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贾海燕: 作品数：19 被引量：33H指数：4; 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>; 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金上海市科技兴农重点攻关项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>

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三种实时荧光定量PCR方法检测粪便中隐孢子虫卵囊的比较: 传统镜检方法检测粪样中的隐孢子虫(Cryptosoridium spp.)卵囊存在敏感性低、计数困难等缺点,本研究旨在对三种隐孢子虫实时荧光定量PCR检测方法进行比较,筛选一种有效的检测方法,用于准确评估小鼠粪便中隐孢子...; 黄燕米荣升贾海燕胡盼詹婷婷宋悦陈兆国; 关键词：隐孢子虫粪便

不同试剂盒提取DNA对猪肉中弓形虫PCR检测的影响被引量：3: 2018年; 弓形虫病是一种分布广泛、危害严重的人兽共患寄生虫病。为了比较不同试剂盒提取猪肉中弓形虫DNA的效率和质量及对弓形虫PCR检测的影响,本试验采用6种商品化基因组DNA提取试剂盒,对添加了不同数量弓形虫速殖子的猪膈肌样品进行DNA提取,作为模板,进行PCR检测,观察不同试剂盒提取DNA的扩增效果。结果显示,EZNA Tissue DNA Kit、TIANamp Genomic DNA Kit和FastDNA Spin Kit for Soil三种方法对含有1×101个以上数量速殖子的猪膈肌样品提取的DNA,均能被检测为阳性;TIANamp Genomic DNA Kit提取的DNA作为模板进行PCR检测,其扩增特异性良好。利用TIANamp Genomic DNA Kit对126份上海屠宰场采集的猪膈肌样品进行DNA提取,作为模板进行PCR检测,结果阳性率为3.97%(5/126),表明TIANamp Genomic DNA Kit提取猪肉中携带的弓形虫DNA具有高效、稳定、价廉的优点,适合田间猪肉中携带弓形虫的调查研究应用。; 张烨华米荣升程龙程龙黄燕张晓丽贾海燕韩先干陈兆国; 关键词：弓形虫 DNA提取 PCR检测猪肉

旋毛虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ蛋白的制备及其定位研究: 2023年; 为获得旋毛虫(T1)脱氧核糖核酸酶Ⅱ(DNase Ⅱ)蛋白,观察其在肌幼虫虫体中的分布,以旋毛虫(T1)肌幼虫cDNA为模板,利用RT-PCR技术扩增旋毛虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ(TsDNase Ⅱ)蛋白的编码基因tsdnase Ⅱ,将其克隆到原核表达载体pCold-TF中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,以IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳分析;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blot分析重组Ts DNaseⅡ(rTsDNase Ⅱ)蛋白的反应原性;将rTsDNase Ⅱ蛋白免疫6-8周BALB/c小鼠,制备其多克隆抗体;制作旋毛虫肌幼虫冰冻切片,利用免疫荧光试验观察TsDNase Ⅱ蛋白在虫体中的分布。结果,成功地扩增出了长度为942 bp的旋毛虫tsdnase Ⅱ基因片段,构建了其原核表达质粒pCold-TF-tsdnase Ⅱ;转化了重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)成功可溶表达了rTsDNase Ⅱ,大小为86 kDa;ELISA与Western blot分析结果显示,rTsDNase Ⅱ蛋白能与感染旋毛虫的小鼠血清发生特异性反应;冰冻切片免疫荧光分析显示,TsDNase Ⅱ分布于旋毛虫肌幼虫整个虫体。研究结果为进一步分析TsDNase Ⅱ的特性与功能、利用该蛋白研发旋毛虫病新型防控策略打下了基础。; 赵冰阿曼古丽·斯拉依米荣升程龙刘旗龚海燕龚海燕贾海燕贾海燕韩先干黄燕陈兆国; 关键词：原核表达 ELISA

