王曦
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：宁夏医科大学临床医学院更多>>
- 发文基金：中国科学院西部之光基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PGC-1β基因干扰载体的构建及其对乳腺肿瘤细胞增殖的影响
- 2017年
- 目的构建过氧化物酶体增殖物激活受体辅助活化因子1β(peroxisome proliferative actives receptorγcoactivator-1β,PGC-1β)基因干扰载体,并将其转入人乳腺肿瘤细胞MCF-7中,验证其干扰效应及对肿瘤细胞增殖的影响。方法应用PCR技术扩增得到人PGC-1β的全长序列,克隆入p GEM-T easy载体中,筛选阳性克隆,经酶切鉴定、测序鉴定证实克隆成功。构建人PGC-1β基因干扰载体,命名为p Genesil/sh PGC-1β。将干扰载体利用Lip3000转至乳腺肿瘤细胞系MCF-7中,通过Real-time PCR、Western blot技术检测外源基因PGC-1β的表达。同时利用MTT、平板克隆形成实验检测转染干扰载体对MCF-7细胞增殖能力的影响。结果经双酶切鉴定证实构建的PGC-1β干扰载体的酶切片段与预期大小一致;Real-time PCR与Western blot结果显示与MCF-7细胞组及转染空载体组相比,转染干扰载体组MCF-7细胞中PGC-1βm RNA与PGC-1β蛋白的表达水平均下降(P<0.05)。平板克隆形成和MTT实验结果表明,转染干扰载体组与空载体组及MCF-7细胞组相比,细胞的增殖能力减弱(P<0.01)。结论成功构建PGC-1β基因干扰载体(p Genesil/sh PGC-1β),转染MCF-7细胞可抑制其增殖能力,为后续深入研究PGC-1β对肿瘤细胞的作用机制奠定了基础。
- 曹佳王曦严秀蕊金毅然王立斌
- 关键词：增殖
