李倩男
- 作品数：7 被引量：36H指数：4
- 供职机构：武汉大学人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 安石榴甙在机械力诱导成纤维细胞凋亡中的作用及其机制研究
- 2017年
- 目的:探索安石榴甙(PUN)在机械力诱导成纤维细胞凋亡中的作用及其可能机制。方法:不同浓度(0、2.5、5、10、25、50、100μmol/L)的PUN处理L929细胞不同时间(12、24、48小时)后,采用CCK8法检测细胞增殖活性;采用Western blot检测不同浓度PUN(0、2.5、5、10、25μmol/L)处理24小时后Nrf2蛋白表达;将L929细胞根据是否行PUN(10μmol/L,24小时)预处理和是否采用四点弯曲力学加载系统进行机械力干预(5333μstrain,1 Hz,4小时)分为4组:空白对照组、加力组、PUN组及PUN加力组,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;采用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及caspase3的表达;采用H2DCF-DA荧光探针检测各组细胞内活性氧簇(ROS)水平的变化。结果:PUN在浓度10μmol/L、作用时间24小时对细胞增殖活性及Nrf2蛋白表达的促进作用最显著;与对照组相比,加力组细胞凋亡率明显增加、ROS水平显著上升、Bax表达和Active-caspase3/caspase3比率明显增加(P<0.05);与加力组相比,PUN加力组细胞凋亡率显著减少、ROS水平明显降低、Bcl2表达显著增加、Bax表达和Active-caspase3/caspase3比率降低(P<0.05)。结论:PUN可明显减少机械力诱导的成纤维细胞凋亡,其机制可能是通过上调抗氧化蛋白Nrf2的表达,从而抑制机械力诱导ROS水平上升所导致的氧化损伤。
- 王琳琳李秉枢刘成李倩男汤剑明胡鸣洪莉
- 关键词：压力性尿失禁氧化应激凋亡
- 利用慢病毒载体建立过表达Nfe2l2基因的L929细胞株实验研究
- 2018年
- 目的利用慢病毒载体建立过表达Nfe2l2基因的L929细胞株,为探讨Nfe2l2基因在结缔组织成纤维细胞细胞外基质(ECM)重构中的作用奠定实验基础。方法 2014年12月—2015年5月,通过双酶切将Nfe2l2目的基因连接到GV341载体(Ubi-MCS-3FLAG-SV40-puromycin),经扩增、转化、验证、测序、质粒抽提,将携带目的基因的工具GV341载体质粒及病毒包装辅助质粒Helper1.0、Helper2.0转染293T细胞,完成慢病毒包装及质量检测后获取慢病毒工具载体LV-Nfe2l2,病毒感染L929细胞72 h后筛选稳定表达的细胞株L929/LV-Nfe2l2,采用Realtime qPCR测定Nfe2l2的表达。结果经比对,构建的LV-Nfe2l2阳性克隆序列与目的基因Nfe2l2相符;L929细胞达到80%感染效率的最佳感染条件为:在ENi.S培养基中进行感染,设定感染复数(MOI)为8～10,感染时间为72 h。Real-time qPCR结果显示,经筛选的L929/LV-Nfe2l2细胞中Nfe2l2基因表达丰度为高(ΔCt值≤12)。结论本研究成功构建了一种过表达Nfe2l2基因的慢病毒载体;LV-Nfe2l2感染L929细胞后可实现目的基因的高表达,经筛选的L929/LV-Nfe2l2细胞株可用于后续实验研究。
- 刘成汤剑明李洋杨将李倩男刘耀丹洪莉
- 关键词：转染慢病毒属成纤维细胞细胞外基质
- 丹皮酚通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制人卵巢癌A2780细胞增殖的实验研究被引量：18
- 2017年
- 目的探讨丹皮酚对人卵巢癌A2780细胞的生长抑制及诱导凋亡作用,揭示Wnt/β-catenin信号转导通路分子机制。方法对数生长期人卵巢癌A2780细胞分为对照组(0mmol/L丹皮酚)和0.4、0.8、1.6mmol/L丹皮酚组,采用CCK-8法检测丹皮酚作用24、48、72h时人卵巢癌A2780细胞增殖活性;丹皮酚作用48h后,应用流式细胞仪检测人卵巢癌A2780细胞周期,采用Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)、β-catenin和c-Myc蛋白表达水平;丹皮酚作用0、24、48h,采用划痕实验检测人卵巢癌A2780细胞迁移能力。