李军
- 作品数：52 被引量：151H指数：7
- 供职机构：广西动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：广西省自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西科技创新能力与条件建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 规模猪场不同免疫次数对口蹄疫抗体产生效果的影响被引量：4
- 2014年
- 【目的】探讨规模猪场不同免疫次数对口蹄疫病毒(FMDV)抗体产生的影响,为指导口蹄疫(FMD)免疫提供理论依据。【方法】以存栏母猪100头为分界,从广西16家不同规模养猪场采集经FMD疫苗一免、二免和三免后1个月的血清,共720份,然后使用ELISA试剂盒对血清样品的FMDV抗体水平进行检测。【结果】两种规模猪场猪群一免、二免和三免后1个月产生的FMDV抗体总合格率分别为52.08%、72.08%和86.67%,对应平均抗体离散度分别为53.83%、75.75%和106.46%,S/N值分别为0.527、0.387和0.294。其中,一免和三免的FMDV抗体合格率、S/N值差异极显著(P<0.01),FMDV抗体离散度差异显著(P<0.05)。从猪场规模分析发现,100头母猪以上猪场的FMDV抗体平均阳性率为75.83%,抗体离散度为87.71%,平均S/N值为0.350;而100头母猪以下猪场的FMDV抗体平均阳性率为64.72%,抗体离散度为67.47%,平均S/N值为0.455。不同规模猪场猪群的FMDV抗体合格率及S/N值差异极显著(P<0.01),但离散度差异不显著(P>0.05)。【结论】FMD免疫一次远达不到国家要求的免疫效果,经过三免后FMD免疫效果最佳。实际生产中,规模化猪场应加强对猪群FMDV抗体的监测,并根据抗体消长规律有针对性地进行免疫,提高猪群抗体水平的均匀度,有效防控FMD流行。
- 韦显凯郑敏郑列丰苏姣秀颜健华梁晟钟一治何贻坚李军
- 关键词：口蹄疫免疫次数抗体监测离散度
- 猪瘟病毒和不同型猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测方法的建立被引量：1
- 2012年
- 为建立能同时检测猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法,针对CSFV和PRRSV的基因序列设计3对特异性引物,第1对引物扩增CSFV毒株NS2基因508bp片段,第2对引物扩增PRRSV美洲型经典毒株和变异毒株Nsp2基因338bp/248bp片段,第3对引物扩增PRRSV欧洲型毒株ORF5基因614bp片段。经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分CSFV毒株和PRRSV美洲型经典毒株、变异毒株及欧洲型毒株的多重RT-PCR方法。该方法可以特异扩增CSFV和PRRSV,而与猪口蹄疫病毒(FMDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)均无交叉反应;对CSFV和PRRSV 4种重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝/μL。对采集的106份临床疑似病料进行检测,结果CSFV和PRRSV变异株混合阳性4份,占3.77%(4/106);CSFV阳性7份,占6.60%(7/106);PRRSV变异株阳性17份,占16.04%(17/106)。结果表明,建立的多重RT-PCR检测方法可以用于CSFV和PRRSV的临床快速鉴别诊断和流行病学调查。
- 莫胜兰施开创胡杰邹联斌陆文俊李军
- 关键词：猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 鹅源新型鸭呼肠孤病毒广西株G-NDRV-GX-2022全基因组分子特征的分析
- 2024年
