李欣然
- 作品数：19 被引量：60H指数：5
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
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- 热休克预处理对化疗环境下骨髓间充质干细胞存活率的影响及机制
- 2021年
- 目的:探索热休克预处理(heat shock pretreatment,HSP)对化疗微环境下骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的影响及其潜在机制。方法:探索HSP最佳条件,往热休克预处理BMSCs(heat shock pretreated bone marrow mesenchymal stem cells,HS-MSCs)培养基中加入顺铂,通过CCK-8检测细胞增殖率,Hoechst33342/PI测定存活率,流式细胞仪检测凋亡率。使用Western blot检测不同时间点HS-MSCs热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)、Hsp90、自噬相关蛋白Beclin1和LC3B的表达。通过透射电镜观察自噬小体数量。结果:加入顺铂后,热休克模型组凋亡率明显低于模型组。此外,热休克模型组增殖速率较模型组增加,而表达亮蓝色/暗红色荧光的比例则低于模型组。HS-MSCs内Hsp70和Hsp90的表达随时间推移逐渐上调,并在48 h后达峰值。同时,细胞内自噬小体减少、Beclin1表达降低、LC3BⅡ/LC3BⅠ比值下降。结论:HSP能够提高化疗微环境下BMSCs的存活与抗凋亡能力,其作用可能与HSP增强Hsp70及Hsp90的表达、减弱自噬水平有关。
- 李欣然王清汪庆如谢嘉欣朱洪磊周曼萍肖苑玲付霞霏
- 关键词：热休克骨髓间充质干细胞化疗热休克蛋白自噬
- CM-Dil标记示踪间充质干细胞可行性的体外试验被引量：1
- 2018年
- 目的探讨氯苯甲酰氨-1,1′双十八烷基-3,3′,3′,3′-四甲基吲哚羰基花青高氯酸盐(CM-Dil)体外标记骨髓间充质干细胞的可行性。方法分离培养并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞,分别用1、2、4μg/mL的CM-Dil标记间充质干细胞,观察标记后15min、24h、48h、72h、传5代、传8代的标记率;用流式细胞仪检测标记前后细胞周期的变化;用细胞计数Kit-8(CCK8)法检测细胞增殖能力。结果采用全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞CD44、CD29表达阳性,CD34、CD45表达阴性。1、2、4μg/mL CM-Dil标记15min后标记率分别为(31.60±1.25)%、(88.73±1.79)%、(96.89±1.31)%,差异有统计学意义(F=1 757.21,P=0.000);4组间生长曲线趋势大致相同,且4组间G1期、S期及G2/M期细胞百分比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 4μg/mL CM-Dil细胞标记率高,无细胞毒性,可作为一种高效而稳定的体外标记间充质干细胞的方法。
- 陈小莹李欣然王清付霞霏
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- 间充质干细胞过表达miR-21对卵巢颗粒细胞凋亡的影响被引量：5
- 2018年
