步志高
- 作品数：327 被引量：1,002H指数：16
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 莱斯顿型埃博拉病毒GP蛋白嵌合型水泡性口炎病毒的构建与免疫原性研究被引量：2
- 2016年
- 莱斯顿型埃博拉病毒(REBOV)可以感染猪和非人类灵长类动物并引起动物发病和死亡,为制备安全、有效的REBOV重组病毒后备疫苗,本研究利用表达绿色荧光蛋白的水泡性口炎病毒(r VSV-EGFP)印第安纳弱毒疫苗株反向遗传操作系统,拯救出了REBOV GP蛋白嵌合型VSV(r VSV△G*GFP-REBOV-GP),并对其生物学特性进行分析,评估其作为REBOV活疫苗的安全性和有效性。激光共聚焦和western blot试验显示REBOV GP蛋白在嵌合病毒中获得正确表达;病毒生长动力学结果显示,r VSV△G*GFP-REBOV-GP与亲本株具有不同的生长特性;将r VSV△G*GFP-REBOV-GP接种小鼠,未引起小鼠发病,体重增长趋势与对照组一致,表明嵌合病毒具有良好的安全性;中和试验结果表明该嵌合病毒能够诱导小鼠产生针对REBOV GP的高滴度中和抗体。本研究制备的r VSV△G*GFP-REBOV-GP为进一步的动物免疫实验奠定了基础。
- 祖述龙宋继军邵钰刘任强温志远周微微王雪莲葛金英步志高
- 关键词：水泡性口炎病毒
- 鸭病毒性肠炎病毒感染性重组克隆系统及构建方法和应用
- 本发明涉及一种鸭病毒性肠炎病毒感染性重组克隆系统，其特征在于所述系统包括多个粘粒，每个粘粒中克隆有鸭病毒性肠炎病毒疫苗株基因片段，所述鸭病毒性肠炎病毒疫苗株基因片段含有相互重叠的区域，并拼接覆盖鸭病毒性肠炎病毒疫苗株全基...
- 陈化兰柳金雄步志高姜永萍
- 实时荧光定量PCR检测布鲁杆菌方法的应用被引量：2
- 2009年
- 目的探讨实时荧光定量PCR（FQ—PCR）用于布鲁杆菌检测的可行性。方法根据布鲁杆菌BCSP31基因设计合成1对引物和TaqMan探针，以克隆有布鲁杆菌基因片段的PMD18-T质粒作为标准品DNA模板，进行FO—PCR检测，绘制标准曲线；对所应用的方法分别进行敏感性、特异性及重复性分析；并对临床血液标本进行FQ—PCR，与临床诊断进行比较。结果用标准品DNA建立的定量标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0．999）；FQ—PCR检测的灵敏度拷贝数为5个／μl，普通PCR为5×102个／μl，FQ—PCR是普通PCR的100倍；用FQ-PCR检测6株布鲁杆菌菌株及5株非布鲁杆菌菌株，布鲁杆菌均检出较强荧光信号，非布鲁杆菌未检出；5×10^3个拷贝／μl标准品DNA检测后，Ct值批内变异系数（CV）为0．71％，批间CV为7．23％；用FQ—PCR检测临床确诊阳性血标本24份，检出阳性19份，符合率为79％（19／24），阴性对照血标本31份，全部阴性，阴性符合率为100％（31／31），临床症状可疑标本30份，检出阳性2份。结论用FQ—PCR方法检测布鲁杆菌具有高度敏感性、特异性及良好的重复性，与临床阳性及阴性标本的符合率较高。可用于快速检测各种样本中的微量布鲁杆菌以及作为布鲁杆菌感染的实验室检测方法。
- 张宏霞祈文学刘文兴胡森于占水杜美兰薛维国步志高
- 关键词：布鲁杆菌聚合酶链反应
- 稳定表达犬SLAM受体的Vero细胞系的建立与应用被引量：3
- 2018年
- 信号淋巴细胞活化分子是(Signaling lymphocyte activation molecule,SLAM)犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)和麻疹病毒(Measles virus,MV)等麻疹病毒属病毒的主要细胞受体,在病毒入侵细胞的过程中具有重要作用。为了构建稳定表达犬SLAM(d SLAM)受体的Vero细胞系,本研究将d SLAM基因克隆至真核表达质粒p CAGG-TK-neo中,在d SLAM基因3’端引入Flag标签序列作为分子标记,并在其下游引入9 nt的Linker序列、猪捷申病毒(Porcine teschovirus,PTV) 2A基因以及红色荧光蛋白m Cherry基因,构建了重组质粒p CAGG-dSLAMFlag-mCherry。用该重组质粒转染Vero细胞,经G418压力筛选、红色荧光蛋白表达及表达绿色荧光蛋白的重组CDV(r20/8-EGFP)感染鉴定后,筛选到稳定表达d SLAM的细胞系。CDV野生型分离株JL17感染试验结果显示,JL17株在第15代次的Vero-dSLAM细胞上可良好生长,而在Vero细胞上不能形成细胞病变。结果表明,Vero-dSLAM细胞可稳定表达d SLAM,为CDV野生型毒株的分离和致病机制研究奠定了基础。
- 朱璐宇彭丽艳周雨霞王喜军步志高
- 关键词：VERO细胞犬瘟热病毒病毒分离
- 传染性支气管炎病毒S_1基因DNA免疫质粒的构建及其免疫原性被引量：26
- 1998年
- 为探讨ＤＮＡ免疫防制传染性支气管炎（ＩＢ）的可能性，以克隆的Ｍａｓｓｃｈｕｓｅｔｅ型类Ｍ４１地方分离ＱＤ株Ｓ１基因为免疫原基因，引入终止密码后插入ＳＶ４０启动子、增强子下游和ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ信号上游，构建了Ｓ１基因ＤＮＡ免疫表达质粒ｐＳＶＱＤＳ１。将大量扩增并经聚乙二醇纯化的ｐＳＶＱＤＳ１溶于ＰＢＳ，以３００μｇ／只的剂量肌肉注射免疫小鼠，于４周后采集分离免疫小鼠血清进行鸡胚病毒中和试验。结果表明，ｐＳＶＱＤＳ１能够诱导产生针对传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｍ４１株的中和抗体，具有良好的免疫原性。
- 步志高江国托王秀荣康丽娟祁贤陈万芳卢景良
- 关键词：传染性支气管炎病毒S1基因
- 含有新型插入位点的羊痘病毒载体和应用
- 本发明提供含有新型插入位点的山羊痘载体基因工程毒株GTPVΔ135/EGFP和绵羊痘病毒基因工程毒株SPPVΔ135/EGFP，它们的保藏变编号分别为CCTCC NO：V201714和CCTCC NO：V201715。它...