结果丹皮酚作用24、48、72h,人卵巢癌A2780细胞增殖活性在对照组为(100.00±3.28)%、(100.00±2.34)%、(100.00±2.89)%,在0.4 mmol/L丹皮酚组为(93.26±4.21)%、(80.23±5.43)%、(72.04±4.89)%,在0.8mmol/L丹皮酚组为(81.25±3.13)%、(71.65±4.78)%、(62.32±4.39)%,在1.6mmol/L丹皮酚组为(60.85±2.35)%、(45.89±5.34)%、(35.74±3.19)%,除0.4mmol/L丹皮酚组作用24h外,0.4、0.8、1.6mmol/L丹皮酚组不同作用时间人卵巢癌A2780细胞增殖活性均低于对照组(P<0.05),0.8 mmol/L丹皮酚组作用24h,1.6mmol/L丹皮酚组作用24、48、72h人卵巢癌A2780细胞增殖活性均低于0.4 mmol/L丹皮酚组(P<0.05),1.6mmol/L丹皮酚组作用24、48、72h人卵巢癌A2780细胞增殖活性均低于0.8 mmol/L丹皮酚组(P<0.05),0.4、0.8、1.6mmol/L丹皮酚组作用72h人卵巢癌A2780细胞增殖活性低于24h(P<0.05);丹皮酚作用48h,0.4、0.8、1.6mmol/L组G1期细胞比例(73.08%,68.46%、52.95%)低于对照组(78.30%),S期细胞比例(19.61%、26.11%、39.05%)高于对照组(17.48%)(P<0.05);丹皮酚作用48h,0.4、0.8、1.6mmol/L组Bax蛋白表达明显高于对照组,0.8、1.6mmol/L组Bcl-2、β-catenin和c-Myc蛋白表达明显低于对照组(P<0.05);划痕实验结果表明,细胞迁移能力随丹皮酚浓度增加和作用时间延长明显下降(P<0.05)。结论丹皮酚可抑制人卵巢癌A2780细胞
- 李倩男王琳琳汤剑明洪莉
- 关键词：卵巢癌A2780细胞丹皮酚细胞迁移
- Twist1与Jagged1基因在人卵巢癌A2780细胞顺铂耐药中的作用被引量：5
- 2017年
- 目的探讨碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist basic helix-loop-helix transcription factor 1,Twist1)与Notch信号通路配体Jagged1(Notch ligand Jagged-1,Jagged1)在人卵巢癌A2780细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药中的作用。方法实验分为敏感组(人卵巢癌DDP敏感A2780细胞),耐药组(DDP耐药A2780/DDP细胞),转染组[应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术转染A2780/DDP细胞,干扰Twist1基因表达为A2780/DDP/si-Twist1、干扰Jagged1基因表达为A2780/DDP/si-Jagged1、空转不干扰Twist1及Jagged1基因表达为A2780/DDP/si-NC]。采用Western blot法检测3组Twist1、Jagged1蛋白表达水平;采用CCK-8比色法检测耐药组和转染组细胞DDP敏感性,生长曲线分析耐药组和转染组细胞增殖状况,流式细胞仪检测耐药组和转染组细胞凋亡情况。结果耐药组A2780/DDP细胞Twist1和Jagged1蛋白表达水平均高于敏感组A2780细胞(P<0.05);转染组A2780/DDP/si-Twist1细胞Twist1和Jagged1蛋白表达水平均低于耐药组A2780/DDP细胞和转染组A2780/DDP/si-NC细胞(P<0.05);转染组A2789/DDP/si-Jagged1细胞Jagged1蛋白表达水平低于耐药组A2780/DDP细胞和转染组A2780/DDP/si-NC细胞(P<0.05),Twist1蛋白表达水平与耐药组A2780/DDP细胞和转染组A2780/DDP/si-NC细胞比较差异无统计学意义(P>0.05);转染组A2780/DDP/si-Twist1细胞对DDP的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)[(19.53±0.32)mg/L]低于耐药组A2780/DDP细胞[(30.57±0.27)mg/L]和转染组A2780/DDP/si-NC细胞[(29.61±0.35)mg/L],细胞凋亡率[(34.74±3.15)%]高于耐药组A2780/DDP细胞[(21.56±1.99)%]和转染组A2780/DDP/si-NC细胞[(23.49±2.27)%](P<0.05)。结论 Twist1可通过调控Jagged1基因表达,介导人卵巢癌A2780细胞的增殖和凋亡,参与对DDP耐药的调节。
- 杨将邢辉洪莉卢丹华李倩男刘耀丹何松明
- 关键词：卵巢癌A2780细胞JAGGED1小干扰RNA顺铂耐药
