季煜华
- 作品数：73 被引量：171H指数：8
- 供职机构：南通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自然科学总论更多>>
- 活化大鼠肝星状细胞的蛋白质表达谱被引量：1
- 2009年
- 目的用在线二维纳升高效液相结合串联质谱（2D nanoLC—MS／MS）技术分析体外培养大鼠原代肝星状细胞（HSC）的蛋白质表达谱。方法分离培养大鼠原代HSC，取体外培养第10天自动活化的大鼠HSC总蛋白质，通过2D nanoLC—MS／MS对酶解所获肽段进行分离和鉴定，并对鉴定的蛋白质进行细胞定位和功能分类。结果从50μg HSC总蛋白质中鉴定出1014种蛋白质，相对分子质量范围为7832～588364；主要分布于细胞核、细胞骨架、线粒体、内质网，分别占25％、17％、13％、13％。蛋白质功能主要与核酸代谢、细胞器组装、信号传导、能量代谢等生理进程有关，分别占17％、14％、10％、9％；其中细胞骨架蛋白α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白和结蛋白是活化大鼠HSC特异性表达的蛋白质。结论本研究获得了目前较为全面的活化大鼠原代HSC的蛋白喷表达谱，为深入研究HSC的活化机制奠定了基础。
- 季菊玲张锦生王雪晴季煜华
- 关键词：肝星状细胞蛋白质组
- 腺病毒介导细胞外信号调节激酶2表达对去分化软骨细胞增殖及胞外基质合成的影响被引量：2
- 2006年
- 目的:观察腺病毒介导细胞外信号调节激酶2的过度表达对去分化软骨细胞增殖和细胞外基质合成的影响,以及腺病毒介导细胞外信号调节激酶2用于修饰去分化软骨细胞的可行性。方法:实验于2004-09/2005-05在暨南大学组织移植与免疫研究中心进行。SD大鼠5只,周龄为3～5周,此处请核对体质量为(150±20)g,分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞,利用Adeasy系统构建携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体。流式细胞仪检测不同感染复数的携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染第5代大鼠肋生长板软骨细胞的效率,Westernblot检测携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染大鼠肋生长板软骨细胞中细胞外信号调节激酶1/2和磷酸化细胞外信号调节激酶2的表达,3H-TdR,3H-proline和35S-sulfate同位素掺入检测携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染对大鼠肋生长板软骨细胞增殖、胶原和蛋白多糖合成的影响。结果:①成功构建携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体重组腺病毒。②100感染复数的携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染第5代大鼠肋生长板软骨细胞的效率大于90%。③携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染的第5代大鼠肋生长板软骨细胞中细胞外信号调节激酶1/2和磷酸化细胞外信号调节激酶2的表达均显著增加,分别是Ad-CMV组的15.58和1.85倍。④同位素检测结果表明携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体的感染促进3H-TdR、3H-proline和35S-sulfate的掺入,分别是对照组的2.52,1.61和1.53倍(P<0.05)。结论:腺病毒介导细胞外信号调节激酶2基因的过度表达促进去分化大鼠肋生长板软骨细胞的增殖和细胞外基质成分的合成。
- 季煜华曾耀英俞瑜邢飞跃王会营江颖娟
- 关键词：软骨细胞腺病毒科基因修饰
- 一种运载蛋白、重组表达载体、外泌体及制备方法与应用
- 本发明提供了一种运载蛋白、重组表达载体、外泌体及制备方法与应用。所述的运载蛋白可以通过与外源目的蛋白融合，高效地携带外源目的蛋白进入外泌体中。本发明还提供了一种重组表达载体，可将待表达的外源蛋白肽段基因序列插入至所述的重...
- 谢秋玲熊盛王凯季煜华
- 文献传递
- 一种装载shRNA的外泌体及其构建方法与应用
- 本发明公开了一种装载shRNA的外泌体及其构建方法与应用。本发明通过将可以有效沉默靶基因的shRNA序列克隆入表达载体，得到重组表达载体1；shRNA序列包括依次连接的靶序列、茎环结构序列和靶序列的互补序列；然后将能与所...
