李敏 作品数:60 被引量:131 H指数:7 供职机构: 郑州大学基础医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 河南省医学科技攻关计划项目 常州四药临床药学科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 更多>>
人肠道病毒71型VP1和VP4的抗原融合表达及鉴定 2012年 目的:构建人肠道病毒71型(human enterovirus 71,EV71)VP1-VP4重组融合蛋白表达体系.方法:构建EV71 VP1-VP4重组融合蛋白原核表达载体转化大肠杆菌DH5α,诱导表达融合蛋白VP1-VP4,SDS-PAGE和Western blot法进行鉴定.用融和蛋白包被ELISA板检测41例已知血清.结果:重组片段VP1-VP4测序结果与设计目的片段序列相符,重组载体构建成功;SDS-PAGE显示融合蛋白约42.8kDa,与预期值一致;Westernblot提示该融合蛋白可以和EV71 VP1、VP4抗体特异性结合.融合蛋白包被ELISA板能准确检测出41例血清中16例EV71阳性血清,与CA16无交叉反应.结论:表达的EV71 VP1-VP4融合蛋白具有良好的抗原性,可作为EV71感染检测抗原,为EV71诊断试剂和疫苗的研究奠定实验基础. 冷弘 王娜 王媛媛 臧文巧 李敏 赵国强关键词:EV71 融合抗原 融合PCR 人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的建立及其生物学特征 被引量:9 2006年 目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,探讨其生物学特征.方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用方法历时9mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP,采用MTT法测定其对cDDP的耐药指数,观察冻存、撤药对耐药性的影响,比较耐药与亲本细胞生长曲线、群体倍增时间及贴壁率的不同,流式细胞仪测细胞周期,软琼脂实验测细胞的恶性增殖能力,罗丹明实验测其对药物的摄入、排出能力.结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,冻存对耐药性影响不大,撤药培养可使耐药性降低,耐药细胞群体倍增时间延长(29.79±0.48hvs25.79±0.45h,P<0.05),生长缓慢,G0/G1、S期细胞比例增加(63.18%±5.21%vs52.81%±4.36%,P<0.05;36.49%±3.93%vs26.70%±2.62%,P<0.05),G2期细胞减少(0.33%±0.02%vs20.49%±3.71%,P<0.05),克隆形成率明显高于亲本细胞(69%vs24%,P<0.05),对罗丹明的摄入减少,排出增多.结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,且耐药性较稳定. 李敏 王志举 李文涛 董子明关键词:食管癌 耐药细胞系 顺铂 四甲基偶氮唑蓝 蒺藜防白缓释滴丸质量标准的研究 被引量:5 2016年 目的建立蒺藜防白缓释滴丸(蒺藜、防风、白芷等)的质量标准。方法 TLC法对蒺藜、当归和赤芍进行定性鉴别,HPLC法定量测定升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷和欧前胡素的含有量,转篮法测定释放度。结果 TLC斑点清晰,专属性强,分离度好。升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷和欧前胡素分别在1.602 0~112.14μg/m L(r=0.999 8)、1.396~139.60μg/m L(r=0.999 9)、0.707 2~70.72μg/m L(r=0.999 99)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为100.2%(RSD=0.99%)、99.85%(RSD=0.80%)、99.37%(RSD=1.04%)。在2、6、10 h,升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的累积释放度分别达到20%~40%、50%~70%、80%以上,有缓释效果。结论该方法快速简便,准确可靠,适用于蒺藜防白缓释滴丸的质量控制。 周丽娟 梁亚奇 何勐 丁孝良 张维亚 李敏关键词:升麻素苷 5-O-甲基维斯阿米醇苷 欧前胡素 转篮法 肠道病毒71型河南分离株2株全基因组序列分析 被引量:1 2012年 目的:了解2011年河南洛阳和南阳地区流行的肠道病毒71型(EV71)基因特征。方法:分离洛阳和南阳地区EV71病毒各一株,分别进行全基因测序和基因进化分析。结果:EV71/Luoyang2011和EV71/Nanyang2011的VP1区序列在进化树上均属于C4亚型,与国内流行株都具有较高同源性,与2008年广东流行株亲缘关系最近。这2株全基因核苷酸序列同源性为99.3%,氨基酸序列同源性为97.6%,并且氨基酸均没有发生明显改变。结论:EV71/Luoyang2011和EV71/Nanyang2011属于C4亚型,与我省及我国既往流行株相比,未发生大的变异。 冷弘 卢欣 刘慧涛 马云云 王媛媛 马晶 郭茂峰 李敏 赵国强关键词:肠道病毒71型 手足口病 同源性分析 穿心莲对人外周血CD4^+T淋巴细胞表面CXCR4和CCR5的影响以及对CXCR4/CCR5启动子作用机制的研究 被引量:4 2011年 目的:探讨穿心莲对人外周血CD4+T淋巴细胞表面趋化因子受体CXCR4和CCR5的影响以及对CXCR4,CCR5启动子的作用机制。