康健
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
- 供职机构：南京农业大学动物医学院农业部动物生理生化重点开放实验室更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金黑龙江省自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的多克隆抗体制备及鉴定被引量：6
- 2011年
- 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白的兔源多克隆抗体,本研究利用表达BVDV E2蛋白的重组质粒pET30a-E2转化E.coli BL21(DE3),经诱导表达获得重组E2蛋白。Western blot检测显示纯化蛋白能够与BVDV参考阳性血清反应。以纯化的重组E2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,病毒中和试验测定其中和效价为1:2048,间接免疫荧光和western blot试验表明其具有良好的反应性和特异性。本研究制备的BVDV重组E2蛋白兔源多克隆抗体可应用于BVDV的检测,同时为进一步建立检测BVDV E2蛋白的ELISA方法奠定基础。
- 高欲燃朱远茂康健史鸿飞李娇任宪刚冯军科于作薛飞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白多克隆抗体
- 脱氢表雄酮对大鼠脂肪代谢的影响及机理被引量：1
- 2015年
- 目的:以雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠为对象,探讨日粮中添加不同剂量的脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)对大鼠脂肪代谢常规生化指标及相关基因表达的影响。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为对照组,DHEA低、中、高剂量组,各处理组大鼠分别灌胃0、25、50、100 mg/(kg·d)的DHEA(以体质量计,下同),连续灌胃8周,测定大鼠血脂、肝脂水平及肝脏脂肪代谢相关基因表达量。结果:DHEA中剂量组大鼠体质量显著低于对照组(P<0.05)。中剂量的DHEA可极显著降低大鼠血清中甘油三酯和血糖含量(P<0.01),低、中剂量的DHEA可显著升高大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇含量(P<0.05)。脂肪代谢合成相关基因分析结果表明,低、高剂量的DHEA可显著或极显著降低大鼠肝脏组织中脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)m RNA表达水平(P<0.05或P<0.01);与对照组相比,不同剂量的DHEA均可显著或极显著降低大鼠肝脏组织中固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)m RNA和肝细胞核因子-4(hepatocyte nuclear factor-4,HNF-4)m RNA表达水平(P<0.05或P<0.01),但对乙酰辅酶A羧化酶(acetyl coenzyme A carboxylase,ACC)m RNA表达水平均无显著影响(P>0.05)。脂肪代谢分解相关基因分析结果表明,不同剂量DHEA均可显著或极显著降低大鼠肝脏组织中酰基辅酶A氧化酶(acyl coenzyme A oxidase,ACO)m RNA表达水平(P<0.05或P<0.01);与对照组相比,低、高剂量的DHEA可显著或极显著降低大鼠肝脏组织中肉毒碱棕榈酰转移酶-1(carnitine palmitoyl transterase-1,LCPT-1)m RNA和过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator activated receptor-α,PPARα)m RNA表达水平(P<0.05或P<0.01);中、高剂量的DHEA可显著或极显著降低大鼠肝脏组织中脂肪三酰甘油脂肪酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)m RNA表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论:长期灌胃DHEA可影响雄性大鼠脂肪代谢途径中关键因子基因的�
- 陈迪康健马海田
- 关键词：脱氢表雄酮脂类代谢MRNA
- 脱氢表雄酮对大鼠机体糖代谢的调节及其生化机制
- 2016年
- 为了探讨灌喂不同剂量的脱氢表雄酮(DHEA)对大鼠糖代谢的影响及生物化学其机制,采用60只雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量、中剂量和高剂量组,各处理组大鼠分别灌胃每天0、25、50、100mg/kg的DHEA,连续灌胃8周,测定大鼠血糖、肝糖原、肌糖原、相关激素水平、糖代谢关键酶的活性及相关基因表达量。结果表明,中剂量DHEA灌胃组大鼠的体增重相比对照组显著降低,而料重比显著升高。与对照组相比,中、高剂量的DHEA可显著增加肝糖原和肌糖原的含量,中剂量的DHEA则可显著降低血糖含量。糖代谢相关酶的活性结果表明:与对照组相比,高剂量的DHEA处理可显著提高6-磷酸果糖激酶2(PFK-2)和苹果酸脱氢酶(MDH)的活性;中剂量的DHEA处理可显著提高丙酮酸激酶(PK)和琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性;低剂量的DHEA处理可显著提高MDH、PK和丙酮酸脱氢酶系E1的活性。