陶英杰
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 山黧豆β-ODAP生物合成的代谢组学研究
- 山黧可(Lathyrus sativus L.)种植历史悠久、抗逆性极强,是干旱、半干旱地区重要的潜势作物。但内源毒素β-ODAP的存在限制了山黧豆的推广、应用价值。因而,揭示山黧豆发育过程中β-ODAP相关的代谢调控机...
- 刘凤娟毕春晓陶英杰胡鑫徐全乐
- 关键词：山黧豆代谢组学
- 文献传递
- 山黧豆CASase基因的克隆及RNAi载体的构建被引量：6
- 2016年
- β-腈基丙氨酸合成酶(CASase)是调控山黧豆(Lathyrus sativus)内源毒素β-ODAP合成的关键酶。本研究以山黧豆幼根RNA为模板,利用RT-PCR扩增了505bp的山黧豆CASase基因序列;通过Gateway BP反应将扩增片段连接到入门载体构建pENTR-CASase。经测序验证后,将目的片段插入到植物表达载体构建pSGRNAiCASase,并将其转化到农杆菌GV3101中;为进一步的遗传转化奠定了基础。
- 张明科刘凤娟陶英杰胡鑫李荣硕徐全乐
- 关键词：山黧豆GATEWAYRNAI载体构建
- 山黧豆CASase基因DNA全长序列的扩增及CRISPR/Cas9敲除载体的构建被引量：3
- 2018年
- 【目的】克隆山黧豆β-腈基丙氨酸合成酶基因(CASase)DNA全长序列,构建CRISPR/Cas9敲除载体,为筛选"低毒、高硫"山黧豆品系奠定基础。【方法】以萌发4d山黧豆幼苗根部为材料,提取其基因组DNA,利用PCR克隆CASase基因全长;经序列同源性、内含子、外显子、sgRNA靶位点和脱靶分析后,在CASasecDNA上选取5个sgRNA靶位点进行寡核苷酸链设计和体外活性检测;从5个sgRNA靶位点中取活性较高的4个sgRNA,利用酶切连接法构建基因敲除载体pPLHACas9-sgRNA20r、pPLHACas9-sgRNA68r、pPLHACas9-sgRNA225f和pPLHACas9-sgRNA256f。【结果】获得了CASase基因3 143bp的DNA全长序列,该序列编码β-腈基丙氨酸合成酶;在CASase cDNA中选取5个sgRNA靶位点在体外均能有效剪切靶序列;菌落PCR检测结果显示,4个CRISPR/Cas9基因敲除载体构建成功。【结论】克隆了山黧豆CASase基因DNA全长,成功构建了该基因上4个sgRNA靶位点的CRISPR/Cas9敲除载体。
- 陶英杰刘凤娟毕春晓任雪冰曲瑞红李科友徐全乐
- 关键词：山黧豆基因克隆
