余雳
- 作品数：7 被引量：6H指数：2
- 供职机构：湖南大学生物学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- E-cadherin启动子的荧光示踪体系的建立及验证
- 2020年
- 为实现对肺癌A549细胞的EMT示踪,构建了E-cadherin基因启动子的慢病毒质粒,并与包装质粒pVSVG、Δ8.91共转染HEK293T细胞,包装成有活性的慢病毒,收取病毒感染A549细胞,利用流式细胞仪和Western blot检测感染成功.进一步用TGF-β诱导感染成功的A549细胞,通过在荧光显微镜下观察荧光变化、荧光定量PCR和Western blot检测GFP和E-cadherin的变化,发现在TGF-β诱导48 h后,A549细胞形态由鹅卵石样变成长梭形.并且荧光显微镜观察到相比较于未诱导的细胞,诱导后的A549细胞绿色荧光明显变暗,同时GFP和E-cadherin的RNA水平和蛋白质表达水平均降低.以E-cadherin基因启动子为基础建立了A549细胞的EMT荧光示踪体系,为进一步研究肺癌的EMT过程提供了材料.
- 谭拥军吴东丽余雳陈燕
- 关键词：启动子E-CADHERIN示踪肺癌细胞
- 四环素诱导表达CARM1在乳腺癌细胞中的生物学效应
- 2021年
- 为了探究共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1(CARM1)在乳腺癌细胞中的生物学作用,构建了四环素诱导过表达CARM1的乳腺癌MDA-MB-231细胞株,并应用蛋白质印迹法(Western blot)、实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)对相关指标进行检测。结果发现,在乳腺癌细胞株中成功诱导CARM1过表达之后,CARM1蛋白水平和mRNA水平均显著升高。此外,利用细胞划痕、平板克隆、细胞增殖试验、流式细胞术等试验方法检测过表达CARM1对细胞迁移、增殖、克隆形成以及细胞周期进程的影响。试验结果显示,诱导CARM1过表达后,细胞迁移能力和克隆形成能力均明显增强,同时细胞增殖试验表明细胞的增殖能力也明显增强。流式细胞术分析发现,诱导表达CARM1后,细胞株S期和G2/M期的细胞比率增加,过表达CARM1能够促进细胞周期的进程。以上研究结果提示,在乳腺癌细胞中过表达CARM1可以促进细胞的增殖、提高细胞的克隆形成及迁移的能力,加快细胞周期进程。该结论为后续CARM1在乳腺癌细胞中的相关研究奠定了基础。
- 张倩陈涛琳余雳黄明敏谭拥军
- 关键词：细胞迁移
- FOXM1_(688-748)结构域相互作用蛋白的鉴定
- 2021年
- 为了鉴定转录因子FOXM1转录激活结构域(C-端第688位到748位氨基酸序列)的互作蛋白,以FOXM1的cDNA为模板,采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法扩增获得其转录激活结构域序列,克隆进入原核表达载体pGEX-4T2;利用大肠杆菌原核表达获得融合谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-Transferase,GST)标签的重组蛋白GST-FOXM1_(688-748);通过GST-pulldown结合质谱方法鉴定FOXM1_(688-748)的互作蛋白,成功构建了原核表达质粒pGEX-4T2-FOXM1_(688-748),获得了原核表达的重组蛋白GST-FOXM1_(688-748).将质谱鉴定获得的互作蛋白进行分析和归类,预示一些互作蛋白可以参与激活FOXM1的转录活性,如RPN2、MISP、MCM7蛋白,一些互作蛋白可以参与调控FOXM1蛋白的稳定性,如USP9Y、CUL4A、HSPB1、BAG2蛋白.FOXM1蛋白的转录激活结构域与许多不同功能的蛋白发生相互作用,暗示该结构域具有重要的分子生物学作用,期望为以FOXM1为靶点的临床药物研发提供实验依据.
