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程龙: 作品数：13 被引量：14H指数：3; 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>; 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金上海市科技兴农推广项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生交通运输工程生物学更多>>

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一种弓形虫病间接ELISA诊断试剂盒: 本发明公开了一种弓形虫病间接ELISA诊断试剂盒；所述诊断试剂盒中所用的检测抗原为核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的弓形虫TgPP1基因原核表达获得的重组蛋白rTgPP1。本发明的试剂盒的包被抗原是原核表达的rTg...; 陈兆国程龙黄燕米荣升韩先干陆珂; 文献传递

微小隐孢子虫E2F样结构域包含转录因子CpELD基因的原核和真核表达: 2021年; 为了实现微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)E2F样结构域包含转录因子编码基因cpeld的原核和真核表达,设计2对特异性引物,以C.parvum卵囊cDNA为模板,PCR扩增得到cpeld基因,将其分别插入pET32a和p3XFLAG-CMV14载体。同时设计引物,扩增微小隐孢子虫类钙调蛋白(C.parvum calmoduin-like proteins)的编码基因CpCML,插入pcmv-HA载体。将鉴定正确的重组质粒分别转入BL21(DE3)和293T细胞进行表达,Western blot观察重组蛋白的反应原性。结果显示,成功构建了重组原核表达质粒pET32a-cpeld和真核表达质粒p3XFLAG-CMV14-cpeld以及pcmv-HA-CML;SDS-PAGE显示,重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达出了分子质量约为55 ku的重组蛋白;Western blot分析显示,原核表达的重组蛋白能与鼠抗His单克隆抗体,真核表达重组CpELD和CpCML蛋白能分别与抗FLAG和HA单克隆抗体反应。结果表明,成功实现了cpeld基因的原核和真核表达以及CpCML基因的真核表达,表达产物具有良好的反应原性,为后续开展隐孢子虫CpELD和CpCML的功能和作用机制研究、新型的防控技术研发奠定了基础。; 陈宇米荣升龚海燕程龙王旭韩先干黄燕陈兆国; 关键词：微小隐孢子虫真核表达

弓形虫Ⅰ型蛋白磷酸酶基因的原核表达及蛋白的定位研究: 2017年; 为表达刚地弓形虫Ⅰ型蛋白磷酸酶(Toxoplasma gondii protein phosphatase 1,Tg PP1)基因、确定Tg PP1在弓形虫速殖子上的定位,将全基因合成的Tg PP1基因克隆到表达载体p ET-30a(+)中,构建重组载体p ET30a-Tg PP1,转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导,利用SDS-PAGE和Westernblot检测重组蛋白表达情况及其免疫学活性。通过亲和层析获得Tg PP1重组蛋白,制备抗血清,采用间接ELISA检测血清效价、免疫荧光法检测Tg PP1蛋白在弓形虫中的定位。结果显示,成功构建了重组表达载体p ET30a-Tg PP1并实现了在大肠杆菌中的表达,表达产物的分子质量约为36 ku。Western-blot检测结果显示,重组蛋白能与弓形虫感染小鼠阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。免疫荧光检测结果显示,Tg PP1主要定位于弓形虫速殖子顶端。上述结果为进一步研究Tg PP1在弓形虫入侵和繁殖过程中的作用及其机制打下了基础。; 程龙詹婷婷周鹏黄燕米荣升宋悦游艳敏韩先干陈兆国; 关键词：刚地弓形虫原核表达抗血清

典型城市屠宰及销售猪肉中弓形虫的分子检测研究: 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种世界性分布的食源性寄生原虫，可感染包括人在内的大多数哺乳动物。该病在猪场广泛流行，但绝大部分呈隐性感染。由于猪肉在我国居民食物构成中占据重要地位，是肉类消费的主体，因...; 唐婷婷米荣升黄燕陆珂程龙贾海燕胡盼宋悦韩先干赵权陈兆国; 关键词：分子检测 PCR

