陈微微
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 氧化葡糖杆菌sndh-sdh基因簇的克隆表达被引量：1
- 2012年
- 目的:从氧化葡糖杆菌H763中克隆sndh-sdh基因簇,在大肠杆菌和氧化葡糖杆菌621H中分别表达山梨酮脱氢酶-山梨糖脱氢酶(SNDH-SDH),并检测其活性。方法与结果:以氧化葡糖杆菌H763基因组DNA为模板,PCR扩增包括启动子、结构基因及终止序列在内的sndh-sdh基因簇,回收3533 bp的扩增产物,连入pMD18T载体,转化至大肠杆菌DH5α中表达;以山梨糖或木糖为底物,DCIP法检测菌体裂解液,DCIP检测液颜色由蓝绿色变为黄色,表明大肠杆菌表达产物具有脱氢酶活性。构建pBBR1MCS2-sndh-sdh载体,通过接合转移导入氧化葡糖杆菌621H,重组葡糖杆菌在以山梨醇或山梨糖为底物的培养基中培养,采用薄层层析检测法检测其培养上清中的代谢产物,层析板上显示了2-酮基-L-古龙酸斑点。结论:重组大肠杆菌DH5α和氧化葡糖杆菌621H中均表达了有脱氢酶活性的SNDH-SDH。
- 侯伟熊向华陈微微汪建华舒伟袁志刚张惟材
- 关键词：山梨糖脱氢酶2-酮基-L-古龙酸
- 酮古龙酸菌山梨酮脱氢酶的原核表达及活性鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的:克隆酮古龙酸菌Y25的山梨酮脱氢酶基因sndh2,在大肠杆菌中进行表达,并检测表达产物的活性。方法:以酮古龙酸菌Y25基因组DNA为模板,PCR扩增sndh2基因,连接到pET22b表达载体后转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达;对菌体裂解液进行SDS-PAGE分析;以D-木糖为底物,采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后活性染色及DCIP检测法鉴定表达产物的脱氢酶活性。结果:扩增得到1290 bp的山梨酮脱氢酶基因;构建了表达质粒pET22b-sndh2,SDS-PAGE结果显示获得相对分子质量为43.1×103的可溶性表达产物;非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳胶上出现的蓝黑色条带及DCIP检测液颜色的变化说明表达产物在以D-木糖为底物时表现出脱氢酶活性。结论:在大肠杆菌中表达的山梨酮脱氢酶具有生物活性。
- 张谷青陈微微熊向华汪建华游松张惟材
- 关键词：原核表达活性电泳生物活性
- 山梨糖脱氢酶和山梨酮脱氢酶及其应用
- 本发明提供氧化葡糖杆菌CGMCC No.1.637的山梨糖脱氢酶和山梨酮脱氢酶，其氨基酸序列分别如SEQ ID No.2和4所示。本发明还提供编码上述蛋白的基因或基因簇。本发明将带自身调控序列的SNDH-SDH基因簇连入...
- 张惟材熊向华汪建华葛欣陈微微侯伟
- 文献传递
- 山梨醇脱氢酶的克隆、表达及活性检测
- 2011年
- 目的:从氧化葡糖杆菌H24中克隆山梨醇脱氢酶基因进行表达并检测其活性。方法:以氧化葡糖杆菌H24基因组DNA为模板,PCR扩增包括启动子、结构基因及其后的终止序列在内的山梨醇脱氢酶基因;将PCR产物插入pMD18T载体,转化大肠杆菌DH5α;通过活性电泳检测山梨醇脱氢酶在大肠杆菌中的表达及活性。结果:从氧化葡糖杆菌H24中扩增得到山梨醇脱氢酶基因并在大肠杆菌中实现表达,重组菌株经活性电泳检测具有醇糖转化活性。结论:原核表达的山梨醇脱氢酶具有很强的醇糖转化活性。
- 陈微微袁红杰熊向华汪建华马秀灵张惟材
- 关键词：克隆活性电泳生物活性
- 山梨糖脱氢酶和山梨酮脱氢酶及其应用
- 本发明提供氧化葡糖杆菌CGMCC No.1.637的山梨糖脱氢酶和山梨酮脱氢酶，其氨基酸序列分别如SEQ ID No.2和4所示。本发明还提供编码上述蛋白的基因或基因簇。本发明将带自身调控序列的SNDH-SDH基因簇连入...
- 张惟材熊向华汪建华葛欣陈微微侯伟
- 文献传递