- 谢秋玲麦俊新季煜华熊盛
- ERK信号途径对EGF诱导的HaCaT细胞增殖具有双向调节作用被引量：4
- 2006年
- 目的利用带有ERK-2基因的腺病毒载体感染成角质细胞系HaCaT,探讨ERK信号途径在EGF对HaCaT细胞增殖影响中的作用。方法用3H-TdR掺入法检测HaCaT细胞增殖及PD98059对EGF促HaCaT细胞增殖的影响。腺病毒载体转染HaCaT细胞,流式细胞仪检测转染率,W estern b lot检测ERK-2蛋白的表达。结果1μg/L和10μg/L EGF可促进HaCaT细胞增殖,而100μg/L EGF促增殖作用反下降。PD98059抑制EGF引起的HaCaT细胞增殖,且具有浓度依赖性。腺病毒载体具有高转染率,感染Ad-ERK2的HaCaT细胞高表达ERK-2。EGF抑制转染的HaCaT细胞增殖。结论ERK信号途径在EGF促HaCaT细胞增殖中具有双向调节作用。
- 王会营曾耀英季煜华邢飞跃
- 关键词：EGF腺病毒载体HACAT增殖
- 表皮生长因子对传代培养的大鼠生长板软骨细胞增殖与胶原合成的影响被引量：4
- 2006年
- 目的:探讨不同浓度的表皮生长因子(EGF)对传代培养的大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)增殖和胶原合成的影响。方法:分离、培养RGC,分别用Westernblot和阿尔新蓝(Alcineblue)染色检测各代RGC中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达;用[3H]-TdR和[3H]-proline掺入分别检测1、10和100μg/LEGF对第1、3和5代RGC增殖和胶原合成的影响。结果:原代培养的RGC表达Ⅱ型胶原和蛋白多糖,从第4代起Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达迅速降低,RGC发生了去分化。[3H]-TdR掺入表明,EGF促进第1代RGC的增殖(P<0.01),3个浓度的作用依次为:1μg/L>10μg/L>100μg/L,差异显著(P<0.01);3个浓度的EGF对第3代RGC保持了相近的促增殖作用(P<0.01);对第5代RGC均无促增殖作用(P>0.05)。与促增殖作用不同,不同浓度EGF促不同传代的RGC的[3H]-proline掺入率比对照组均高20%左右(P<0.01)。结论:EGF具有促进培养RGC增殖和胶原合成的作用,连续传代引起的去分化降低了RGC对EGF促增殖作用的反应,但对EGF的促胶原合成作用没有产生影响。
- 季煜华曾耀英俞瑜
- 关键词：软骨细胞生长面表皮生长因子胶原
- VEGF诱导血管内皮细胞产生H_2O_2及其促增殖作用被引量：20
- 2007年
- 目的:研究VEGF诱导血管内皮细胞产生细胞外H2O2及其在VEGF促血管内皮细胞增殖功能中的作用。方法:①以H2DCFDA为H2O2指示剂,检测500μg/LVEGF刺激下,血管内皮细胞H2O2的产生;②以MTT法检测3×106U/L过氧化氢酶(CAT),及外源性加入5-20mmol/LH2O2对VEGF促增殖功能的影响。结果:①在VEGF刺激血管内皮细胞15min后,细胞内开始出现逐渐增强的荧光,且随时间逐渐增强,至45min左右最强,随后逐渐减弱;而同时加入过氧化氢酶组的细胞则仅有微弱荧光产生,且荧光强度不随时间变化;②3×106U/L过氧化氢酶对VEGF的促增殖功能有明显的抑制作用(P<0.01);③外源性加入5-10mmol/LH2O2时对血管内皮细胞有明显促增殖作用(P<0.01),但其对VEGF的促增殖功能却有显著抑制作用(P<0.01)。结论:VEGF可刺激血管内皮细胞产生细胞外H2O2,在促细胞增殖中可能具有重要作用。而外源性H2O2对VEGF的生理功能可能具有抑制作用。
- 钱中清曾耀英王通林羿季煜华肇静娴
- 关键词：血管内皮细胞血管内皮细胞生长因子过氧化氢酶
- 分泌型PD-L1真核表达载体的构建、表达及其体外效应的初步研究
- 2006年
