梁卓
- 作品数：8 被引量：10H指数：2
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 棉花磷脂酶C基因的克隆及参与油脂代谢的功能分析被引量：1
- 2015年
- 以陆地棉胚珠和纤维为实验材料,利用RT-PCR技术克隆得到磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)基因(GhPLC,GenBank登录号:KR154219),将棉花磷脂酶C基因转化拟南芥,分析其在油脂代谢过程中的重要作用。测序鉴定显示,GhPLC基因的全长开放读码框为1 524bp,编码包含508个氨基酸的蛋白质,理论分子量约为55kD。序列比对分析显示,GhPLC属于典型的碱性磷酸酶超家族的磷脂酶。利用pET32a-GhPLC原核表达获得分子量约为55kD左右的重组蛋白GhPLC;酶活力分析显示,重组GhPLC蛋白具有较高的将卵磷脂(PC)催化为二酰甘油(DAG)的酶活力。半定量RT-PCR结果表明,GhPLC基因参与棉花种子和纤维发育过程。构建植物过量表达载体35S∷GhPLC并转化哥伦比亚野生型拟南芥,转基因拟南芥中GhPLC基因的表达和PLC酶活力显著提高,且转基因拟南芥种子的油脂含量提高了5.3%。
- 梁卓谭兰袁哈利谢全亮王斐李鸿彬
- 关键词：棉花磷脂酶C油脂含量拟南芥
- 陆地棉GDP-L-半乳糖磷酸化酶基因启动子的克隆及活性分析被引量：2
- 2016年
- 抗坏血酸(Ascorbic acid,As A)在植物发育和响应逆境胁迫过程中发挥着重要作用。GDP-L-半乳糖磷酸化酶(GDP-L galactose phosphorylase,GGPase)是As A合成过程中关键酶之一,在As A的生物合成和代谢调控中具有重要作用。为深入了解棉花Gh GGPase基因的表达调控模式,本研究利用PCR技术克隆得到Gh GGPase基因起始密码子上游2 464 bp的启动子序列,序列分析发现该启动子包含多个参与激素信号、光调节和抗逆信号应答的顺式作用元件。构建p Gh GGPase::GFP-GUS过量表达载体,采用农杆菌介导法瞬时转化烟草叶片,进行GUS组织化学染色和酶活性检测,GUS染色实验结果显示,瞬时转化启动子的烟草叶片表现出较深的蓝色,并且具有较高的酶活性表达,这表明Gh GGPase启动子能够显著的驱动GUS的表达。以上结果表明:Gh GGPase启动子是一个完整的功能序列,具有较强的表达活性。
- 左晓宇梁卓安晶潘泽李鸿彬
- 关键词：陆地棉启动子GUS
- 陆地棉GhPLDα基因的克隆、序列分析及表达
- 2014年
- 【目的】棉花磷脂酶D(GhPLDα)基因的克隆、序列功能结构域分析及表达。【方法】以陆地棉胚珠和纤维为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增得到PLDα基因的cDNA片段,将其构建到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,利用分光光度法检测酶活性,采取RT-PCR方法检测基因表达。【结果】从发育的棉花胚珠和纤维混合材料中克隆得到的磷脂酶基因的开放读码框为2 421 bp,编码包含807个氨基酸的蛋白质,分子量约为88 kDa。通过同源序列比对和功能结构域分析,GhPLDα具有典型的磷脂酶D家族(HKD)结构域,同时还存在蛋白激酶C结构域2(C2结构域)。构建了pET28a-GhPLDα原核表达载体;获得分子量约为88 kDa左右的重组蛋白GhPLDα。半定量RT-PCR结果表明GhPLDα基因可能参与棉花胚珠与纤维发育过程。【结论】GhPLDα基因的克隆、序列分析和表达为进一步研究棉花GhPLDα基因在胚珠和纤维发育中过程的功能奠定了基础。
- 谭兰李榕袁哈利贺怡梁卓谢全亮李鸿彬
- 关键词：棉花
- 棉花GhSP1L基因克隆与表达分析
- 2015年
- 【目的】棉花Spiral1-LIKE(SP1L)基因(Gh SP1L)的克隆、功能序列分析及原核表达。【方法】通过RT-PCR从棉纤维中克隆Gh SP1L基因,进行Gh SP1L蛋白的功能结构域分析,构建原核表达载体p ET28a-GhSP1L,进行蛋白体外诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的表达情况;RT-PCR检测Gh SP1L基因的表达特征。【结果】从陆地棉纤维组织中克隆得到Gh SP1L基因的全长c DNA,其开放读码框为318 bp,编码106个氨基酸的蛋白质,理论分子质量为11.76 k Da。对氨基酸序列进行生物信息学分析,其N端和C端较为保守,含有SCOP结构域,属于SP1L家族蛋白,能够在其他微管蛋白协助下与微管结合,SPR1的定位可能与其结合的微管结合蛋白相关。构建了p ET28a-Gh SP1L原核表达载体,并通过体外诱导表达后获得分子质量约为12 k Da左右的重组蛋白Gh SP1L;半定量RT-PCR结果表明,Gh SP1L基因开花后3 d的纤维组织中表达量较高。【结论】Gh SP1L基因的克隆、序列分析和表达,重组蛋白的诱导表达,为深入研究该基因在棉纤维发育中的作用奠定了基础。