- 谭拥军杨仕平余雳黄小芹陈燕谭桂湘
- 关键词：原核表达相互作用
- 细胞选择性穿膜肽的穿膜效果研究被引量：2
- 2019年
- 细胞穿膜肽是一类能够穿透细胞膜并且不损坏细胞膜结构的小分子多肽,该多肽一般由不多于30个氨基酸组成.针对FITC标记的具有肺癌或肝癌细胞选择性的两种穿膜肽,设置不同浓度梯度,分别处理多种肿瘤细胞,荧光显微镜下观察不同作用浓度下细胞中绿色荧光的强弱,并通过流式细胞仪检测含有荧光的细胞数.结果表明:两种细胞穿膜肽具有不同的细胞选择性.CPP33在作用浓度为10μmol/L时能观察到较强的荧光选择性,流式细胞仪检测含有荧光的细胞数约大于50%,CPP44在作用浓度为10μmol/L时能观察到较强的荧光选择性,流式细胞仪检测含有荧光的细胞数约大于60%.并且随着作用浓度的增加,两种细胞中含有荧光的细胞数不断上升.因此这种针对肿瘤细胞的选择性穿膜肽可能为小分子药物在体内的精确递送提供一种新的方法.
- 谭拥军王坤余雳黄小芹陈燕谭桂湘
- 关键词：肺癌肝癌浓度梯度小分子药物
- Ad LacZ对肿瘤感染效率的实验研究
- 2015年
- 基于腺病毒的靶向基因治疗是肿瘤生物治疗方式之一.为了更好的了解腺病毒靶向药物在裸鼠实体瘤中的运作效果,本研究中利用重组腺病毒报告载体Ad LacZ分别转染人肿瘤细胞系和裸鼠实体瘤,结合X-gal染色和组织切片的方法观察腺病毒载体在实体瘤原位转染后的运作模式,为实体瘤实验提供更多的经验借鉴和实验基础.
- 陈慧余雳杨潮
- 关键词：基因治疗ADLACZ实体瘤细胞密度
- 穿膜肽TAT和R9的生物学效应的体内体外研究被引量：4
- 2019年
- 本文比较了两种常用穿膜肽TAT和R9的体外穿膜效率、对细胞影响以及小鼠活体内不同器官的穿膜效率。非特异性穿膜肽TAT和R9分别为11个氨基酸和9个氨基酸的短肽,能够有效地穿过细胞膜进入细胞。本研究纯化制备出融合蛋白TAT-EGFP及R9-EGFP多肽,用相同浓度的活性TAT-EGFP和R9-EGFP处理肺癌细胞,观察比较二者的穿膜活性及效率;设置不同浓度梯度检测两种穿膜肽是否对细胞产生影响;通过小鼠腹腔注射TAT-EGFP和R9-EGFP活性肽段,研究二者在活体能够穿膜到达的靶位置,并比较分析二者穿膜的效果器官分布。结果显示制备获得的两种融合蛋白TAT-EGFP和R9-EGFP均能有效穿过实现穿膜功能,两种穿膜肽对乳腺癌细胞影响较小。活体试验证明两种穿膜肽在心、肝、脾、肺、肾器官均有分布,R9主要富集在小鼠的肾和肝脏中,TAT在6种被研究的器官都有富集,两种细胞穿膜肽都能透过血脑屏障到达脑部。相对来说,TAT在小鼠活体中的穿膜效果更好,荧光富集多,R9整体穿膜效果较弱。本研究分析比较了两种穿膜肽的细胞安全性浓度和活体的穿膜能力,为TAT和R9两种穿膜肽在后续试验中的合理有效的选择和使用,提供了基础数据和指导性依据。
- 徐咏婷陈燕余雳谭桂湘谭拥军黄明敏
- 基于NF-κB荧光蛋白报告基因抗肿瘤药物筛选平台的建立
- 2022年
- 采用基因工程技术构建绿色荧光蛋白(GFP)报告基因质粒,有利于活细胞成像、蛋白质印迹(WB)、细胞流式分析及活细胞示踪等,从而对抗肿瘤药物进行筛选。利用聚合酶链反应(PCR)扩增NF-κB基因的启动子序列以及GFP基因片段,将其克隆到pGL6-Enhancer载体中,通过菌落PCR检测、酶切鉴定和测序证明了质粒构建成功。然后,将构建的质粒转染到HEK-293T细胞中,根据活细胞荧光成像、WB及流式细胞分析验证,构建的报告基因质粒在细胞内可正常表达。选择抗肿瘤药物雷帕霉素、紫杉醇、吉西他滨,以及本实验室正在研究开发的多肽类抗肿瘤药物M1-20、M1-21验证报告基因体系试验,发现构建的报告基因质粒可以响应药物对细胞的影响。该药物筛选平台的建立为研究抗肿瘤药物对供试细胞的影响提供了良好的试验技术体系,同时,也为构建活细胞示踪体系提供了材料。
- 王瑞萍程浩杰余雳黄明敏谭拥军
- 关键词：报告基因启动子分子克隆抗肿瘤药物