- 为研究鹅源新型鸭呼肠孤病毒的全基因组分子特征及其广西流行株的进化特点,本研究采集广西地区3份发病鹅的肝脏、脾脏、肺脏及肾脏病料样品,采用多重荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测番鸭呼肠孤病毒(MDRV)和新型鸭呼肠孤病毒(NDRV),并以NDRV阳性样品的核酸为模板,采用RT-PCR分段扩增其全基因组并测序,采用BioEdit软件分析其全基因组序列的相似性;采用NetNGlyc 1.0软件预测NDRVσC蛋白N-糖基化位点;通过Mega 7.0软件绘制σ系列基因的系统发育树及RDP5和SimPlot软件分析NDRV全基因组的重组事件。RT-q PCR结果显示,检出1份NDRV阳性样品,经测序及序列拼接,获得一条鹅源NDRV广西流行株G-NDRV-GX-2022全基因组序列,全长23353 bp,分为L1~L3、M1~M3及S1~S4共10个基因;BlAST分析结果显示,G-NDRV-GX-2022株10个基因与GenBank中相应基因序列的相似性最高为91.2%~98.4%,对应的病毒株均源自中国广东、福建、山东、浙江及湖北等地的NDRV,宿主有野鸭、番鸭、绿头鸭等,表明G-NDRV-GX-2022株基因来源广泛且多样;σC蛋白N-糖基化位点预测结果显示,G-NDRV-GX-2022株与NDRV参考株均为^(121)NLTS^(124);σ系列基因遗传进化树显示,σB、σNS进化树中NDRV参考株均为连续不间断的进化分支,而σA、σC进化树中NDRV参考株为不连续间断的进化分支,且均未呈现流行时间与地域关联的进化特点,表现出生物遗传多样性的特征;全基因组重组分析结果显示,G-NDRV-GX-2022株的M3基因检测到重组信号,主要亲本为野鸭源NDRV SD-12株,二者相似性为95.4%,次要亲本为鹅呼肠孤病毒(GRV)GD2020株,二者相似性为94.3%,证实野鸟与水禽的呼肠孤病毒之间能够发生基因重组。本研究丰富了水禽呼肠孤病毒基因库信息,并为禽呼肠弧病毒分子遗传进化研究提供基础数据。
- 谢守玉魏园园熊陈勇何梦薏谢颖郑敏韦显凯吕思明赵子欣苏文广李军黄张玲熊毅
- 关键词：新型鸭呼肠孤病毒遗传进化
- 猪促炎细胞因子多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
- 2012年
- 为建立及应用定量检测猪促炎细胞因子mRNA表达水平的方法,从分子水平研究脑心肌炎病毒(EMCV)的致病机制,分别构建含有猪促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及管家基因β-actin基因片段的重组质粒标准品,建立了检测IL-1β/β-actin、IL-6/β-actin、TNF-α/β-actin的多重TaqMan real-time PCR检测方法。标准曲线的相关系数均达到0.998以上;初始模板的检出下限均达到10拷贝/μL;只有以目标cDNA为模板,并加入特异性引物和探针的反应才能检测到荧光信号;组内与组间的变异系数均小于2%。应用所建立的检测方法,对猪源EMCV GXLC株感染仔猪心肌中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA的表达水平进行检测。结果表明,所建立的多重TaqMan real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于猪IL-1β、IL-6、TNF-α基因的检测及定量分析。
- 施开创梁媛陈芳芳屈素洁莫胜兰李军
- 关键词：促炎细胞因子脑心肌炎病毒TAQMAN探针
- 美洲型与欧洲型PRRSV多重TaqMan荧光定量RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用被引量：1
- 2014年