隐孢子虫三种实时荧光定量PCR检测方法的比较被引量：6: 2017年; 为筛选一种检测谱广、敏感性好、特异性高的隐孢子虫实时荧光定量PCR法,对JVAP18S法、Csp18S法和CRU18S法三种隐孢子虫实时荧光定量PCR方法的敏感性、特异性和重复性进行了检测,并与基于18S r DNA序列的套式PCR方法进行了比较。结果显示,以10倍倍比稀释的含有微小隐孢子虫18S r DNA基因片段的重组质粒为模板,成功地建立了三种实时荧光定量PCR方法;敏感性试验显示,JVAP18S法和Csp18S法最低可检测0.1个卵囊,而CRU18S法最低只能检测到1个卵囊,但他们均比套式PCR方法敏感;特异性试验结果显示,三种实时荧光定量PCR法均可检测微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、泰泽隐孢子虫(Cryptosporidium tyzzeri)和贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi),而其他属寄生虫和细菌DNA的检测结果均为阴性;重复性试验结果显示,JVAP18S法、Csp18S法和CRU18S法的批内变异系数分别为0.69%~2.68%、0.11%~4.93%、0.04%~2.89%,批间变异系数分别为0.52%~5.75%、2.09%~5.13%、1.15%~3.71%;对50份小鼠田间粪便样品检测结果显示,JVAP18S法检测的阳性率为84.00%,显著高于套式PCR法检测的64.00%的阳性率。上述结果表明,三种实时荧光定量PCR法均能有效检测隐孢子虫,比较而言,JVAP18S法敏感性高、特异性强、重复性好,尤其适合于隐孢子虫含量较少的样品检测。; 宋悦赵权黄燕米荣升游艳敏贾海燕程龙张烨华张晓丽韩先干陈兆国; 关键词：隐孢子虫实时荧光定量PCR 敏感性特异性

上海水产品中异尖线虫分子鉴定与流行性调查的初步研究: 目的:为了解上海市海洋鱼类中异尖线虫的感染现状,探讨其对水产品的健康危害。方法:从市场上随机抽取10种海洋鱼类,通过目测和显微镜检测异尖线虫。聚合酶链反应扩增核糖体DNA(rDNA)的内部转录间隔区(ITS)序列并测序分...; 王旭贾海燕米荣升黄燕韩先干陈兆国; 关键词：海洋鱼类; 文献传递

基于不同靶基因的3种住肉孢子虫PCR检测方法比较被引量：6: 2020年; 为筛选敏感、特异的住肉孢子虫(Sarcocystis spp.)PCR检测方法,对以住肉孢子虫18S rRNA、28S rRNA和线粒体细胞色素C氧化酶I基因(cox 1)的部分片段为靶基因设计的3套引物建立的PCR方法进行敏感性和特异性试验,并对田间采集的100份牛源和猪源肌肉样品进行检测。结果显示,以18S rRNA和28S rRNA为靶基因的PCR检测方法的敏感性相似,DNA最小检出量均为1×10-2 ng/μL;而以cox 1为靶基因的PCR检测方法敏感性相对较低,DNA的最低检出量为1 ng/μL。对7种不同寄生虫DNA进行特异性试验,结果以cox 1基因为靶基因的PCR方法特异性较好,仅能够扩增出枯氏住肉孢子虫(Sarcocystis cruzi)DNA;以18S rRNA为靶基因的PCR法,除枯氏住肉孢子虫外,刚地弓形虫和微小隐孢子虫也有相似扩增条带;以28S rRNA为靶基因的PCR法,除枯氏住肉孢子虫外,刚地弓形虫、微小隐孢子虫和欧猥迭宫绦虫DNA也能扩增出杂带,但大小不符。利用3种方法对100份牦牛和猪肉样品进行扩增,发现以18S rRNA、28S rRNA和cox 1为靶基因的PCR法的阳性率分别为36.00%(36/100)、43.00%(43/100)和38.00%(38/100)。结果表明,以cox 1为靶基因的PCR法有良好的特异性,适合用于田间动物肌肉样品中住肉孢子虫的检测,为开展动物住肉孢子虫病分子流行病学及防控研究提供了依据。; 孙滔米荣升张烨华张世杰张晓丽贾海燕贾海燕黄燕曾江勇黄燕陈兆国龚海燕; 关键词：PCR方法住肉孢子虫

截短侧耳类药物耐药机制研究进展被引量：4: 2017年; 截短侧耳类抗菌药物泰妙菌素和沃尼妙林是兽医专用药。随着病原菌对现有药物的耐药性在全球范围蔓延,现在兴起了开发新的截短侧耳衍生物用于治疗人类细菌感染。瑞他帕林(Rapamulin)是第一个用于人医的截短侧耳类药物,2007年被批准用于由金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和酿脓葡萄球菌(Staphylococcus pyogenes)引起的皮肤感染。截短侧耳衍生物在人医上的开发应用使其耐药机制成为国际上的研究热点。本文就截短侧耳类药物耐药机制及其传播机理的研究进展进行综述。; 刘东良贾海燕魏建超李蓓蓓; 关键词：耐药性泰妙菌素

弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列SRS47D基因的原核表达及蛋白定位研究: 2020年; 为表达弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列(surface antigen glycoprotein 1-related sequences,SRS47D)并确定其在弓形虫中的定位,本研究将SRS47D基因序列插入原核表达载体pColdⅠ,构建原核表达质粒pColdⅠ-SRS47D,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况,Western blot分析重组蛋白的反应原性;利用His柱纯化重组蛋白,免疫新西兰兔,制备抗血清,通过间接ELISA检测血清效价;利用免疫荧光法检测蛋白在弓形虫速殖子中的定位。结果显示:成功构建了原核表达质粒pColdⅠ-SRS47D,在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,表达产物约为55 kDa;重组蛋白能与感染弓形虫的小鼠血清发生特异性反应,免疫兔血清效价达到1∶51 200;免疫荧光检测结果显示,SRS47D蛋白分布在弓形虫速殖子表面,尤其前部和后部表膜。上述结果为进一步深入研究弓形虫SRS47D的特性和功能奠定了基础。; 刘辉米荣升贾海燕王旭黄燕张烨华张晓丽杨衡韩先干陈兆国; 关键词：刚地弓形虫原核表达

异尖科线虫线粒体基因组序列的生物信息学分析: 为了解异尖科线虫线粒体基因组序列特性及在其分子分类和系统进化研究中的价值,从NCBI网站获得5种异尖科线虫的线粒体基因组序列数据,应用ClustalW、MEGA7、ARWEN进行核苷酸与编码氨基酸比对;利用ESPript...; 王旭贾海燕米荣升黄燕杨衡张烨华张晓丽韩先干陈兆国; 关键词：线粒体基因组生物信息学; 文献传递

异尖科线虫线粒体基因组序列的生物信息学分析被引量：3: 2018年; 目的了解异尖科线虫线粒体基因组序列特性及其在分子分类和系统进化研究中的价值。方法从NCBI网站获得5种异尖科线虫的线粒体基因组序列数据,应用ClustalW、MEGA7、ARWEN进行核苷酸与编码氨基酸比对;利用ESPript和PyMOL软件分析COX1蛋白一级结构,比较各蛋白三级结构模型。结果异尖线虫科线粒体DNA为双链闭环分子,长度为1.32～1.40kb。共有36个以相同方向排列的基因,其中编码蛋白质的基因12个,编码tRNA的基因22个(含亮氨酸-tRNA和丝氨酸-tRNA基因各2个,其余18种氨基酸tRNA各1个),编码rRNA的基因2个(分别为16S核糖体RNA(rRNA)和12SrRNA)。在12个蛋白编码基因中,CYTB和Nad2基因进化速率快,而cox1和nad4L基因则保守。线粒体tRNA长度为52～65bp,数目在6～9个之间,其中布兰地线虫(A.berlandi)的tRNA数目较多,为9个,而对盲囊线虫(C.ogmorhini)和简单异尖线虫(A.simplex)均为6个。tRNA二级结构多为经典的三叶草结构,少数为D-loop结构。简单异尖线虫与派氏异尖线虫(A.pegreffii)亲缘关系较近,拟地新线虫(P.decipiens)和简单异尖线虫与派氏异尖线虫的亲缘关系较远,对盲囊线虫与以上各虫种的亲缘关系较远。编码蛋白序列同源性比对显示,对盲囊线虫的COX1与其他4种异尖线虫差异较大,有17个氨基酸与其他4种不相同。氨基酸序列三级结构比对显示,对盲囊线虫的COX1有两处位点的折叠与其他线虫存在差异。结论异尖科线虫线粒体基因组分布均一,排列紧密,种间编码的蛋白质序列差异较小。A.pegreffii和A.simplex与A.berlandi的同源性较高,COX1可以作为异尖科线虫中重要的标志性蛋白。; 王旭贾海燕米荣升黄燕杨衡张烨华张晓丽韩先干陈兆国; 关键词：线粒体基因组生物信息学

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