孔德荣
- 作品数：11 被引量：19H指数：3
- 供职机构：大连海洋大学更多>>
- 发文基金：国家海洋公益性行业科研专项大连市科技计划项目辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 红鳍东方鲀白介素15的原核表达及其活性测定被引量：2
- 2015年
- 为了开发红鳍东方鲀Takifugu rubripes免疫基因及其重组表达,生产重组免疫因子蛋白,通过提取红鳍东方鲀肾脏组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增得到白介素15(interleukin15,IL15)基因序列,将IL15成熟肽序列与原核表达载体p ET-32a(+)连接,成功构建重组表达载体(重组子)p ET-32a(+)-IL15,并将其重组子转化至Escheria coli BL21(DE3)感受态细胞中获得重组表达IL15的基因工程菌,再经IPTG诱导,p ET-32a(+)-IL15在BL21中得到了融合表达。结果表明:通过对表达产物的纯化和Western Blotting检测,红鳍东方鲀IL15在大肠杆菌中的表达量较高,蛋白浓度为294.6μg/m L;用MTT法对该蛋白进行活性鉴定显示,加入稀释10倍和100倍的重组红鳍东方鲀IL15蛋白时,CTLL-2细胞的增殖率相对较高,分别为71%和73%。研究表明,重组红鳍东方鲀IL15蛋白具有体外促进CTLL-2细胞增值的能力。
- 孙赛红马普李慧孙鹤孔德荣李凤华仇雪梅姜志强刘海映刘圣聪王秀利
- 关键词：红鳍东方鲀白介素-15原核表达活性鉴定
- 刺参C型凝集素(AJL)基因的克隆及原核表达分析被引量：3
- 2015年
- 为了开发海参免疫基因,生产重组免疫因子蛋白,利用cDNA末端快速扩增技术(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)获得了刺参凝集素基因(Apostichopus japonicus Lectin,AJL)的编码区序列(Coding sequence,CDS),CDS的长度为492 bp,编码163个氨基酸,其中成熟肽由143个氨基酸组成。将成熟肽的基因克隆并连接至载体p ET-32a(+)中,成功构建了原核表达的重组体p ET-32a(+)-AJL,进一步将重组体转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,经诱导表达、分离纯化,获得了融合表达蛋白。本研究结果为进一步研究重组刺参C型凝集素在刺参健康养殖上的应用奠定了基础。
- 薛壮李慧孙鹤孔德荣马普周玮仇雪梅刘洋王秀利
- 关键词：刺参凝集素基因克隆原核表达
- 红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)干扰素调节因子2基因的克隆及原核表达
- 2016年
- 干扰素调节因子(Interferon regulatory factor,IRF)是一种多功能的转录因子。采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了红鳍东方鲀干扰素调节因子2(Interferon regulatory factor 2,IRF2)基因的全长c DNA。该基因全长为1 552 bp,其中5'非编码区(5'-UTR)187 bp,3'非编码区(3'-UTR)429 bp,编码区(CDS)为936 bp,共编码311个氨基酸。将IRF2的编码区序列连接到原核表达载体p ET32a(+),成功构建了重组体p ET32a(+)-IRF2。将重组体p ET32a(+)-IRF2转入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,获得了重组表达IRF2的基因工程菌。经IPTG诱导,p ET32a(+)-IRF2在BL21中得到了融合表达。通过对表达产物的纯化和Western blotting检测,结果显示红鳍东方鲀IRF2基因在大肠杆菌中的表达效果较高,目的蛋白准确。
- 孙赛红马普孙鹤孔德荣李慧仇雪梅姜志强刘海映刘洋刘圣聪孟雪松王秀利
- 关键词：红鳍东方鲀原核表达
- 重组鱼类干扰素研究进展被引量：2
- 2016年
- 干扰素(Interferons,IFNs)是由免疫细胞分泌的能对几种病原,例如对病毒、细菌、寄生虫和肿瘤细胞等产生应答的一类蛋白质。本文综述了几种经济鱼类的干扰素基因及重组鱼类干扰素的研究进展。
- 孔德荣王智诚刘海映王秀利
- 关键词：经济鱼类干扰素基因重组干扰素
- 红鳍东方鲀IFN-γ基因的重组表达及其免疫应答的研究
- 干扰素γ(interferon-gama,IFN-γ)是一类由特定免疫细胞分泌的多功能蛋白质。IFN-γ属于Ⅱ型干扰素，温度稳定性及耐酸性较差，易失活。但IFN-γ具有抑制肿瘤细胞生长、抗病毒、抗寄生虫感染、调节机体特异...
- 孔德荣
- 关键词：红鳍东方鲀IFN-Γ基因免疫应答蛋白活性
- 文献传递
- 真核表达制备重组红鳍东方鲀白介素2蛋白的基因及方法
- 本发明公开一种可高效表达且表达产物具有明显生物学活性的真核表达制备重组红鳍东方鲀白介素2的基因及制备方法，依次按照如下步骤进行：将SEQ ID NO:1所示的基因克隆入原核表达载体pPICZαA上，构建真核表达质粒pPI...