- 目的构建分泌型PD-L1真核表达载体,并对其生物学活性进行初步研究。方法以RT-PCR方法从孕鼠胎盘中获得程序性死亡因子-1(programmed death-1,PD-1)配体PD-L1的胞外段基因片段,定向连接于pcDNA3．1上构建真核表达载体pcDNA-PDL1；用脂质体将重组子导入NIT细胞,转染后的NIT命名为NITp。以Western blot鉴定重组蛋白的表达。MTT比色法检测NITp细胞培养上清对同种混合淋巴细胞培养反应的影响；用ELISA试剂盒检测NITp细胞培养上清对反应性T细胞分泌的细胞因子的影响。结果RT-PCR得到约730bp目的基因片段,测序结果显示该目的基因与Gen- Bank上的序列相符；Western blot分析提示NITp分泌性表达目的蛋白；NITp培养上清可抑制混合淋巴细胞增殖,其效应呈剂量依赖性；反应性T细胞分泌的细胞因子检测结果显示,培养上清中IL-4、IFN-γ、IL-2水平降低,与正常对照组差异有统计学意义。结论成功构建PD-L1基因真核表达载体pcDNA-PDL1,PD-L1蛋白对同种细胞刺激的增殖反应有抑制作用,并可在一定程度上抑制特异性T细胞的活化。
- 胡萍季煜华李君武林绍强韦静李小兰黄泽棋
- 关键词：PD-L1混合淋巴细胞培养1型糖尿病
- 染料木黄酮抑制生长板软骨细胞的增殖与基质合成被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨染料木黄酮对大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)的形态、增殖和胞外基质成分合成的影响。方法:原代培养RGC,1×10-6μmol/L-1×10-4μmol/L染料木黄酮处理第1代RGC 24 h,观察RGC形态,同位素掺入检测RGC增殖、胶原和蛋白多糖合成,RT-PCR检测collagenⅡ和aggrecan基因表达。结果:染料木黄酮改变了RGC的形态,随着浓度的升高,突起和漂浮细胞的数量增加。染料木黄酮剂量依赖性地抑制RGC的增殖、胶原和蛋白多糖的合成(P<0.05),以及collagenⅡ和aggrecan mRNA的转录。结论:染料木黄酮抑制RGC的增殖和胞外基质的合成。
- 季煜华曾耀英俞瑜
- 关键词：染料木黄酮软骨细胞生长面
- 桑色素对小鼠T细胞增殖、周期和巨噬细胞分泌NO的影响被引量：5
- 2007年
- 目的:研究桑色素(morin)对小鼠T细胞增殖、细胞周期和腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮(nitrogen mon-oxidum,NO)的影响。方法:以佛波醇酯(phorbol 12,13-dibutyrate,PDB)和离子霉素(ionomycin,Ion)联合刺激淋巴结来源的小鼠T淋巴细胞,再以不同终浓度的morin与上述细胞共培养,利用流式细胞术(FCM),以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(carboxyfluorescein diacetate succinimide ester,CFDA-SE)染色检测T细胞的增殖;以碘化丙锭(pro-pidium iodide,PI)染色分析T细胞的细胞周期;脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞,与不同浓度morin共培养,以Griess反应检测上清液中的NO含量。结果:CFDA-SE染色分析显示,PDB+Ion组的增殖指数(proliferation index,PI)为1.70±0.05,各浓度的morin对PDB+Ion刺激的T细胞增殖,具有明显地抑制作用,以100μmol/L的morin抑制作用最明显,PI为1.03±0.01(P<0.01)。细胞周期的分析结果表明,morin组中处于S期的细胞比率较高,与PDB+Ion组相比有明显差异。Griess反应检测NO含量的结果显示,各浓度组的morin均抑制LPS刺激巨噬细胞产生NO,100μmol/L的morin可将LPS刺激巨噬细胞产生NO为(12.89±0.11)μmol/L降低为(7.25±0.05)μmol/L,抑制作用最强。结论:Morin可显著抑制PDB+Ion刺激的T细胞增殖;其对增殖的抑制作用主要表现为S期的细胞的阻滞;对LPS刺激巨噬细胞产生的NO也有显著的抑制作用。
- 臧宁曾耀英季煜华叶雪仪黄秀艳赵令斋周建国
- 关键词：桑色素T细胞增殖细胞周期巨噬细胞一氧化氮