不同试剂盒提取DNA对猪肉中弓形虫PCR检测的影响被引量：3: 2018年; 弓形虫病是一种分布广泛、危害严重的人兽共患寄生虫病。为了比较不同试剂盒提取猪肉中弓形虫DNA的效率和质量及对弓形虫PCR检测的影响,本试验采用6种商品化基因组DNA提取试剂盒,对添加了不同数量弓形虫速殖子的猪膈肌样品进行DNA提取,作为模板,进行PCR检测,观察不同试剂盒提取DNA的扩增效果。结果显示,EZNA Tissue DNA Kit、TIANamp Genomic DNA Kit和FastDNA Spin Kit for Soil三种方法对含有1×101个以上数量速殖子的猪膈肌样品提取的DNA,均能被检测为阳性;TIANamp Genomic DNA Kit提取的DNA作为模板进行PCR检测,其扩增特异性良好。利用TIANamp Genomic DNA Kit对126份上海屠宰场采集的猪膈肌样品进行DNA提取,作为模板进行PCR检测,结果阳性率为3.97%(5/126),表明TIANamp Genomic DNA Kit提取猪肉中携带的弓形虫DNA具有高效、稳定、价廉的优点,适合田间猪肉中携带弓形虫的调查研究应用。; 张烨华米荣升程龙程龙黄燕张晓丽贾海燕韩先干陈兆国; 关键词：弓形虫 DNA提取 PCR检测猪肉

旋毛虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ蛋白的制备及其定位研究: 2023年; 为获得旋毛虫(T1)脱氧核糖核酸酶Ⅱ(DNase Ⅱ)蛋白,观察其在肌幼虫虫体中的分布,以旋毛虫(T1)肌幼虫cDNA为模板,利用RT-PCR技术扩增旋毛虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ(TsDNase Ⅱ)蛋白的编码基因tsdnase Ⅱ,将其克隆到原核表达载体pCold-TF中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,以IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳分析;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blot分析重组Ts DNaseⅡ(rTsDNase Ⅱ)蛋白的反应原性;将rTsDNase Ⅱ蛋白免疫6-8周BALB/c小鼠,制备其多克隆抗体;制作旋毛虫肌幼虫冰冻切片,利用免疫荧光试验观察TsDNase Ⅱ蛋白在虫体中的分布。结果,成功地扩增出了长度为942 bp的旋毛虫tsdnase Ⅱ基因片段,构建了其原核表达质粒pCold-TF-tsdnase Ⅱ;转化了重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)成功可溶表达了rTsDNase Ⅱ,大小为86 kDa;ELISA与Western blot分析结果显示,rTsDNase Ⅱ蛋白能与感染旋毛虫的小鼠血清发生特异性反应;冰冻切片免疫荧光分析显示,TsDNase Ⅱ分布于旋毛虫肌幼虫整个虫体。研究结果为进一步分析TsDNase Ⅱ的特性与功能、利用该蛋白研发旋毛虫病新型防控策略打下了基础。; 赵冰阿曼古丽·斯拉依米荣升程龙刘旗龚海燕龚海燕贾海燕贾海燕韩先干黄燕陈兆国; 关键词：原核表达 ELISA

隐孢子虫三种实时荧光定量PCR检测方法的比较被引量：6: 2017年; 为筛选一种检测谱广、敏感性好、特异性高的隐孢子虫实时荧光定量PCR法,对JVAP18S法、Csp18S法和CRU18S法三种隐孢子虫实时荧光定量PCR方法的敏感性、特异性和重复性进行了检测,并与基于18S r DNA序列的套式PCR方法进行了比较。结果显示,以10倍倍比稀释的含有微小隐孢子虫18S r DNA基因片段的重组质粒为模板,成功地建立了三种实时荧光定量PCR方法;敏感性试验显示,JVAP18S法和Csp18S法最低可检测0.1个卵囊,而CRU18S法最低只能检测到1个卵囊,但他们均比套式PCR方法敏感;特异性试验结果显示,三种实时荧光定量PCR法均可检测微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、泰泽隐孢子虫(Cryptosporidium tyzzeri)和贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi),而其他属寄生虫和细菌DNA的检测结果均为阴性;重复性试验结果显示,JVAP18S法、Csp18S法和CRU18S法的批内变异系数分别为0.69%~2.68%、0.11%~4.93%、0.04%~2.89%,批间变异系数分别为0.52%~5.75%、2.09%~5.13%、1.15%~3.71%;对50份小鼠田间粪便样品检测结果显示,JVAP18S法检测的阳性率为84.00%,显著高于套式PCR法检测的64.00%的阳性率。上述结果表明,三种实时荧光定量PCR法均能有效检测隐孢子虫,比较而言,JVAP18S法敏感性高、特异性强、重复性好,尤其适合于隐孢子虫含量较少的样品检测。; 宋悦赵权黄燕米荣升游艳敏贾海燕程龙张烨华张晓丽韩先干陈兆国; 关键词：隐孢子虫实时荧光定量PCR 敏感性特异性

