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石斑鱼神经坏死病毒RNA干扰的转染条件优化与效果分析被引量：2: 2011年; 克隆了石斑鱼神经坏死病毒（Nervous necrosis virus,NNV）的衣壳蛋白（Major capsid protein,MCP）基因序列并构建了绿色荧光蛋白（EGFP）基因与MCP基因的融合真核表达载体pEGFP-MCP,设计了3对针对MCP基因序列的小片段干扰性RNA（Small interfering RNA,siRNA）序列（NNV-001、NNV-002、NNV-003）,开展了转染方法、转染剂量与转染效果的研究,用脂质体转染法将pEGFP-MCP和不同剂量的siRNA共转染导入黑头呆鱼肌肉（FHM）细胞.结果表明,用无血清培养基转染、4-6 h后换液的转染方法,比不换液、只将转染混合物代替同体积培养基的转染方法效率高;当质粒的转染量为50、70、100和150 ng时,100 ng的转染量为最合适;在pEGFP-MCP与siRNA共转染组,3对siRNA序列都有干扰效果,均能干扰绿色荧光蛋白的表达,其中NNV-002效果最好.当siRNA终浓度为200 nmol/L时,显示出了较好的沉默效果.; 黄桂菊喻达辉柳明潘俐玲王晓宁曾令兵龙华; 关键词：石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白基因 RNA干扰

中国海南三亚大珠母贝不同年代种群的遗传变异研究被引量：7: 2011年; 利用10个多态微卫星标记对中国海南三亚海域大珠母贝（Pinctada maxima）3个不同年代（2007、2009和2010）群体的遗传变异进行了分析，每个群体30个样品。10个位点共扩增出60个等位基因，平均每个位点6（2—8）个，3个群体分别丢失了1、2和4个稀有等位基因。平均期望杂合度（Hc）、平均多态信息含量（PIC）、平均Shannon多样性指数均呈下降趋势。各群体均存在一定程度的杂合子缺失。30个数据中（3个种群×10个位点）有18个偏离了Hardy—Weinberg平衡。两两群体间的平均近交系数（FIS）介于0．2273～0．2601之间，平均遗传分化指数（FST）介于0．0204～0．0462，遗传分化显著（P〈0．01）。结果表明，3个年代群体遗传多样性水平已经出现了逐渐降低的趋势，遗传结构存在显著差异，近交程度增加，因此，人工繁育工作中应注意避免近亲繁殖和遗传多样性的降低。; 柳明喻达辉黄桂菊卢传亮; 关键词：大珠母贝微卫星

大珠母贝微卫星DNA标记的分离与筛选被引量：11: 2010年; 采用生物素标记的（CA）15探针和磁珠富集法构建了大珠母贝（Pinctada maxima）微卫星DNA文库，随机挑选1200个菌落，经PCR筛选得到298个候选克隆，成功测序246个，分析获得251个微卫星序列，其中完美型、非完美型和混合型分别占63％、32％和5％。除探针中使用的CA重复外，还得到AT、GT、TC、AG、GC、TAA、CAA、AGG、GATA、GACA、GTGC、CGTC、GACG、CTGT等重复序列。设计引物90对，挑选其中30对合成并筛选出21对能在大珠母贝基因组有效扩增的引物。种群PCR扩增后利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行检测，获得了10个多态位点，共检测出59个等位基因，片段长度范围为133～444bp。各位点等位基因数2～8个，平均等位基因数5．9个；有效等位基因数为1．3423-6．0000，平均为4．1240；多态性信息含量（CPI）为0．2225-0．8118，平均0．7179；期望杂合度（Hc）为0．2593-0．8475，平均0．7179；观测杂合度（H0）为0．3000-0．8000，平均0．5333。这些微卫星多态性标记的获得，为进一步开展大珠母贝遗传育种、保护生物学和种群遗传多样性等研究奠定了一定基础。; 柳明喻达辉黄桂菊; 关键词：磁珠富集法微卫星

大珠母贝微卫星DNA标记的筛选分离与分析: 采用生物素标记的（CA）探针和磁珠富集法构建了大珠母贝（Pinctada maxima）微卫星DNA文库,随机挑选了1200个菌落,经PCR筛选得到298个候选克隆,成功测序236个,分析获得397个微卫星序列,其中完美...; 柳明喻达辉黄桂菊; 关键词：大珠母贝微卫星磁珠富集法; 文献传递

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柳明