- 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型经典毒株、高致病性变异毒株以及欧洲型毒株基因组的序列差异,设计2对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分PRRSV美洲型经典毒株、变异毒株以及欧洲型毒株的多重荧光定量RT-PCR方法。该方法线性关系好,标准曲线的相关系数均达到0.999以上;特异性强,只有PRRSV出现阳性反应,而与口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型均无交叉反应;敏感性高,经典毒株、变异毒株、欧洲型毒株的检出下限分别为1.13、1.37、1.39copies/μL,均比普通RT-PCR敏感100倍;重复性好,组内及组间变异系数均小于1.5%。应用所建立的方法对采集的282份临床病料进行检测,结果 PRRSV阳性101份,其中95份为变异毒株、6份为经典毒株、4份为变异毒株和经典毒株混合感染,未检测到欧洲型毒株。结果表明,本研究建立的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法可为PRRSV的快速鉴别诊断及流行病学调查提供有效的技术手段。
- 官家明施开创李凤梅张步娴陈汉忠邹联斌李军
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪脑心肌炎病毒GXLC株的分离及其3D基因分子特征的分析被引量：7
- 2011年
- 采集临床疑似脑心肌炎死亡仔猪的组织作为接种材料,接种于BHK-21细胞系,观察细胞病变（CPE）,并用RT-PCR和间接荧光抗体试验（IFA）进行鉴定,证实分离到1株脑心肌炎病毒（encephalomyocarditis virus,EMCV）,命名为GXLC株。应用RT-PCR方法扩增GXLC株的3D基因,扩增产物克隆入pMD18-T载体后进行测序,对获得的3D基因序列进行分析。序列分析结果表明,GXLC株3D基因全长1380 nt,编码460个氨基酸,含有7个抗原表位。同源性分析结果表明,GXLC株与国内外其它EMCV分离株3D基因核苷酸序列的同源性在84.7%~99.7%之间,氨基酸序列的同源性在96.1%~99.6%之间。遗传进化分析结果表明,基于3D基因核苷酸序列绘制的系统进化树可将所有EMCV分离株分成2个群：Ⅰ群和Ⅱ群,Ⅰ群可再细分为Ⅰa亚群和Ⅰb亚群,其中猪源EMCV在Ⅰ群和Ⅱ群中均有分布,而鼠源EMCV分布在Ⅰ群,人源EMCV分布在Ⅱ群;GXLC株与其它中国分离株均属于Ⅰa亚群。
- 陈进喜施开创黄胜斌陆文俊屈素洁郑敏李军
- 关键词：脑心肌炎病毒3D基因分子特征
- 2019-2021年鸭坦布苏病毒广西流行毒株遗传多样性分析被引量：1
- 2022年
- 【目的】研究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)广西毒株分子遗传特征,以期了解、掌握DTMUV广西毒株流行新特点,为及时调整、制定有效防控措施提供数据支持。【方法】采集2019-2021年广西各地的鸭组织病料,采用已建立的实时荧光定量RT-PCR方法检测DTMUV,根据毒株检测年限和来源地选取部分阳性样品进行DTMUV全序列扩增及测序,并进行序列相似性、重要蛋白关键氨基酸位点、系统发育、全序列重组及遗传进化速率分析。【结果】共获得8株DTMUV全序列,基因组全长为10992 bp,为广西毒株。广西毒株之间开放阅读框(ORF)及E、NS5基因的核苷酸序列相似性分别为97.9%~99.8%、97.0%~99.9%和97.8%~99.9%,氨基酸序列相似性分别为99.1%~99.9%、99.0%~100%和99.3%~99.9%;与国内外参考毒株的核苷酸序列相似性分别为86.4%~99.3%、85.8%~99.5%和87.1%~99.2%,氨基酸序列相似性分别为96.0%~99.8%、94.8%~100%和97.5%~99.9%,且与水禽源TMUV相似性高于其他宿主源。与疫苗株FX2010相比,DTMUV广西毒株E蛋白共有11个氨基酸位点发生变异,其中第43、150、153、326、403、464及487位为广西毒株独特的氨基酸突变。ORF遗传进化分析结果显示,广西毒株均分布于2.1亚群,而源自广西的GX2011和GX2015株隶属于2.2亚群,表明DTMUV广西流行毒株进化趋势不完全一致;E、NS5基因系统发育趋势与ORF相似。重组分析结果表明,GXBH01-2019、GXZS02-2020、ziYY150901及HB2016株检测有重组信号。E、NS5基因的遗传进化速率估算分别为1.31×10^(-3)和1.30×10^(-3)替换/(位点·年),表明二者进化较为同步。【结论】当前DTMUV广西流行毒株表现为与主要流行毒株亲缘性较近,E蛋白发生特有氨基酸突变,进化趋势不一致,存在重组现象等分子特征,结果为制定有效防控措施提供了基础数据。
