肇静娴
- 作品数：90 被引量：535H指数：13
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学机械工程更多>>
- 基于雌孕激素和调节性T细胞的母胎免疫耐受机制研究
- 第一章雌孕激素对小鼠体外和体内免疫应答的影响结论:我们的研究结果提示,妊娠期雌、孕激素在母胎界面局部(高浓度)和母体外周(较低浓度)介导完全不同的作用——在母胎界面,抑制母体对胎儿同种异基因抗原的应答,促进母胎免疫耐受的...
- 肇静娴
- 关键词：母胎界面免疫耐受母胎耐受胎盘绒毛
- 文献传递
- VEGF诱导血管内皮细胞产生H_2O_2及其促增殖作用被引量：19
- 2007年
- 目的:研究VEGF诱导血管内皮细胞产生细胞外H2O2及其在VEGF促血管内皮细胞增殖功能中的作用。方法:①以H2DCFDA为H2O2指示剂,检测500μg/LVEGF刺激下,血管内皮细胞H2O2的产生;②以MTT法检测3×106U/L过氧化氢酶(CAT),及外源性加入5-20mmol/LH2O2对VEGF促增殖功能的影响。结果:①在VEGF刺激血管内皮细胞15min后,细胞内开始出现逐渐增强的荧光,且随时间逐渐增强,至45min左右最强,随后逐渐减弱;而同时加入过氧化氢酶组的细胞则仅有微弱荧光产生,且荧光强度不随时间变化;②3×106U/L过氧化氢酶对VEGF的促增殖功能有明显的抑制作用(P<0.01);③外源性加入5-10mmol/LH2O2时对血管内皮细胞有明显促增殖作用(P<0.01),但其对VEGF的促增殖功能却有显著抑制作用(P<0.01)。结论:VEGF可刺激血管内皮细胞产生细胞外H2O2,在促细胞增殖中可能具有重要作用。而外源性H2O2对VEGF的生理功能可能具有抑制作用。
- 钱中清曾耀英王通林羿季煜华肇静娴
- 关键词：血管内皮细胞血管内皮细胞生长因子过氧化氢酶
- 人胎盘绒毛提取物体外对T细胞应答的抑制效应被引量：2
- 2006年
- 目的:了解胎盘绒毛对T细胞应答的抑制能力及其在妊娠周期不同阶段的变化.方法:制备孕10,20和37wk的绒毛提取物,通过检测CD69和CD25分子的表达,评价其对T细胞活化的影响,WST-1法分析其对T细胞增殖的影响,流式微球阵列(CBA)法分析其对Th1/Th2细胞因子谱的影响,并以Western印迹法分析提取物中吲哚胺-2,3双加氧酶(IDO)的含量.结果:孕早、中、晚期的胎盘绒毛提取物均能显著抑制植物血凝素(PHA)诱导的人T细胞活化,增殖,细胞因子分泌以及ConA诱导的小鼠T细胞活化(P<0.01).但三个时期的提取物对上述不同T细胞行为的抑制强度不同,以20wk提取物的抑制作用最强.提取物中IDO蛋白的含量20wk最高,37wk次之,10wk最低.结论:妊娠不同时期的绒毛滋养细胞均能够抑制T细胞应答,但抑制强度不一致,且对T细胞不同行为的抑制存在分离现象,提示妊娠不同时期的绒毛滋养细胞表达抑制因子的模式不同.
- 肇静娴曾耀英江逊季煜华刘毅
- 关键词：胎盘绒毛滋养层免疫抑制T淋巴细胞
- HIV-1 Vpr蛋白对C8166细胞毒性研究
- 2008年
- 目的利用腺病毒系统研究HIV-1Vpr蛋白在T细胞来源的C8166细胞内的高表达以及细胞内该蛋白对T细胞毒性。方法将表达目的蛋白Vpr的重组腺病毒rAd—vpr和空白载体病毒rAd—vector分别感染对数生长期的C8166细胞，流式细胞术（FCM）检测细胞周期分布、凋亡和坏死。用Hoechst—PI荧光染色观察细胞的凋亡和坏死，JC-1荧光染色测定线粒体膜电势。结果An—nexinV—PI染色及Hoechst—PI染色一致显示HIV-1Vpr能显著诱导C8166细胞凋亡和坏死；PI细胞周期结果表明HIV-1Vpr能阻滞C8166细胞于G2期；JC—1荧光染色法测定HIV-1Vpr致C8166线粒体膜电势下降。结论细胞内HIV-1Vpr介导的T细胞毒性包括线粒体功能障碍、细胞周期的G2期阻滞和细胞的死亡。
- 贺芳曾耀英王通肇静娴臧宁林长乐
- 关键词：重组腺病毒HIV-1VPR细胞死亡
- 地塞米松诱导小鼠胸腺细胞线粒体去极化与凋亡进程研究被引量：6
- 2006年