- 王秀利孙鹤李慧孔德荣刘海映仇雪梅
- 文献传递
- 制备重组红鳍东方鲀IFN‑γ蛋白的基因及方法
- 本发明公开一种制备重组红鳍东方鲀IFN‑γ蛋白的基因及方法，所述基因的DNA序列如SEQ ID NO:1所示。方法依次按照如下步骤进行：将DNA序列如SEQ ID NO:1所示的基因克隆入真核表达质粒pPICZαA上，得...
- 王秀利孔德荣李慧孙鹤刘海映仇雪梅
- 文献传递
- 红鳍东方鲀抗苗勒氏管激素(AMH)基因在不同发育时期的组织表达被引量：5
- 2016年
- 为研究抗苗勒氏管激素（AMH）基因在红鳍东方鲀Takifugu rubripes各组织和不同发育时期的表达情况以及在性别分化和性腺发育等过程中的作用,利用荧光实时定量PCR（qRT-PCR）技术对红鳍东方鲀成鱼的肾脏、脑、心脏、脾脏、肝脏、精巢和卵巢等组织进行了amh基因的表达分析以及不同发育时期（23、30、40、60、80日龄及2龄和3龄鱼）红鳍东方鲀个体水平上amh基因的表达分析。结果表明：红鳍东方鲀3龄成鱼脾脏、肾脏和肝脏中的amh基因表达量极显著高于其他组织（P〈0.01）,在精巢和心脏中的表达量极显著高于卵巢和脑（P〈0.01）,其中脾脏中表达量最高,脑中表达量最低;红鳍东方鲀23日龄、30日龄、2龄和3龄鱼中,雄鱼amh基因的表达量极显著高于同期雌鱼（P〈0.01）,而60日龄和80日龄时雌鱼表达量显著高于雄鱼（P〈0.05）,40日龄时雌、雄鱼的表达量无显著性差异（P〉0.05）,3龄时雌、雄个体性腺中amh基因的表达量均显著高于2龄鱼（P〈0.05）;雄性幼鱼amh基因的表达量从23~30日龄呈增长趋势,且在30日龄时达到最高,随后逐渐降低,而雌鱼整体amh基因的表达量也呈现先升高后降低的趋势,80日龄时雌鱼amh基因表达量最高。研究表明,amh基因在红鳍东方鲀的性腺发育和性别分化过程中发挥着一定的作用。
- 高长富郝薇薇仇雪梅孔德荣孟雪松包玉龙王秀利
- 关键词：红鳍东方鲀实时定量PCR抗苗勒氏管激素基因表达
- 红鳍东方鲀生长性状的遗传力估计及性状间相关关系的初步研究被引量：6
- 2016年
- 为估计红鳍东方鲀Takifugu rubripes生长性状的遗传力及生长性状间的相关关系,构建了5个全同胞家系,测定了210日龄(504尾)和360日龄(500尾)红鳍东方鲀的体质量、体长和体全长等生长性状的表型值,构建固定模型,用全同胞法估计了210日龄和360日龄红鳍东方鲀的体质量、体长和体全长3个生长性状的遗传力。结果表明:红鳍东方鲀的体质量、体长和体全长3个生长性状的遗传力估计值在210日龄时分别为0.54、0.38、0.52,在360日龄时分别为0.46、0.37、0.44,这3个性状的遗传力属于中等和高等遗传力;体质量与体长,体质量与体全长,以及体长与体全长的遗传相关系数在210日龄时分别为0.99、0.99、0.98,在360日龄时分别为0.97、0.97、0.96,这3个性状之间的遗传相关呈高度正相关;测定了102日龄(296尾)红鳍东方鲀的体质量、体长和体高3个生长性状,利用回归模型建立了体质量(W)与体长(L)和体全高(H)的数学模型为W=e-8.513L2.046H0.742(R2=0.903)。本研究结果可为红鳍东方鲀的遗传育种研究提供参考。
- 于海龙顾晨雷孔德荣闻涛崔军王秀利姜志强仇雪梅刘圣聪李荣张涛
- 关键词：红鳍东方鲀生长性状遗传力
- 刺参4个功能基因的表达分析被引量：1
- 2017年
- 为研究刺参Apostichopus japonicus的生长发育,采用实时定量PCR方法,对刺参腱生蛋白基因、胶原蛋白α2基因、整合蛋白αV基因和整合蛋白βL基因等4个候选功能基因不同月龄的组织表达进行了分析。结果表明:刺参12、13、14月龄时,腱生蛋白基因在刺参肠、管足、呼吸树、皮肤、体壁、体腔液细胞、疣足和纵肌等8个组织中均有不同程度的表达,其中在体腔液细胞和呼吸树组织中的表达量较高(P<0.05);胶原蛋白α2基因在刺参管足、呼吸树、体壁、疣足和纵肌组织中的表达量随月龄的增加而逐渐增加,其中在呼吸树组织中表达量最高,在纵肌、疣足、体壁、肠和体腔液细胞等组织中的表达量逐渐降低;整合蛋白αV基因在纵肌组织中的表达量随月龄的增加而逐渐增加;整合蛋白βL基因在皮肤、体壁、疣足和管足组织中的表达量较低。本研究结果为深入研究刺参这4个功能基因提供了参考。
- 顾晨雷周晓旭刘洋于海龙孔德荣宋坚仇雪梅常亚青王秀利
- 关键词：刺参
