测58例胃癌及癌旁组织Bcl-2和Ki-67蛋白的表达.③结果胃癌、伴癌前病变和不伴癌前病变癌旁黏膜组织中Bcl-2阳性表达率分别为44.8%(26/58)、68.8%(11/16)和21.4%(9/42),胃癌及伴癌前病变癌旁黏膜组织中Bcl-2蛋白的表达明显高于不伴癌前病变癌旁黏膜组织(x2=12.139,P<.05).但其表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移、病理学分期及浸润程度无关(x2=0.129～3.652,P>0.05).胃癌、伴癌前病变和不伴癌前病变癌旁黏膜组织中Ki-67平均指数分别为38.6±15.0、34.3±10.3和12.4±10.9,胃癌、伴癌前病变癌旁黏膜组织中Ki-67蛋白的表达明显高于不伴癌前病变癌旁黏膜组织(F=50.80,q=14.0、8.1,P<.01),Ki-67蛋白在Bcl-2阳性胃癌组织中的表达明显高于Bcl-2阴性胃癌(t=2.07,P<.05).④结论Bcl-2与癌变前期过程有关,其抑制凋亡是胃癌发生的早期事件.Ki-67表达对胃癌的进展程度评估有一定意义.
- 丁守怡阎丽平时飞王笑峰黄葆华罗兵
- 关键词：胃肿瘤KI-67蛋白BCL-2蛋白
- 靶向LMP1基因siRNA作用对AP-1及其相关因子表达的影响
- 2008年
- 背景与目的:潜伏膜蛋白LMPl是EBV基因组BamH I Nhet片段上BNLF1编码的一种跨膜蛋白,它是发现最早的能在体外恶性转化细胞系的EBV潜伏期蛋白。本研字己旨在探讨LMP1沉默对AP-1信号转导通路及其下游与细胞转化、增殖和凋亡等相关因子转录表达的影响。方法:应用50 nmol/L靶向LMP1功能区编码序列的siRNA649转染EBV阳性的胃癌上皮细胞GT38,分别作用24、48、72、96、120 h,采用RT-PCR检测c-Jun,生存素,CDK4和MMP9 mRNA转录水平;免疫组化法检测细胞生存素蛋白表达;Western印迹法检测c-Jun,JunB和CDK4蛋白表达。结果:靶向LMP1特异性siRNA作用后,各时间点c-Jun和生存素mRNA水平均明显低于细胞对照组(P<0.05),c-Jun以24 h时降低最为明显,而生存素以48 h时降低最为明显;CDK4 mRNA水平均明显高于细胞对照组(P<0.05);转染后24、48、72 h时MMP9 mRNA表达水平均明显低于细胞对照组(P<0.05),96 h和120 h时MMP9则无明显改变(P>0.05)。与细胞对照比较,c-Jun和JunB蛋白表达均下调,JunB蛋白表达在作用第5天时有所恢复,CDK4蛋白表达均上调。免疫组化检测结果显示转染后细胞质中代表生存素阳性的棕色颗粒明显减少。结论:靶向LMP1功能区编码序列的siRNA转染可影响EBV阳性胃上皮细胞AP-1及其下游相关因子的表达,进而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。
- 刘霞王笑峰王云李欣冯艺罗兵
- 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白1活化蛋白-1
- 人疱疹病毒6型和7型感染与风湿性关节炎相关性的研究
- 2004年
- [目的 ]探讨人疱疹病毒 6型 (Humanherpesvirus 6,HHV6)和 7型 (HHV7)感染与风湿性关节炎病因有无相关性。 [方法 ] 2 0 0 3年采用巢式PCR技术检测 40例风湿性关节炎病人和 13 8名健康献血员外周血单个核细胞和血浆中HHV6DNA与HHV7DNA。 [结果 ]风湿性关节炎病人外周血单个核细胞的HHV6DNA和HHV7DNA阳性率与对照组的差异均无统计学意义 (P >0 0 5 ) ;部分风湿性关节炎病人血浆中可检出HHV6DNA与HHV7DNA ,对照组则为阴性。[结论 ]风湿性关节炎病人中可能存在HHV6或HHV7的活动性感染 ,HHV6、HHV7与风湿性关节炎的发生发展有一定关系。
- 王笑峰孙迎娟罗兵李慧王云
- 关键词：风湿性关节炎病人人疱疹病毒6型DNA人外周血单个核细胞巢式PCR
- 高尿酸血症对雌性大鼠生殖功能的影响
- 2023年
- 目的探讨高尿酸血症(HUA)对雌性大鼠生殖功能的影响。方法利用腺嘌呤、高酵母饲料和氧嗪酸钾(尿酸酶抑制剂)进行9个周的HUA模型建立。通过阴道脱落细胞涂片观察大鼠动情周期;留取完整子宫、卵巢称质量,计算器官系数;采用苏木精-伊红(HE)染色观察卵巢的病理变化;采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测卵巢组织中吻素1(KISS1)和吻素1受体(KISS1R)mRNA表达。结果HUA雌性大鼠模型构建成功。与正常大鼠相比,HUA雌性大鼠动情间期明显缩短(F=14.000,P<0.01),卵巢系数显著下降(t=2.377,P<0.05),卵巢组织中KISS1和KISS1R mRNA表达显著增高(t=3.456、5.408,P<0.05)。结论HUA可造成雌性大鼠KISS1系统紊乱,引起动情间期缩短和卵巢系数降低。
- 宋淼邹通徐礼斌龚雪琳王笑峰邢士超
- 关键词：高尿酸血症生殖
- 幼儿园儿童巨细胞病毒分离毒株的限制性酶切图谱分析
- 2000年
- 罗兵邵济钧王笑峰张文卿赵炳文
- 关键词：巨细胞病毒感染分离毒株HCMV限制性酶切图谱