- 目的研究地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡进程中线粒体去极化作用特点。方法无菌获取Balb/c小鼠胸腺细胞,设对照组和DEX组;在5 h时点,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;利用DiOC6(3)/PI双染流式细胞术检测细胞线粒体去极化与死亡;利用DiOC6(3)/Annexin V-PE双染流式细胞术检测凋亡过程中的去极化现象。结果在1×10-6mol/L DEX诱导下,小鼠胸腺细胞在5 h凋亡百分率为(36.20±5.11)%,对照组为(4.10±0.98)%,差异显著(P<0.01);DEX组坏死百分率为(4.07±0.24)%,对照组为(1.25±0.25)%,差异显著(P<0.01)。DEX组线粒体去极化增强仍存活的细胞所占百分率为(46.77±6.21)%,显著高于对照组的(12.80±4.55)%(P<0.01)。DEX组线粒体去极化增强且已启动凋亡的细胞为(35.34±4.19)%,显著高于对照组的(7.21±0.61)%(P<0.01)。DEX组线粒体去极化作用增强未凋亡的细胞为(13.68±1.27)%,显著高于对照组的(6.85±0.92)%(P<0.01)。结论DEX诱导小鼠胸腺细胞发生典型细胞凋亡和线粒体去极化增强,在该进程中,线粒体去极化增强发生在细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻之前。
- 王通曾耀英邢飞跃梁佩燕肇静娴何贤辉
- 关键词：地塞米松小鼠胸腺细胞去极化线粒体
- 孕酮对人树突状细胞成熟和免疫功能的影响被引量：6
- 2008年
- 目的:研究孕酮(P4)对人外周血来源树突状细胞(DCs)成熟和免疫学功能的影响。方法:在人外周血来源DCs体外培养时加入两种浓度的P4(10-7mol/L和10-6mol/L)处理,光镜和电镜下观察DCs的生成情况及形态变化,以流式细胞仪分析各组细胞的免疫表型,用ELISA方法测定其分泌的IL-10和IL-12水平,[3H]-TdR掺入法检测体外混合淋巴细胞反应中DCs刺激同种反应性T细胞的增殖能力。结果:加入P4培养后,DCs树突状和膜面状伪足减少,表达低水平MHC-II分子和共刺激分子CD40、CD80和CD86,其分泌的IL-10水平升高,IL-12水平明显下降,DCs刺激同种反应性T细胞的功能显著下降。结论:P4抑制人外周血来源DCs的成熟,对其免疫学功能具有负性调节作用。
- 沈媛曾耀英肇静娴
- 关键词：树突细胞孕酮免疫功能
- 自发性流产小鼠模型主动脉旁淋巴结CD45^+CD86^+细胞亚群分析
- 2005年
- 目的:检测主动脉旁淋巴结(PLN)CD45+CD86+细胞,用于间接分析小鼠母-胎界面局部免疫状况。方法:CBA/J×DBA/2、未孕CBA/J雌鼠和CBA/J×BALB/c小鼠分别作为自发性流产模型(A组)、未孕对照(N组)和生育力正常对照(F组)。采用流式细胞术检测CD45+CD86+细胞在CD45+细胞中的百分率(简称CD45+CD86+百分率)和这些细胞的绝对数,其中单个核细胞从孕5.5、9.5和13.5d小鼠PLN和孕13.5d胎盘分离获得。为鉴定CD86+细胞所属类型,采用CD3、CD19和DX5分别作为T细胞、B细胞和NK细胞特异性标志物进行流式细胞检测。结果:A组胚胎吸收率和绝对数(29.3%,1.8±1.0)均显著高于F组(4.8%,0.3±0.5,P<0.01)。相应地,A组孕13.5dPLNCD45+CD86+细胞百分率和绝对数也均显著高于F组(分别为27.5%±14.0%vs12.3%±7.1%和1362±687vs615±353,P<0.01)。未孕CBA/J雌鼠PLNCD45+CD86+百分率为7.5%,与孕5.5dA组小鼠相近(10.6%),至孕9.5d时显著升高至23.9%(与未孕鼠相比,P<0.01;与孕5.5d小鼠相比,P<0.05),并保持高水平直至13.5d(27.5%)。相反,在CBA/J×BALB/c小鼠孕期未观察到这种趋势。结论:CBA/J×DBA/2小鼠流产开始发生于孕9.5d,此时CD45+CD86+细胞数增多,提示这些细胞与胚胎吸收相关。从PLN中分离淋巴细胞进行表型分析,有助于间接评价母-胎界面局部免疫状况。
- 林羿曾耀英肇静娴王通曾山冯铮狄静芳
- 关键词：流产淋巴结
- 喜树碱对小鼠T淋巴细胞活化、增殖以及细胞周期的影响被引量：9
- 2008年
- 目的:研究喜树碱(CPT)对刀豆蛋白A(ConA)介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响。方法:以ConA刺激小鼠T淋巴细胞,建立小鼠T淋巴细胞活化、增殖的模型,以不同浓度的CPT作用于该模型,流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子的表达;以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色流式细胞术分析CPT在ConA刺激下小鼠淋巴细胞的增殖相关指数(PI);以碘化丙啶染色流式细胞术分析细胞周期的分布情况。结果:ConA作用6h后流式细胞术分析显示CD69的表达率为(58.88±0.55)%,不同浓度的CPT组(10nmol/L、20nmol/L、50nmol/L、100nmol/L)CD69的表达率分别为(55.48±0.98)%、(54.67±1.05)%、(50.40±0.82)%、(42.47±1.32)%,均可明显抑制CD69的表达(P<0.01);ConA刺激48h后流式细胞术分析显示,不同浓度的CPT组(10nmol/L、20nmol/L、50nmol/L、100nmol/L)的增殖指数(PI)明显低于对照组(P<0.05);细胞周期分析显示刺激48h后不同浓度的CPT组(10nmol/L、20nmol/L、50nmol/L、100nmol/L)均出现明显的凋亡峰(apoptosispeak,AP),sub-G1期、G0/G1期细胞的比率明显高于ConA刺激组(P<0.01)。结论:CPT可明显抑制ConA刺激的T淋巴细胞的活化、增殖,同时使淋巴细胞阻滞于G0/G1期。