- 熊陈勇尹彦文施开创李军郑敏韦显凯冯淑萍龙凤屈素洁陆文俊周洪槿黄海莲谢守玉黎宗强
- 关键词：E基因
- 鹅细小病毒、番鸭细小病毒及鸭圆环病毒多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用被引量：1
- 2023年
- 为建立鉴别检测鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)及鸭圆环病毒(DuCV)的方法,本研究分别针对GPV、MDPV NS基因与DuCV Rep基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时鉴别检测GPV、MDPV及DuCV的TaqMan荧光定量PCR方法。利用该方法检测GPV、MDPV、DuCV及禽流感病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒、减蛋综合征病毒、鸭坦布苏病毒、番鸭呼肠孤病毒等主要水禽源病毒,结果显示,该方法仅能扩增出GPV、MDPV及DuCV,与其他主要水禽源病毒均无交叉反应,特异性强;利用该方法检测等体积混合后的GPV、MDPV及DuCV质粒标准品混合物,结果显示,该方法对3种质粒标准品的检测限均为7.5×10^(1)拷贝/μL,普通单一PCR对上述3种质粒标准品混合物的检测限均为7.5×10^(3)拷贝/μL,表明本研究建立方法的敏感性高于普通PCR;该方法组内与组间重复性试验的变异系数均小于2.0%,重复性好。利用该方法与MDPV和GPV双重荧光定量PCR方法及DuCV荧光定量PCR方法同时检测96份临床发病鸭的组织样品,该方法检测结果显示,共检出58份阳性样品,其中GPV检出率为18.75%(18/96),MDPV检出率为4.17%(4/96),DuCV检出率为37.50%(36/96),GPV与DuCV混合感染率为8.33%(8/96),阴性样品38份。与GPV和MDPV双重荧光定量PCR及DuCV荧光定量PCR方法的检测结果均一致,三者的符合率达100%。本研究建立的GPV、MDPV及DuCV多重TaqMan荧光定量PCR方法为临床鉴别检测该3种病原及其流行病学调查提供了特异、敏感、高效的技术手段。
- 谢守玉刘惠心熊陈勇郑敏施开创韦显凯冯淑萍龙凤梁凤吕思明屈素洁陆文俊尹彦文李军
- 关键词：鹅细小病毒番鸭细小病毒鸭圆环病毒荧光定量PCR
- 2010—2011年广西狂犬病监测及免疫效果分析被引量：4
- 2013年
- 为了解当前广西家犬狂犬病流行情况,评价防控效果,采集免疫过狂犬病疫苗的犬血清2 972份进行抗体检测。结果:抗体阳性的有2 620份,阳性率为88.16%。另外,采集交易市场或屠宰场表观健康犬的脑组织样品800份,疑似发病犬脑组织样品25份,分别通过RT-PCR方法和小鼠接种试验检测狂犬病病原,结果表观健康犬有11份样品呈阳性,阳性率1.38%,疑似狂犬病犬有5份样品呈阳性,阳性率20%。实施狂犬病疫苗免疫后,广西家犬总体免疫抗体水平良好,表观健康犬携带狂犬病病毒比率显著降低。提示应继续加强农村犬的免疫和管理,有效降低狂犬病的发生。
- 韦显凯郑敏郑列丰甘海霞赵国明苏姣秀颜健华梁晟何贻坚李军
- 关键词：狂犬病RT-PCR抗体监测
- 应用正向间接血凝(IHA)与阻断ELISA方法检测猪瘟抗体的比较试验被引量：1
- 2011年
- 目前国内在对猪群进行猪瘟免疫效果评估时,多采用CSF正向IHA方法与CSFV抗体ELISA方法,但这两种方法在检测CSF抗体存在一定差异。本试验分别运用正向间接血凝（IHA）与阻断ELISA方法检测550份猪血清中猪瘟抗体水平。
- 胡杰梁媛莫胜兰屈素洁陈义祥陆文俊郑敏李军施开创磨龙春黄夏刘棋
- 关键词：ELISA方法正向间接血凝猪瘟抗体CSFV