- 机械力对小鼠成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响研究被引量：4
- 2017年
- 目的:探讨机械力对小鼠成纤维细胞L929细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅠ、CollagenⅢ)表达的影响及其可能机制。方法:选取L929细胞为研究对象,使用四点弯曲细胞力学加载系统对细胞进行机械力干预,加力时间为4小时,加力频率为1 Hz;L929细胞分别经0、1333μ和5333μ机械力干预后,采用CCK8检测不同大小机械力对细胞活性的影响。L929细胞分别经0和5333μ机械力干预后,采用Western blot检测两组细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad蛋白(Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3)和CollagenⅠ、CollagenⅢ的表达,采用实时荧光定量PCR检测两组细胞TGF-β1、Smad2、Smad3、CollagenⅠ和CollagenⅢmRNA的表达,采用细胞免疫荧光检测细胞内Smad2/3的核转移情况。结果:与对照组相比,L929细胞经1333μ机械力干预后细胞增殖活性明显上升,而5333μ机械力干预后细胞增殖活性显著下降(P<0.05)。与对照组相比,5333μ组细胞TGF-β1、pSmad3、CollagenⅠ、CollagenⅢ水平及TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达均明显降低(P<0.05),且Smad2/3核转移被明显抑制;而细胞Smad2、Smad3、p-Smad2蛋白及Smad2、Smad3 mRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:5333μ机械力可降低小鼠成纤维细胞CollagenⅠ、CollagenⅢ的表达,其机制可能与TGF-β1/Smads信号转导通路抑制有关。
- 李倩男李秉枢刘成王琳琳汤剑明李洋洪莉
- 关键词：成纤维细胞胶原蛋白转化生长因子Β1压力性尿失禁
- 胶原代谢相关信号通路研究进展被引量：4
- 2017年
- 胶原蛋白是一类结构独特的蛋白质,广泛存在于哺乳动物中,是结缔组织的主要结构元素,与机体的疾病和衰老关系密切。胶原的代谢过程由一系列信号转导通路和细胞因子共同调控,TGF-β/Smad、PI3K/Akt、MAPK、Wnt、NF-κB等众多信号通路网络交互影响,共同介导胶原合成与分解的代谢过程。本文将对参与胶原代谢主要的信号通路进行综述。
- 李倩男洪莉
- 关键词：胶原代谢MMPSTIMPS信号通路
- 电刺激对小鼠成纤维细胞L929细胞活性、衰老及凋亡的影响被引量：5
- 2017年
- 目的观察不同强度及作用时长的电刺激对小鼠成纤维细胞L 929细胞活性、衰老及凋亡的影响。方法实验于2016年7~10月在武汉大学人民医院中心实验室进行。根据电刺激时长的不同,将小鼠成纤维细胞L 929细胞分为0 h组、2 h组、4 h组、6 h组,其中0 h组为对照组;根据电刺激强度的差异再将每组细胞分为50 mV/mm、100 mV/mm、200 mV/mm组,共计12组。采用CCK-8试剂盒、细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒、线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测其活性、衰老及凋亡,每组实验重复4次。结果与对照组相比,50 mV/mm 4 h与6 h组、100 mV/mm 2 h组细胞活性增高(P<0.05),而50 mV/mm 2 h组、100 mV/mm 6 h组、200 mV/mm 2 h与6 h组细胞活性下降(P<0.05),100 mV/mm 4 h组、200 mV/mm 4 h组细胞活性变化不明显;100 mV/mm 2 h组细胞衰老率降低(P<0.05),而50 mV/mm 2 h、4 h、6 h组、100 mV/mm 6 h组、200 mV/mm 4 h与6 h组细胞衰老率升高(P<0.05),100 mV/mm 4 h组、200 mV/mm 2 h组细胞衰老率变化不明显;50 mV/mm 2 h组与100 mV/mm 2 h组凋亡细胞比例下降,其余组凋亡细胞比例均升高。结论小鼠成纤维细胞L 929细胞在不同的电场强度及作用时长下活性、衰老、凋亡状态各不相同,因此在研究电刺激对细胞的影响时,应充分考虑电刺激的强度及作用时间。其中,100 mV/mm 2 h的直流电刺激可以提高小鼠成纤维细胞L 929细胞的活性,抑制其衰老及凋亡。
- 李素廷洪莉闵洁汤剑明胡鸣李洋刘耀丹李倩男何松明杨将
- 关键词：电刺激细胞活性衰老凋亡