- 江颖娟曾耀英肇静娴古洁若
- 关键词：喜树碱T淋巴细胞细胞增殖细胞周期流式细胞术
- 紫外线对角质细胞线粒体功能及凋亡的影响研究被引量：9
- 2006年
- 目的:分析紫外线(UV)照射对HaCaT角质细胞系线粒体功能及凋亡的影响。方法:以紫外线低剂量(UVA2J/cm2,UVB10mJ/cm2)和高剂量(UVA6J/cm2,UVB30mJ/cm2)照射HaCaT细胞,继续培养15 h,用流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm)、线粒体质量(mitochondrial mass);使用碘化丙啶(PI)进行DNA染色并用流式细胞仪检测亚二倍体分析凋亡,以及进行Annexin V-FITC与PI共染色,用激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况。结果:HaCaT细胞经紫外线照射后,△ψm下降的细胞比例随着照射剂量的增加而增加,对照组、低剂量组及高剂量组分别为7.94%±1.02%、25.87%±4.55%、39.27%±5.32%;线粒体质量降低的细胞比例同样随着照射剂量的增加而增加,对照组、低剂量组以及高剂量组分别为15.19%±1.58%、40.36%±4.41%、68.79%±5.46%。用PI检测DNA含量所产生的亚二倍体峰观测凋亡率,对照组、低剂量组以及高剂量组凋亡率分别为1.82%±0.51%、30.16%±5.47%、58.49%±5.98%。用Annexin V-FITC/PI染色分析细胞凋亡程度,其结果与PI-DNA染色所得结果一致,对照组仅有少量细胞死亡,低剂量组凋亡细胞较对照组为多(Annexin V-FITC单阳性细胞),高剂量组以坏死细胞为多(Annexin V-FITC/PI双阳性)。结论:HaCaT细胞经紫外照射后,线粒体去极化作用增强,同时线粒体质量降低,这些变化与细胞凋亡相关。
- 王会营曾耀英王通邢飞跃肇静娴季煜华
- 关键词：HACAT细胞紫外线线粒体
- 佛波醇酯加离子霉素诱导脐血和成人外周血CD4^+CD25^+ T细胞分泌IL-2的相关机制研究被引量：3
- 2006年
- 目的:以佛波醇酯加离子霉素作为刺激剂,验证CD4+CD25+调节性T细胞本身并不存在分泌IL-2障碍;同时通过对脐血和成人外周血的比较性研究,了解脐血CD4+CD25+T细胞的成熟度。方法:以autoMACS从足月婴儿脐血(CB)和成人外周血(PB)分选CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞,以PDB+ionomycin作为刺激剂,培养45h后流式细胞术检测各组细胞表达CD69和CD25水平,并以Luminex多重细胞因子检测技术检测培养上清中7种细胞因子的浓度。结果:经PDB+ionomycin刺激后,CB、PB的CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞均发生增殖,但在培养45h后CD4+CD25+T细胞均出现细胞状态变差或死亡倾向。CB、PB的CD4+CD25+T细胞活化后CD25分子表达进一步上调,高于CD25-细胞活化后的CD25分子密度。经PDB+ionomycin刺激后,PB CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞均分泌高水平的IFN-γ、IL-2和TNF-α,但CD25+细胞分泌IL-5、IL-4和IL-10水平远远高于CD25-细胞;CBCD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞亦分泌高水平的IL-2和TNF-α,但IFN-γ水平远远低于PB,基本不分泌IL-5、IL-4和IL-10。结论:CD4+CD25+T细胞本身并不存在合成和分泌IL-2障碍,其可能具有与传统T细胞不同的T细胞受体信息转导模式;脐血CD4+CD25+T细胞功能尚未完全成熟。
- 肇静娴曾耀英李海仙曾祥凤季煜华何贤辉
- 关键词：CD4^+CD25^+T细胞佛波醇酯类