糖代谢相关基因表达的结果分析表明:与对照组相比,高剂量的DHEA可显著降低磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)的mRNA表达水平,低剂量的DHEA可显著提高6-磷酸果糖激酶1(PFK1)的mRNA的表达水平。与对照组相比,低、高剂量的DHEA处理可显著提高胰岛素受体(INSR)的mRNA表达水平;低、中剂量的DHEA可显著提高胰岛素受体底物1(IRS-1)的mRNA表达水平,而中、高剂量的DHEA处理可显著提高胰岛素受体底物2(IRS-2)的mRNA表达水平。高剂量的DHEA处理可显著提高葡萄糖转运蛋白2(GLUT-2)的mRNA表达水平,而中剂量的DHEA处理可显著提高葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)的mRNA表达水平。说明DHEA处理主要通过促进肝脏对葡萄糖的转运、提高肝脏中糖代谢途径关键酶的活性,从而调节大鼠血糖的水平,且此种效应可能主要是能过调节胰岛素受体及胰岛素受体底物的表达而实现的。
- 康健陈迪王典马海田
- 关键词：脱氢表雄酮糖代谢生化机制
- 柔嫩艾美耳球虫AMA1蛋白多克隆抗体的制备及在乳酸乳球菌中的表达被引量：7
- 2015年
- 将柔嫩艾美耳球虫子孢子顶膜抗原AMA1胞外域基因片段(EtAMA1)克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET-30a(+)-EtAMA1。质粒经鉴定正确后转化入大肠杆菌中筛选阳性菌,阳性菌经IPTG诱导后采用Western-blot检测目的蛋白的表达情况。用表达的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。应用间接ELISA测定抗体效价,并采用Western-blot检测抗体特异性。将EtAMA1克隆入乳酸菌表达载体pTX8048中构建阳性质粒pTX8048-EtAMA1,质粒电转化入宿主菌乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)NZ9000中筛选阳性菌pTX8048-EtAMA1-L.lactis NZ9000。阳性菌经Nisin诱导后采用Western-blot检测目的蛋白的表达情况。结果表明,EtAMA1在大肠杆菌中以包涵体形式表达。多克隆抗体的效价为218。Western-blot检测证实,制备的抗体可与子孢子反应。重组菌pTX8048-EtAMA1-L.lactis NZ9000经Nisin诱导后,采用Western-blot检测到约61ku的目的蛋白。上述研究结果为基于EtAMA1的鸡球虫病乳酸菌口服疫苗的研制提供了重要参考。
- 王芬马春丽马德星张跃黄宇晨潘龙高铭扬洪琴杨贵君康健
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫多克隆抗体乳酸乳球菌
- 脱氢表雄酮对大鼠颗粒细胞激素生成的作用被引量：1
- 2014年
- 为了探讨脱氢表雄酮(DHEA)对大鼠原代卵巢颗粒细胞激素生成及相关甾体生成酶的影响,采用机械法分离培养大鼠原代卵巢颗粒细胞,放射免疫分析法检测培养液中雌二醇、孕酮和睾酮的含量;Real-time PCR法检测类固醇代谢途径中3β-羟基固醇脱氢酶(3β-HSD)、17β-羟基固醇脱氢酶(17β-HSD)、CYP450 mRNA的表达变化。结果显示:10μmol/L DHEA处理48 h后可显著促进大鼠原代卵巢颗粒细胞雌二醇(P<0.05)、孕酮(P<0.01)和睾酮的分泌量(P<0.01);显著促进3β-HSD(P<0.01)和17β-HSD(P<0.05)mRNA的表达,CYP450 mRNA表达略有降低,但无统计学意义。说明外源性DHEA处理可能通过调节3β-HSD、17β-HSD和CYP450等相关酶的基因表达,进而影响大鼠原代卵巢颗粒细胞雌激素和雄激素的分泌。
- 周英俏丁逍陈迪康健马海田
- 关键词：脱氢表雄酮
- 玉米皮载体阴离子添加剂对干奶牛作用效果研究被引量：1
- 2015年
- 通过比较以玉米皮为载体配制阴离子添加剂与成品阴离子添加剂对干奶牛作用效果,探讨玉米皮作为阴离子添加剂载体可行性。采用单因素随机区组试验设计,将60头产前21 d健康荷斯坦奶牛随机分为3组,分别饲喂：对照组（A组）：不含阴离子添加剂TMR;试验I组（B组）：TMR＋3%阴离子添加剂（干奶宝HRBYD-902）;试验Ⅱ组（C组）：TMR＋3%阴离子添加剂（以玉米皮为载体阴离子添加剂）。结果表明,饲喂初期,试验Ⅰ组和Ⅱ组日平均干物质采食量（DMI）显著低于对照组（P〈0.05）,随饲喂天数增加试验组与对照组之间差异逐渐变小,且试验I组与Ⅱ组间差异不显著（P〉0.05）。整个试验期对照组奶牛尿液p H稳定在7~8,饲喂第1周,两试验组奶牛尿液p H与对照组相比显著下降（P〈0.05）,并于饲喂第2周、第3周p H稳定在6左右。产犊当天,试验Ⅰ组与试验Ⅱ组奶牛血清Ca2＋浓度显著高于对照组,试验Ⅱ组略高于Ⅰ组,但差异不显著（P〉0.05）。试验Ⅱ组奶牛产后胎衣不下概率由30%降到0,乳房炎发生概率与对照组相比有所下降,且预防奶牛产后疾病方面效果好于试验I组。结果显示,饲喂玉米皮为载体阴离子添加剂可在保证奶牛DMI基础上降低奶牛尿液p H,提高奶牛产犊前后血清Ca2＋浓度并降低产后胎衣不下及乳房炎发生概率。因此,玉米皮可作为阴离子添加剂载体使用。
- 张永根吴爽康健丁雪郝小燕张立阳张文佳
- 关键词：玉米皮阴离子添加剂干物质采食量奶牛
