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任媛媛
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1
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供职机构:
吉林大学生命科学学院分子酶学工程教育部重点实验室
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发文基金:
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合作作者
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吉林大学生命科学学院分子酶学工...
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吉林大学生命科学学院分子酶学工...
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吉林大学生命科学学院分子酶学工...
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2014
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来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因的合成与融合表达
2014年
将来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因用大肠杆菌中的丰沛密码子替换,利用化学和基于聚合酶链反应(PCR)技术的酶促方法进行基因全合成,利用pET-32a构建重组表达载体pET-dan,转化进E.coil BL21(DE3)中进行融合表达.经SDS-PAGE电泳、Western-blot检测和活性测定发现,D-ANase可在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白可达到菌体总蛋白的69.2%,密码子优化后基因构建的工程菌发酵活性为96 U/mL,重组蛋白经超声细胞破碎及Ni2+柱亲和层析纯化,比活可达1692.3 U/mg,纯度可达95%以上.
侯欣彤
董媛
林瑞东
于梁
任媛媛
李剑光
高朝辉
滕利荣
关键词:
基因合成
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