- 目的探讨过表达miR-21的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)对卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法构建miR-21慢病毒表达载体(LV-miR-21),转染BMMSCs获得稳定表达miR-21的BMMSCs(miR-21-BMMSCs)。培养Wistar大鼠卵巢颗粒细胞,实验分为5组:正常组、磷酰胺氮芥(PM)组、miR-21组、BMMSCs组、miR-21-BMMSCs组。正常组为颗粒细胞不加药,PM组加入30μmol/L的磷酰胺氮芥,miR-21组加入PM诱导颗粒细胞凋亡后转染LV-miR-21,BMMSCs组、miR-21-BMMSCs颗粒细胞培养基中加入PM 24h后分别与BMMSCs、miR-21-BMMSCs以1:1比例共培养。48h后采用流式细胞仪检测颗粒细胞凋亡情况,qRT-PCR法检测miR-21、程序性死亡因子4(PDCD4)、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)mRNA的表达量,Western blotting检测PTEN、PDCD4蛋白表达水平。结果正常组、PM组、miR-21组、BMMSCs组、miR-21-BMMSCs组的细胞凋亡率分别为10.4%±1.8%、33.4%±4.2%、27.0%±2.5%、28.0%±2.0%、19.6%±1.5%,5组间比较差异有统计学意义(F=59.35,P=0.00),其中miR-21-BMMSCs组细胞凋亡率明显低于miR-21组、BMMSCs组,但仍高于正常组。miR-21-BMMSCs组miR-21的表达量(4.0310±0.2314)明显升高,而PTEN、PDCD4的mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论 BMMSCs过表达miR-21可明显减少卵巢颗粒细胞的凋亡,其机制可能与对靶基因PTEN、PDCD4的调控作用有关。
- 王清陈小莹李欣然汪庆如付霞霏
- 关键词：MIR-21化学治疗卵巢功能早衰细胞凋亡
- miR-21调控PTEN及PDCD4基因治疗化疗性卵巢早衰被引量：11
- 2017年
- 目的:探讨miR-21在化疗性卵巢早衰大鼠模型中的治疗潜能及其可能机制。方法:体外构建miR-21慢病毒载体(LV-miR-21)。将大鼠随机分为空白对照组、模型组、空载组及miR-21组,通过腹腔注射环磷酰胺(CTX)建立化疗所致卵巢早衰大鼠模型。建模后往miR-21组大鼠双侧卵巢注射LV-miR-21,注射后第1、15、30、45、60天分批处死大鼠。阴道脱落细胞涂片检测大鼠动情周期;化学发光法与免疫放射法测定性激素水平;进行卵巢称重、计数各级卵泡数;TUNEL法测定卵巢组织颗粒细胞凋亡率;qRT-PCR、Western blot法检测miR-21靶基因PTEN、PDCD的mRNA及蛋白水平。结果:体外成功构建miR-21慢病毒载体。实验结束时,miR-21组有64%(16/25)大鼠恢复规律动情周期。注射后第15、30、45、60天,miR-21组的E_2水平、卵巢颗粒细胞凋亡率均高于模型组和空载组(P=0.000),FSH水平以及PTEN、PDCD4的mRNA、蛋白表达较相应时间点的模型组和空载组显著下降(P=0.000)。注射后第30、45、60天,miR-21组的卵巢重量显著高于模型组和空载组,但仍低于空白对照组;注射后第45、60天,miR-21组各级卵泡数均多于模型组和空载组(P=0.000);结论:miR-21在化疗诱导卵巢早衰大鼠模型中具有治疗潜能,其具体作用机制可能与下调靶基因PTEN、PDCD4有关。
- 李欣然何援利王雪峰彭冬先陈小莹王清付霞霏
- 关键词：MICRORNA-21卵巢早衰卵巢颗粒细胞PTENPDCD4
- 早发型、迟发型单胎胎儿生长受限的病因及妊娠结局比较被引量：4
- 2020年
- 目的比较早发型与迟发型单胎胎儿生长受限(FGR)的病因及妊娠结局。方法收集112例FGR的临床资料,其中早发型40例(早发组)、迟发型72例(晚发组),比较FGR妊娠并发症及合并症发生情况、胎儿染色体检查结果、发病高危因素(不良孕产史等)、妊娠结局(分娩孕周、分娩方式、胎盘病理检查、新生儿出生体重、产后2 h出血量等)。结果两组妊娠并发症、合并症、脐血流和(或)大脑中动脉血流异常、胎盘病理异常发生情况、剖宫产率及产后2 h出血量间差异无统计学意义(P均>0.05)。与早发组比较,晚发组平均分娩孕周晚(P<0.05)。早发型组年龄≥35岁者7例、存在自然流产及早产史者16例、有妊娠合并症及并发症者20例、抗核抗体等阳性者9例、超声存在血流异常5例、羊水过少4例、胎盘异常10例、足月妊娠31例、胎儿丢失4例、剖宫产15例、存在产后出血1例、新生儿窒息2例、足月新生儿体重≥2.5 kg者17例,晚发组分别为13、17、37、9、11、1、26、66、0、28、0、2、34例。结论早发组与晚发组病因基本相同,早发型FGR更容易出现严重的脐血流异常,胎儿丢失率较晚发型FGR高;晚发型FGR平均分娩孕周较晚。