- 步志高张敏敏陈伟业
- 文献传递
- 新城疫LaSota疫苗株反向遗传操作系统及其应用
- 本发明涉及一种新城疫LaSota弱毒疫苗株的反向遗传操作系统及其应用，该系统包含：转录质粒，该转录质粒包括所述新城疫LaSota弱毒疫苗株的基因组cDNA序列；一个或多个转录辅助质粒，该辅助质粒包括编码所述新城疫LaSo...
- 步志高陈化兰
- 文献传递
- 基于IPMA的小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒
- 本发明提供基于免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA)的小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒，包括：含细胞内阳性抗原与阴性抗原的96孔细胞培养板；阳性对照血清；阴性对照血清；样品稀释液；盐水洗涤液；HRP标记鼠抗羊McAb；二组分...
- 步志高刘文兴陈伟业
- 新城疫病毒F_(48)E_9株M NP F和HN基因的真核表达被引量：17
- 2006年
- 将新城疫病毒(NDV)F48E9株的M、NP、F和HN基因克隆到真核细胞表达载体 pCAGG上,经酶切、PCR鉴定和序列分析,分别筛选出了含有M、NP、F和HN基因的重组质粒, 命名为pCAGG-M、pCAGG-NP、pCAGG-F和pCAGG-HN。纯化后的重组质粒通过脂质体单独转染HeLa细胞,经间接免疫荧光试验检测到了M、NP、F和HN蛋白的表达。pCAGG-M、 pCAGG-NP、pCAGG-F和pCAGG-HN重组质粒组合共转染HeLa细胞48 h后,可以观察到明显的细胞融合现象。试验结果表明,NDV F48E9株的M、NP、F和HN蛋白均在HeLa细胞内得到了成功表达,同时证明在该表达系统中F蛋白不足以诱导细胞融合。
- 闻晓波闫丽辉曹殿军刘培欣刘春国步志高
- 关键词：新城疫病毒M基因NP基因HN基因真核细胞表达
- 表达传染性法氏囊病毒超强毒流行株VP2基因重组新城疫病毒LaSota疫苗株的构建被引量：13
- 2008年
- 【目的】重组新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)作为新型的活病毒载体疫苗具有巨大的优势和应用前景,本研究旨在探讨新城疫病毒作为防制传染性法氏囊病超强毒(very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV)及新城疫重组二联活病毒载体疫苗的可行性。【方法】采用单股负链RNA病毒反向遗传操作技术,救获野生型NDV LaSota疫苗株rLaSota及表达vvIBDV Gx株VP2基因的重组疫苗株rLaSota-VP2,分别经滴鼻点眼途径免疫SPF雏鸡,免疫后21d分别以vvIBDVGx超强毒和新城疫强毒进行攻击。【结果】rLaSota及表达vvIBDV-VP2基因平均鸡胚致死时间均大于120h,脑内致病指数(ICPI)分别为0.4和0.36,静脉内致病指数(IVPI)均为0;接种后72～96h每毫升尿囊液EID50则分别达到109.0以上。rLaSota-VP2以106.0EID50一次免疫7日龄SPF鸡雏,免疫后3周对新城疫强毒致死攻击100%保护,对vvIBDV攻击免疫保护率达90%以上。【结论】重组病毒rLaSota-VP2保持了LaSota亲本疫苗株高滴度的鸡胚生长特性和低致病性及遗传稳定性,免疫雏鸡对新城疫强毒和传染性法氏囊病毒超强毒株的致死均形成有效免疫保护。本研究为研制传染性法氏囊病-新城疫重组二联活载体疫苗奠定了基础。
- 葛金英温志远高宏雷王永胡森鲍恩东王笑梅步志高
- 关键词：重组新城疫病毒反向遗传操作VP2基因
