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流行性乙型脑炎病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立: 为建立流行性乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,本实验根据JEV的E基因保守序列设计一对特异性引物及探针,并以E基因重组质粒作为标准品,建立检测JEV的TqMan荧光定量PCR方法.结果显示,该方法的灵敏度可达到10个...; 霍红李业南薛遥郭立平王晓磊步志高华荣虹; 关键词：基因检测荧光定量聚合酶链反应; 文献传递

猪流行性乙型脑炎病毒prM-E抗原捕获ELISA检测方法的建立被引量：1: 2015年; 为建立猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)的检测方法,本研究以pr M-E结构蛋白特异性单克隆抗体(MAb)5B10和5E7分别作为捕获抗体和辣根过氧化酶标记的检测抗体,对反应条件进行优化,建立了抗原捕获ELISA(AC-ELISA)方法。该方法与其它常见猪病病原无交叉反应,特异性强。该方法可以检出1.25×105 pfu/m L的病毒和48.44 ng/m L pr M-E重组蛋白,最佳线性检测范围为0.05μg/m L^1.00μg/m L,线性相关系数(R2)为0.996。组装的试剂盒批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,具有良好的重复性。试剂盒4℃保存12个月稳定。该研究为JEV亚单位疫苗的研制与生产提供了技术支持。; 王晓磊霍红郭立平李伟步志高华荣虹; 关键词：流行性乙型脑炎病毒

猪流行性乙型脑炎病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立被引量：3: 2014年; 为建立猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,本实验根据JEV的E基因保守序列设计一对特异性引物及探针,并以E基因重组质粒作为标准品,建立检测JEV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的灵敏度可达到10个拷贝,是常规PCR灵敏度的100倍。该方法对其它相关猪病病毒的检测显示均为阴性。重复性试验表明该方法的组间和组内的变异系数均小于2%。通过检测未免疫猪和免疫减毒活疫苗猪在感染JEV后的病毒血症样品,将该方法与JEV传统病毒分离方法进行比较,结果表明该方法与乳鼠脑内接种方法灵敏度相同,比细胞分离方法灵敏度高。该方法可以作为临床检测JEV及评价疫苗保护效力的检测方法。; 霍红李业南薛遥郭立平王晓磊步志高华荣虹; 关键词：流行性乙型脑炎病毒

表达绿色荧光蛋白的复制缺陷型西尼罗病毒的构建: 2017年; 为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)的复制缺陷型西尼罗病毒(WNV),本研究参考NY99株WNV基因组序列,分段合成除结构蛋白基因外的其它基因组序列,以及插入缺失的结构蛋白基因位置的gfp报告基因序列,并按WNV基因组顺序克隆于pCI-neo载体中,构建含有GFP基因的WNV复制子重组质粒pWNVrep-GFP;同时构建表达WNVC蛋白的重组质粒pCAG-WNV-C。将pWNVrep-GFP和pCAG-WNV-C共转染稳定表达WNVprM-E蛋白的W-92细胞系进行WNV粒子包装及病毒粒子拯救。结果显示转染细胞能够表达GFP,将转染细胞培养液接种BHK-21细胞后,能感染细胞并且表达GFP,westernblot可以检测到分子质量为42ku的NS1蛋白条带。然而,感染BHK-21细胞的培养液不能再感染BHK-21细胞,表明拯救的病毒只具有一次感染能力,为复制缺陷型病毒。WNV阳性血清能中和拯救病毒对BHK-21细胞的感染,该复制缺陷型病毒为WNV中和抗体检测和疫苗评价提供了相关的技术平台。; 李伟马乐郭立平王晓磊步志高华荣虹; 关键词：西尼罗病毒复制子细胞系中和抗体

流行性乙型脑炎病毒病毒样颗粒的表达及免疫原性研究: 引言流行性乙型脑炎病毒（JEV）可以感染人类及多种动物,是一种危害严重的蚊媒传播的人兽共患病病原[1]。马感染可导致脑炎,猪感染可导致种猪严重的繁殖障碍与仔猪发生神经系统疾病[2,3]。疫苗免疫是预防控制该病毒病的有效措...; 华荣虹李业南陈振师刘立科霍红王晓磊郭立平步志高

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王晓磊