猪附红细胞体HspA1与DnaJ相互作用的双分子荧光互补的研究被引量：1: 2016年; 为研究猪附红细胞体DnaK样蛋白HspA1与DnaJ是否存在相互作用,采用双分子荧光互补技术进行检测。利用生物信息学软件预测HspA1的B细胞抗原表位和功能结构域,选取具有功能结构域且抗原表位富集的第388-609位区域为HspA1表位区。分别对HspA1编码基因a1、HspA1表位区编码基因a1-epi进行扩增,并克隆到pBiFC-VC155载体中,同时将DnaJ编码基因dnaj克隆到pBiFC-VN155中,分别与上述重组质粒共转染293T细胞。结果显示,成功地构建了含HspA1编码基因a1、HspA1表位区编码基因a1-epi、DnaJ编码基因dnaj的真核重组表达质粒pBiFC-VC155-a1、pBiFC-VC155-a1-epi和pBiFC-VN155-dnaj,共转染的293T细胞在荧光显微镜下均能观察到绿色荧光,表明HspA1和HspA1表位区均与DnaJ存在相互作用。本研究为进一步探讨HspA1的生物学功能和作用机制提供了新的思路。; 胡盼米荣升黄燕陆珂贾海燕程龙詹婷婷宋悦王香平韩先干陈兆国; 关键词：猪附红细胞体 DNAJ 蛋白相互作用

典型城市屠宰及销售猪肉中弓形虫的分子检测研究: 詹婷婷米荣升黄燕陆珂程龙贾海燕胡盼宋悦韩先干赵权陈兆国

微小隐孢子虫假定棒状体蛋白CpPRP1 sushi结构域片段的生物信息学分析被引量：1: 2020年; 目的预测微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)假定棒状体蛋白1(putative rhoptry protein-1,CpPRP1)中Sushi结构域(CpSushi)蛋白片段的结构、理化性质、翻译后修饰位点及抗原表位等信息。方法利用在线软件Protparam分析CpSushi蛋白片段的等电点、消光系数、分子质量等理化性质;利用Protscale软件分析蛋白片段的亲/疏水性;利用SignalP软件预测其信号肽;利用TargetP软件预测其亚细胞结构;利用KinasePhos、NetPhos以及NetOGlyc、NetNGlyc、NetCGlyc软件分别预测其翻译后激酶磷酸化、磷酸化及O/N/C-GlcNAc糖基化位点;利用SOPMA、COILS、Bcepred软件分别分析其二级结构、卷曲螺旋,以及柔韧性、表面可及性、转动、暴露表面及抗原倾向;TMHMM软件预测其跨膜结构域;ABCpred、Syfpeithi软件分别预测其B、T细胞抗原表位;STRING软件预测与其互作的蛋白。结果CpSushi蛋白片段有237个氨基酸残基,分子质量为26 ku,有两个疏水峰;该蛋白无信号肽、跨膜结构域;α-螺旋、延伸链、β转角、无规则卷曲所占比例分别为28.27%、18.99%、8.86%和43.88%,且能形成规则的卷曲螺旋结构;含有22个O-GlcNAc和2个N-GlcNAc-糖基化修饰位点,但缺乏C-GlcNAc糖基化位点;其氨基酸序列中存在多处丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸磷酸化位点,蛋白的柔韧性(临界值1.9)、极性(临界值1.8)、亲水性(临界值1.9)位点分别有16、18和8个;含有2个Turn(临界值2.4)位点、7个抗原倾向(临界值1.9)位点、14个表面可及性(临界值1.9)位点、12个暴露表面(临界值2.3)位点,以及3个B细胞表位、7个限制性CTL细胞表位、9个限制性Th细胞表位;STRING分析显示,与该蛋白片段互作的隐孢子虫蛋白有10个。结论隐孢子虫CpPRP1 Sushi结构域蛋白片段具有良好的免疫原性,可成为潜在的隐孢子虫病疫苗候选分子。; 李凯迪程龙米荣升黄燕贾海燕王旭龚海燕陈兆国; 关键词：微小隐孢子虫生物信息学分析

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