李向涛
- 作品数：11 被引量：49H指数：5
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- 猪脑心肌炎病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：12
- 2011年
- 为了建立猪脑心肌炎病毒(EMCV)的检测方法,根据GenBank中EMCV 3D基因的保守序列设计并合成1对引物和1条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了该病毒的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。该方法线性关系好,以重组质粒标准品构建的标准曲线的相关系数达到0.998;敏感性高,检测下限为10copies/μL,比普通PCR敏感100倍;特异性强,只有EMCV呈阳性,而与猪口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、BHK-21正常细胞均无交叉反应;重复性好,组内与组间的变异系数均小于1.5%。应用所建立的检测方法,对猪源EMCV GXLC株人工感染小鼠的脑、心、脾中的病毒载量进行了检测,同时对临床采集的153份可疑病料进行了检测。结果表明,本研究建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于EMCV的检测及定量分析。
- 施开创陈宏备覃芳芸李向涛胡杰郑喜邦李军
- 关键词：脑心肌炎病毒TAQMAN探针
- 猪脑心肌炎病毒GXLC株VP1基因的原核表达及鉴定被引量：4
- 2011年
- 根据猪脑心肌炎病毒(EMCV)GXLC株的基因组序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增EMCV VP1基因目的片段,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建了EMCV VP1基因重组表达质粒pET-32a-VP1。将pET-32a-VP1转化BL21(DE3)株感受态细胞,并用IPTG进行诱导表达。结果显示,经SDS-PAGE分析,VP1蛋白获得高效表达,融合蛋白质的分子质量约为52 ku,表达的重组蛋白以包涵体形式存在。经Western blot,结果显示所表达的VP1蛋白与猪抗EMCV阳性血清发生特异性的免疫印迹反应,表明其具有良好的抗原反应原性。
- 李向涛施开创陈宏备郑敏钟诚李军
- 关键词：脑心肌炎病毒VP1基因原核表达抗原性
- 山羊痘病毒糖蛋白基因ORF122的克隆及其原核表达被引量：1
- 2010年
- 以山羊痘弱毒疫苗毒株AV41的细胞培养物中提取的总DNA为模板,通过PCR扩增获得山羊痘病毒(GTPV)ORF122基因片段。另设计1对引物,经PCR扩增获得缺失跨膜功能区的ORF122基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-32a中,构建了重组表达质粒pET-ORF122,将其转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导,成功表达出分子质量为32ku的融合蛋白。免疫印迹试验证实,表达的融合蛋白可以被GTPV阳性血清识别。经对该重组蛋白进行纯化,结果其纯度达到90%以上,产量达5.5mg/L。上述结果为GTPV重组诊断抗原的筛选和新型疫苗的研制奠定了基础。
- 李春艳郑敏黎宗强莫胜兰屈素洁梁媛李向涛秦保亮
- 关键词：山羊痘病毒克隆原核表达
- 小鼠IL-1β、TNF-α TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及脑心肌炎病毒感染小鼠的检测被引量：7
- 2011年
- 为探讨脑心肌炎病毒(EMCV)感染后促炎细胞因子的表达水平、从分子水平深入研究EMCV的致病机制,本研究分别建立了检测小鼠IL-1β、TNF-α和管家基因β-actin 的 TaqMan real-time PCR 检测方法。该方法标准曲线的相关系数均达到0.998以上,检出下限均达到10copies/μL质粒标准品,组内与组间的变异系数均小于2%。应用该方法对猪源 EMCV GXLC 株人工感染小鼠的脑、心、脾中IL-1β、TNF-α mRNA 的转录水平进行检测,发现感染后第4dIL-1β、TNF-α mRNA 的转录水平达到峰值,并且与小鼠发病死亡高峰存在明显的时间相关性。本研究所建立的TaqMan real-time PCR 检测方法为小鼠促炎细胞因子的检测及定量分析提供了技术手段。
- 陈宏备施开创李向涛郑敏郑喜邦李军
- 关键词：脑心肌炎病毒小鼠促炎细胞因子荧光定量RT-PCR
- 霉菌毒素对保育猪若干血液生化指标的影响被引量：1
- 2009年
- 为研究霉菌毒素污染饲料对保育猪若干血液生化指标的影响,从南宁市郊区某猪场随机抽取14头受霉菌毒素侵害的55～60日龄保育猪,分别检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)、血糖(Glu)和尿素(BUN)5个指标,并与正常动物的参考值进行比较分析。结果表明,受霉菌毒素侵害的保育猪ALT、AST明显升高,AST与参考值差异极显著(P<0.01),γ-GT变化不明显,Glu降低极显著(P<0.01),BUN降低显著(P<0.05),但各项指标间的相关性均不显著。