方法:健康志愿者口服含穿心莲内酯的穿心莲胶囊后,采集人外周静脉血并分离CD4+T淋巴细胞,RT-PCR、流式细胞术、Western-bloting检测服药前后人外周血CD4+T淋巴细胞表面CXCR4,CCR5的表达;采用报告基因技术,中药穿心莲提取物给大鼠灌胃后采集含药血清,将含药血清作用于转染有CXCR4,CCR5启动子载体的H9细胞株,检测穿心莲对CXCR4,CCR5启动子的影响。结果:健康志愿者口服穿心莲后,外周血CD4+T淋巴细胞表面CXCR4,CCR5 mRNA和蛋白表达水平较服药前显著降低;并且穿心莲能够显著降低体外培养细胞CXCR4,CCR5启动子活性。结论:穿心莲能够降低人外周血CD4+T淋巴细胞表面CXCR4和CCR5的表达,具有潜在的抗HIV-1作用。 冯龙 赵国强 马云云 李敏 马晶 靳静 崔英关键词:穿心莲 抗艾滋病药物 豫医无毛小鼠无毛基因部分内含子突变研究 被引量:3 2006年 目的研究豫医无毛小鼠突变的分子机制。方法对豫医无毛小鼠和昆明小鼠的基因组DNA进行PCR扩增,对二者扩增片段克隆后测序,对结果进行比较,以确定豫医无毛小鼠无毛基因的特异性程度。结果本实验共测出豫医无毛小鼠DNA序列1 746 bp和昆明小鼠DNA序列1 733 bp,两者不同之处有32处,均位于内含子,突变形式包括插入、缺失和点突变。结论无毛性状的产生可能与内含子中的插入、缺失和点突变有关。 臧文巧 马一君 杨璇 周晓丽 李敏 李倩如关键词:豫医无毛小鼠 基因 突变 内含子 eNOS基因27 bp VNTR多态性与深静脉血栓形成的相关研究 2007年 目的探讨内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)基因第4内含子数目可变性串联重复序列(VNTR)多态性与深静脉血栓形成(DVT)的相关关系。方法PCR扩增DVT组与正常对照组eNOS基因27 bp VNTR特异片段,对两组VNTR的基因型频率与等位基因频率进行统计分析。结果DVT组与正常对照组eNOS基因VNTR均存在重复4次、5次两种等位基因,以及4/4纯合(aa),4/5杂合(ab),5/5纯合(bb)3种基因型,在对照组发现一例罕见4/6杂合(ac)基因型。DVT组4a/4a基因型频率为3.88%,4a等位基因频率为12.11%均明显高于正常对照组(P<0.05)。结论eNOS基因27bp VNTR多态性与深静脉血栓形成具有相关性,携带重复4次等位基因的人具有易患静脉血栓的危险性。 贺颖 李敏 于辉 连建华 郑红 董子明关键词:一氧化氮合酶 血栓形成 促甲状腺受体抗体检测在Graves病治疗和预后中的应用 2022年 讨论促甲状腺受体抗体检测在Graves病治疗和预后中的应用。方法:选入本院2020年1月—2021年1月,72例本院诊断治疗的Graves患者作为本文的研究对象,按照患者的治疗情况分为:未治疗组28例、治疗后无效组10例、治疗后有效组26例、正常对照组8例,四个组都使用促甲状腺受体抗体检测方法进行检测。结果:促甲状腺受体抗体检测阳性率未治疗组92.86%(26/28)、治疗无效组70.00%(7/10)、治疗有效组26.92%(7/26)均比正常对照组0.00%(0/8)高;未治疗组(18.31±12.29)、治疗无效组(15.69±12.71)的血清促甲状腺受体抗体检测水平比治疗有效组(1.41±1.55)高;治疗有效组(1.41±1.55)的血清促甲状腺受体抗体检测水平比正常对照组(0.56±0.48)高。结论:促甲状腺受体抗体检测可以作为Graves病的诊断标准,还可以作为Graves病治疗后的疗效评估手段以及停止治疗和预后效果好、坏的判断标准。对临床治疗Graves病有重要的作用,可以在临床上大力推广。 聂静 李敏关键词:GRAVES病 预后 GST-π表达水平与人食管鳞癌耐顺铂的关系研究 被引量:5 2014年 目的拟通过调控GST-π的表达水平,观察其对食管癌细胞耐药性的影响。方法构建GST-π基因的真核表达载体,转染入亲本细胞EC9706细胞后观察GST-π的过表达是否会促使食管癌细胞耐药性的产生。结果 GST-π的表达载体pIRES2-AcGFP1-GST-π转染入EC9706细胞后,RT-PCR检测GST-πmRNA表达增强,Western blotting见其蛋白表达增强,MTT实验显示该细胞针对顺铂的耐药性增强,耐药指数达2.36。结论该实验说明增加食管癌细胞内GST-π的表达会促使食管癌细胞的耐药性产生。 唐悦 龚光明 柳璐璐 李敏关键词:食管鳞癌 顺铂耐药 GST-Π polβ高表达与食管癌细胞耐药的相关性 被引量:8 2007年 目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系及稳定高表达人野生型DNA聚合酶beta(polβ)的食管癌细胞系,分析polβ高表达与食管癌细胞耐药的相关性.方法:顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用法历时9mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP;同时脂质体转染法将人野生型polβ重组绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-AC3转染入Ec9706细胞,经G418筛选得到稳定转染细胞系.荧光显微镜观察转染效果,普通倒置显微镜观察细胞形态变化.RT-PCR方法分别检测耐药细胞与转染细胞中polβmRNA的表达水平,MTT法检测各组细胞对cDDP的敏感性.结果:荧光显微镜下转染细胞荧光强,转染效率高,倒置显微镜下耐药细胞与转染前后细胞形态无明显改变.RT-PCR结果表明耐药细胞Ec9706/cDDP中polβ表达较亲本细胞增加,转染细胞的polβ表达较空载体转染细胞、对照细胞也增加.Ec9706/cDDP细胞耐药指数为15.70;转染后细胞对cDDP的敏感性降低,耐药指数为1.78.结论:成功建立了耐药细胞系Ec9706/cDDP与稳定高表达人野生型polβ的Ec9706细胞系,polβ的高表达可引起耐药性的产生,耐药细胞中polβ的表达也增高.polβ的表达与食管癌细胞的耐药性有一定相关性. 李敏 臧文巧 付庆 李文涛 董子明关键词:DNA聚合酶Β 转染 食管肿瘤 抗药性 肿瘤 四甲基偶氮唑蓝