- 肖苑玲潘石蕾蔡蔚李欣然
- 关键词：胎儿生长受限
- 热休克预处理大鼠骨髓间充质干细胞对化疗诱导卵巢颗粒细胞凋亡的抑制作用被引量：2
- 2020年
- 目的骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)可促进卵巢血管生成,改善化疗所致的卵巢功能不全,修复卵巢功能,而热休克预处理可降低干细胞的凋亡率,提高干细胞的治疗效果。文章拟研究热休克预处理对MSCs的影响,进一步研究热休克预处理的间充质干细胞对化疗诱导卵巢颗粒细胞凋亡的作用。方法分离、培养及鉴定大鼠骨髓MSCs,采用42℃水浴1 h预处理。向MSCs中加入顺铂(5 mg/L)模拟化疗局部微环境。分为4组:空白对照组、热休克对照组、模型组、热休克模型组。空白对照组为不予其他处理的MSCs,热休克对照组为热休克预处理后的MSCs,模型组为顺铂(5 mg/L)作用后的MSCs,热休克模型组为热休克预处理后再予顺铂(5 mg/L)作用的MSCs。通过CCK-8法、Hoechst33342/PI、流式细胞仪检测法,探究热休克预处理对MSCs的增殖、凋亡及存活率的影响。分离、培养大鼠卵巢颗粒细胞(GCs),建立顺铂(5 mg/L)诱导GCs损伤的体外模型。分为4组:对照组、模型组、MSCs模型组、HS-MSCs模型组。对照组为未经处理的GCs;模型组为经顺铂(5 mg/L)作用后的GCs;MSC模型组、HS-MSCs模型组为GCs加入顺铂(5 mg/L)诱导凋亡后24h分别与MSCs、HS-MSCs以1∶1比例加入Transwell培养板中实现GCs与MSCs的共培养。通过流式细胞仪检测法、Hoechst33342/PI法,探究热休克预处理MSCs是否具有抑制化疗诱导的GCs凋亡的作用。结果在第3、4天热休克对照组MSCs增殖水平显著高于其他3组,MSCs凋亡率低于其他3组;与模型组相比,热休克模型组第3、4天细胞增殖水平显著增加(P<0.05),凋亡率显著下降(P<0.05)。与模型组凋亡率[(53.81±1.89)%]相比,对照组、MSCs模型组、HS-MSCs模型组[(31.13±2.81)%、(42.76±0.99)%、(36.72±0.96)%]显著下降(P<0.05);与MSCs模型组相比,HS-MSCs模型组凋亡率显著下降(P<0.05)。结论热休克预处理能提高MSCs的增殖水平及存活率,降低其凋亡率,热休克预处理
- 汪庆如李欣然王清谢嘉欣付霞霏
- 关键词：热休克骨髓间充质干细胞卵巢颗粒细胞凋亡
- 免疫性早发性卵巢功能不全患者血清miR-21及外周血单核细胞Peli1的表达及意义被引量：8
- 2021年
- 目的探讨免疫性早发性卵巢功能不全(aPOI)患者血清miR-21及外周血单核细胞(PBMC)中Peli1的表达水平及临床意义。方法选取南方医科大学珠江医院2018年4月-2019年10月未经治疗的初诊为aPOI的26例患者(aPOI组)及30名健康青年女性(对照组)为研究对象。记录两组的一般资料,检测血清miR-21、PBMC Peli1 mRNA表达水平,测定血清性激素、抗苗勒管激素(AMH)、甲状腺功能、免疫相关指标,超声检测并记录子宫及卵巢的各项指标并进行分析。结果aPOI组血清miR-21及PBMC Peli1 mRNA表达水平(分别为0.60±0.14、0.30±0.14)均明显低于对照组(分别为1.01±0.07、1.63±0.54,P<0.001),且二者呈正相关(r=0.719,P<0.05)。