- 李方玉李向涛黄飞翔赵日浪韦秋玲钟诚
- 关键词：霉菌毒素ASTΓ-GTGLUBUN
- 猪IL-2、IL-12p40和IFN-γ SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 针对猪Th1型细胞因子IL-2、IL-12p40、IFN-γ以及管家基因β-actin的基因序列分别设计一对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IL-2、IL-12p40、IFN-γ及β-actin的SYBR Green Ⅰ real-ti mePCR方法。该方法线性关系好,标准曲线的相关系数均达到0.997以上;敏感性高,初始模板的检出下限均达到100拷贝/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3.5%。应用所建立的方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪外周血单个核细胞中IL-2、IL-12p40和IFN-γ mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,所建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好。
- 施开创莫胜兰许瑞胜李向涛陈宏备郑敏刘棋
- 关键词：TH1型细胞因子SYBR
- 猪血清丙二醛与脂肪代谢和肝功变化关系的研究被引量：4
- 2009年
- 为研究猪血清丙二醛与脂肪代谢和肝功变化的关系,分别检测了脂肪代谢紊乱猪和正常猪血清丙二醛(MDA)、天门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)等5个指标含量。检测结果显示,两组猪血清肝功能指标AST和ALT含量变化显著;脂肪代谢中MDA的含量变化显著,正常猪显著低于黄脂猪;TG和TCH含量变化不明显。相关性分析显示,MDA和AST、ALT呈较强的正相关,与TG呈简单的正相关,与TCH呈负相关,表明可以用血清中MDA含量预测AST和ALT含量。
- 黄飞翔李方玉李向涛梁家绥张艳雯钟诚李镜
- 关键词：猪血清丙二醛脂肪代谢肝功能
- 广西黑山羊伪结核棒状杆菌的分离与鉴定被引量：13
- 2010年
- 从广西某养殖户发病黑山羊的脓肿脓汁中分离获得1株无荚膜、不形成芽孢的革兰氏阳性球杆菌,该菌在含血液或血清的琼脂培养基上,可生长成直径1 mm左右、干燥、中央凸起、不透明呈灰白色、边缘不整齐、伴有β溶血环的菌落,而在普通培养基上生长不良,在麦康凯琼脂培养基上不能生长。经生化试验、PCR鉴定及测序分析,证实该菌为伪结核棒状杆菌,动物试验证实该菌为致病菌。最后根据药敏试验结果选择敏感抗生素对发病黑山羊进行治疗,并提出综合防控措施。
- 郑敏胡杰欧绍毅陈义祥李向涛李春艳陆文俊苏凯
- 关键词：伪结核棒状杆菌黑山羊
- 猪脑心肌炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用被引量：5
- 2011年
- 以猪脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)VP1重组蛋白为包被抗原,建立了检测EMCV血清抗体的间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)。经优化,获得间接ELISA的最佳反应条件为抗原包被浓度0.625μg/mL,待检血清稀释度为1∶40,封闭液为50g/L脱脂乳,酶标兔抗猪抗体稀释度为1∶6 000,底物显色时间为室温避光15min,血清样本阴阳性临界值为OD450nm值≥0.33。与口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)、猪瘟病毒(Classical swine fevervirus,CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)抗体没有交叉反应。应用所建立的方法对广西2010年—2011年所采集的2 228份血清进行检测,被检血清样品平均阳性率为91.47%,被检猪场阳性率为100%。表明广西地区猪群感染普遍。
- 陆文俊施开创屈素洁莫胜兰李向涛钟诚
- 关键词：脑心肌炎病毒间接ELISA血清学调查
- 牛奶尿素氮(MUN)的检测与分析被引量：5
- 2010年
- 为了进一步揭示牛奶MUN浓度与日粮能量蛋白、牛乳乳质的相互关系,检测分析了荷斯坦奶牛与娟姗奶牛牛奶的尿素氮(MUN)含量、乳脂率和乳蛋白率。结果表明,荷斯坦奶牛的MUN测定浓度极显著高于参考值(P<0.01),娟姗奶牛的MUN测定浓度与参考值之间差异不显著(P>0.05);MUN浓度与乳蛋白率、乳脂率呈负相关(P>0.05),娟姗奶牛MUN浓度与乳质的相关系数绝对值比荷斯坦奶牛的大。可见,荷斯坦奶牛处于能量蛋白代谢失衡状态,而娟姗奶牛的能量蛋白代谢基本平衡,且娟姗奶牛MUN浓度对乳质的影响程度较荷斯坦奶牛的大。
- 赵日浪韦秋玲李方玉李向涛黄飞翔钟诚
- 关键词：乳质奶牛
