王晓宁
- 作品数：14 被引量：28H指数：3
- 供职机构：上海海洋大学水产与生命学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学天文地球生物学更多>>
- 草莓海菊蛤α淀粉酶基因的克隆、序列分析与组织表达
- ＜正＞采用同源克隆和cDNA末端快速扩增技术（RACE）,从草莓海菊蛤（Spondylus fragum）克隆到α淀粉酶基因的cDNA序列,命名为sfAMY,GenBank序列号为JF748721。cDNA全长1717b...
- 王晓宁黄桂菊潘俐玲成书营喻达辉
- 关键词：Α淀粉酶CDNA克隆
- 文献传递
- 大珠母贝prismalin-14基因与基因组序列克隆及SNP位点分析
- 王晓宁黄桂菊潘俐玲成书营喻达辉
- 关键词：大珠母贝基因组序列
- 大珠母贝、珠母贝和草莓海菊蛤基因克隆与表达分析
- 大珠母贝(Pinctada maxima)和珠母贝(P. margaritifera)隶属于软体动物门(Mollusca),双壳纲(Bivalvia),珍珠贝目(Pterioida),珍珠贝科(Pteriidae),珠母...
- 王晓宁
- 关键词：大珠母贝珠母贝基因克隆
- 文献传递
- 企鹅珍珠贝组织蛋白酶D的cDNA克隆、序列特征分析和应激表达研究被引量：8
- 2012年
- 笔者初步研究了企鹅珍珠贝(Pteria penguin)组织蛋白酶D(cathepsin D,CTSD)的基因克隆和功能,通过同源克隆方法和cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得了企鹅珍珠贝组织蛋白酶D基因(命名为pgCTSD)。该基因cDNA全长1 767 bp,其中5'UTR为38 bp,3'UTR为553 bp,ORF为1 176 bp,编码392个氨基酸,包括信号肽(Met1-Ala18)、前体域(Leu19-Lys47)和成熟域(Tyr48-Ser392)三部分,分子量为42.3 kDa,等电点为8.04。pgCTSD氨基酸序列与大珠母贝(Pinctada maxima)pmCTSD的相似性最高(79%),与其他物种的相似性为59%～75%。荧光定量分析表明,空白对照组中pgCTSD mRNA在闭壳肌、性腺、肝胰脏、外套膜和鳃组织中都有表达,且在闭壳肌中表达量最少,肝胰脏中最高。与试验对照组相比,脂多糖(LPS)刺激6 h后性腺和肝胰脏显著下降,闭壳肌的表达量虽不大但增加显著,外套膜和鳃组织变化不显著;哈维弧菌(Vibrio harveyi)刺激6 h后肝胰腺和外套膜显著下降,闭壳肌和鳃显著上升,性腺无显著变化。肝胰腺中pgCTSD对LPS和弧菌刺激的应答反应表明pgCTSD可能参与了免疫反应。
- 潘俐玲黄桂菊成书营王晓宁喻达辉
- 关键词：企鹅珍珠贝组织蛋白酶DLPS刺激
- 石斑鱼神经坏死病毒RNA干扰的转染条件优化与效果分析被引量：2
- 2011年
- 克隆了石斑鱼神经坏死病毒（Nervous necrosis virus,NNV）的衣壳蛋白（Major capsid protein,MCP）基因序列并构建了绿色荧光蛋白（EGFP）基因与MCP基因的融合真核表达载体pEGFP-MCP,设计了3对针对MCP基因序列的小片段干扰性RNA（Small interfering RNA,siRNA）序列（NNV-001、NNV-002、NNV-003）,开展了转染方法、转染剂量与转染效果的研究,用脂质体转染法将pEGFP-MCP和不同剂量的siRNA共转染导入黑头呆鱼肌肉（FHM）细胞.结果表明,用无血清培养基转染、4-6 h后换液的转染方法,比不换液、只将转染混合物代替同体积培养基的转染方法效率高;当质粒的转染量为50、70、100和150 ng时,100 ng的转染量为最合适;在pEGFP-MCP与siRNA共转染组,3对siRNA序列都有干扰效果,均能干扰绿色荧光蛋白的表达,其中NNV-002效果最好.当siRNA终浓度为200 nmol/L时,显示出了较好的沉默效果.