与对照组比较,aPOI组初潮年龄更早,经期更短,孕次、产次更少,雌二醇(E_(2))、AMH水平更低,子宫及卵巢体积更小,而月经周期更长,促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平更高,更年期症状阳性数量、免疫指标阳性数量更多,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-21、Peli1 mRNA均与E_(2)、AMH、子宫及卵巢体积呈正相关,与FSH、LH、免疫指标阳性数量呈负相关。结论aPOI患者血清miR-21与PBMC Peli1表达水平降低呈正相关;miR-21及Peli1可能参与了aPOI的发病机制,对aPOI的辅助诊断有一定价值。
- 马闻擎李欣然谢嘉欣王袁杨雨涛付霞霏
- 关键词：微小RNA-21自身免疫
- 低分子肝素对高危妊娠孕产妇深静脉血栓形成的预防效果分析被引量：9
- 2021年
- 目的探讨应用低分子肝素(LMWH)预防高危妊娠孕产妇孕期、产褥期深静脉血栓形成的效果。方法收集南方医科大学珠江医院2019年1月-2020年7月应用LMWH预防深静脉血栓形成的1099例高危妊娠病例作为LMWH组,选取2016年1月-2018年12月未使用LMWH的2107例高危妊娠病例作为对照组,比较分析两组血栓形成例数、产前及产后出血发生率、剖宫产率等指标。结果LMWH组无新发妊娠期及产褥期深静脉血栓,而对照组有新发血栓24例,两组比较差异有统计学意义(P=0.000)。LMWH组产前发生胎盘早剥2例,对照组产前发生胎盘早剥1例;LMWH组产后2 h出血量为(182.25±120.62)ml,对照组为(165.00±68.58)ml;LMWH组剖宫产率为37.5%,对照组为38.9%。两组胎盘早剥发生率、产后2 h出血量、剖宫产率等比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论对有血栓高危因素的孕产妇,根据评分使用LMWH可预防血栓形成,且安全有效。
- 肖苑玲潘石蕾李欣然田丹胡冬梅
- 关键词：妊娠产褥期高危因素低分子肝素
- 微RNA-21和Peli1在自身免疫性早发性卵巢功能不全小鼠体内的表达及意义
- 2022年
- 目的探讨miRNA-21和其靶基因Pellino-1(Peli1)在自身免疫性早发性卵巢功能不全(POI)模型小鼠体内的表达和意义。方法将24只雌性BALB/c小鼠随机均分为POI组和对照组(每组12只),分别予皮下注射透明带3(ZP3)多肽和生理盐水。通过卵泡计数、观察发情周期和检测血清雌二醇、卵泡刺激素(FSH)、抗米勒管激素(AMH)水平评估小鼠卵巢功能。采用ELISA测定血清炎症因子γ-干扰素、IL-10水平,流式细胞术分析脾脏调节性T细胞(Treg)比例,生物信息学预测miRNA-21的靶基因,qPCR检测外周血单个核细胞(PBMC)、卵巢组织中miRNA-21表达和PBMC、脾脏Treg中Peli1的mRNA表达。结果二次免疫6周后,POI组小鼠基本无发情期,而对照组小鼠发情周期均正常。POI组小鼠卵巢中各级卵泡的数量,血清雌二醇、AMH、IL-10水平,脾脏Treg比例,以及PBMC、卵巢组织中miRNA-21表达均低于对照组(P均<0.05),而血清FSH、γ-干扰素水平均高于对照组(P均<0.01)。生物信息学预测显示Peli1为miRNA-21的靶基因。POI组小鼠PBMC、脾脏Treg中Peli1的mRNA表达均低于对照组(P均<0.05)。结论miRNA-21和其靶基因Peli1在自身免疫性POI模型小鼠中的表达均降低,提示miRNA-21和Peli1可能参与自身免疫性POI的发病。
- 杨雨涛李欣然谢嘉欣王袁马闻擎付霞霏
- 关键词：自身免疫性
- 化疗性卵巢早衰动物模型及患者血清miR-21的水平变化
- 目的：通过检测化疗性卵巢早衰(chemotherapy-induced premature ovarian failure,CIPOF)大鼠动物模型及患者血清microRNA-21(miR-21)的水平,探讨miR-21...
- 付霞霏何援利王雪峰陈小莹李欣然王清
- 关键词：卵巢早衰化疗MIR-21