- 李榕寇伟梁卓谢全亮李鸿彬
- 关键词：棉花纤维微管结合蛋白
- 棉花色氨酸脱羧酶GhTDC基因促进烟草BY2细胞的伸长被引量：1
- 2015年
- 色氨酸脱羧酶(Tryptophan decarboxylase,TDC)在生长素(Indoleacetic acid,IAA)合成和植物器官发育等过程中发挥重要作用,其参与纤维发育的研究现有报道。本研究将陆地棉Gh TDC基因转化烟草BY2悬浮细胞,分析TDC在细胞伸长发育过程中的功能。本研究采用RT-PCR方法从陆地棉胚珠和纤维组织中克隆得到Gh TDC基因,该基因的c DNA全长包含完整开放读码框为1491 bp,编码497个氨基酸的多肽,理论分子质量为54.67 ku。生物信息学分析结果表明,Gh TDC蛋白是一个亲水性蛋白,其含有磷酸吡哆醛结合位点和催化结构域。进化树分析结果表明,棉花Gh TDC与黑升麻Ar TDC的亲缘关系上较近。构建原核表达载体p ET32a-Gh TDC并转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,获得分子质量约为54 ku的重组蛋白,重组蛋白具有较高的酶催化活力。q RT-PCR结果分析结果表明,Gh TDC基因在纤维突起时期的开花前3 d和纤维快速伸长发育时期的开花后5-15 d表达丰度较高。将Gh TDC转基因转化烟草BY2悬浮细胞,烟草悬浮细胞的伸长发育获得了显著促进。本研究结果为研究Gh TDC基因在细胞伸长发育过程中的重要调控作用提供了参考。
- 谢全亮李榕贺怡梁卓李鸿彬
- 关键词：棉花纤维发育细胞伸长
- 薰衣草精油对樱桃番茄采后黑斑病的抑制活性被引量：5
- 2014年
- 为薰衣草精油用于防治樱桃番茄采后黑斑病提供依据,研究了薰衣草精油熏蒸和直接接触对病原真菌链格孢(Alternaria alternata)的抑制活性及作用方式。结果表明,在培养基培养试验中,每皿5μl的薰衣草精油熏蒸即可完全抑制病原菌的生长;当400μl/L薰衣草精油直接接触链格孢病原菌时,可完全抑制病原菌的生长。在薰衣草精油对樱桃番茄果实采后黑斑病抑制效果试验中发现,100μl/L精油熏蒸处理果实时,处理组果实发病率比对照组降低54%,用500μl/L精油直接处理果实时,处理组果实发病率则比对照组降低60%。在薰衣草精油对病原真菌链格孢作用方式试验中,薰衣草精油作用时间短时,对链格孢病原菌生长有抑制作用,薰衣草精油作用时间长时(5 d和7 d)对链格孢病原菌有致死效应。
- 任雪艳梁卓王慧敏闫帆魏玉荣孔庆军
- 关键词：樱桃番茄链格孢抗菌活性
- 棉花GhGGPase2基因克隆、功能序列分析、原核表达及烟草的遗传转化被引量：1
- 2016年
- 以棉花纤维组织为材料,根据NCBI棉花EST进行同源搜索、比对和序列拼接,经RT-PCR从陆地棉纤维组织中扩增得到L-半乳糖磷酸化酶基因(Gh GGPase2)的c DNA开放阅读框为1 335 bp,为包含445个氨基酸的蛋白质,分子质量约为49 ku。利用软件进行蛋白质序列分析,Gh GGPase2蛋白具有组氨酸三聚体(HIT)蛋白超家族的主要特性的结构域。进化树分析的结果表明棉花Gh GGPase2与猕猴桃Ad GGPase在进化上亲缘关系上较近。构建原核表达载体p ET28a-Gh GGPase2并转化大肠杆菌,将重组载体p ET28a-Gh GGPase2导入大肠杆菌BL21(DE3)中通过IPTG诱导表达后经过SDS-PAGE分析,显示成功获得分子质量为49 ku左右的诱导表达蛋白Gh GGPase2。将Gh GGPase2基因构建到植物真核表达载体p CAMBIA2300中,利用农杆菌通过叶盘法转化烟草,经PCR分子鉴定,获得了含Gh GGPase2转基因烟草植株。研究结果将为进一步阐明该基因的生物学功能奠定基础。
- 禄亚洲尹秀左晓宇梁卓李鸿彬
- 关键词：棉花纤维原核表达克隆
- 一个棉花微管结合蛋白基因GhSP1L5的克隆及表达分析
- 2014年
- 利用RT-PCR技术从处于快速伸长发育时期的棉花纤维组织中克隆得到Spiral1-Like(SP1L5)基因(GhSP1L5),其开放读码框为315 bp,编码105个氨基酸的蛋白质,生物信息学分析表明,GhSP1L5蛋白N端和C端较为保守,并含有SCOP结构域,是典型的微管结合蛋白。进化树分析表明该基因与SP1L5家族基因的亲缘关系较近。构建原核表达载体pET28a-GhSP1L5,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,获得分子质量约为12 kD的重组蛋白。QRTPCR结果分析表明GhSP1L5基因在开花后15和20 dpa的纤维组织中表达量较高,在棉纤维发育的其他时期及根、茎、叶组织中表达量较低。
- 李榕寇伟谭兰贺怡梁卓李鸿彬
- 关键词：棉花纤维微管结合蛋白