- 黄桂菊喻达辉柳明潘俐玲王晓宁曾令兵龙华
- 关键词：石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白基因RNA干扰
- 草莓海菊蛤α淀粉酶基因的克隆、序列分析与组织表达
- 王晓宁黄桂菊潘俐玲成书营喻达辉
- 关键词：Α淀粉酶CDNA克隆
- 大珠母贝种苗海区深水中间培育技术研究被引量：12
- 2011年
- 开展了大珠母贝种苗不同深度和密度的养殖试验,以优化、筛选合适的养殖密度和深度,为大珠母贝养殖提供技术支撑。贝苗初始大小为平均壳长4.11 mm,平均壳高3.89 mm,平均体重0.0143 g,养殖水深包括3、5、7 m和海底(12 m)(贝苗密度为2 000个/笼),养殖密度包括500、1 000、1 500、2 000、2 500个/笼(养殖水深为5 m)。经过两个月的养殖,7 m水深的贝苗生长最快,平均壳长达30.80 mm(平均生长速度为0.41 mm/d),平均体重达3.34 g(平均生长速度为36.69 mg/d);密度为500个/笼的生长较快,平均壳长达30.15 mm(生长速度为0.42 mm/d),平均体重达3.18 g(生长速度为31.90 mg/d)。深度组中存活率最高的是海底组(12 m),为17.7%,明显高于其他3组(P<0.05),最低的是3 m组,为6.9%;密度组存活率最高的是1 500个/笼组,为15.3%,显著高于其他组(P<0.05),最低的是2 500个/笼组,为7.4%。不管是深度组还是密度组,第1个月与第2个月的平均壳长增长没有明显差异,而第2个月的平均体重增长明显大于第1个月。说明大珠母贝苗海区养殖适宜在较深水层、密度为1 500～2 000个/笼的条件下进行。
- 成书营喻达辉黄桂菊潘俐玲王晓宁
- 关键词：种苗养殖方式
- 大珠母贝、珠母贝和草莓海菊蛤基因克隆与一达分析
- 大珠母贝(Pinctadamaxima)和珠母贝(P.margaritifera)隶属于软体动物门(Mollusca)，双壳纲(Bivalvia)，珍珠贝目(Pterioida)，珍珠贝科(Pteriidae)，珠母贝属...
- 王晓宁
- 关键词：大珠母贝珠母贝基因克隆
- 文献传递
- 大珠母贝组织蛋白酶D的cDNA克隆、序列特征分析及应激表达研究被引量：4
- 2011年
- 通过同源克隆方法和cDNA末端快速扩增技术(RACE),获得了大珠母贝(Pinctada maxima)组织蛋白酶D基因(命名为pmCTSD)的cDNA全长序列1 742 bp,其中5’非翻译区(UTR)38 bp,3’UTR 534 bp,开放阅读框1 170 bp,编码390个氨基酸,分子量约为41.9 ku,等电点约为7.57。序列特征分析表明,pmCTSD蛋白由信号肽(Met1-Ala18)、前体域(Leu19-Lys47)和成熟域(Thr48-Asn390)3部分组成。同源性分析表明,pmCTSD氨基酸序列与其他物种高度保守,相似性介于64%～70%之间。进化分析表明,pmCTSD与栉孔扇贝亲缘关系最近,与传统分类结果基本一致。组织表达荧光定量分析发现,pmCTSD在闭壳肌、性腺、肝胰脏、外套膜和鳃组织中都有表达,但在性腺中表达量最高,肝胰脏次之。
- 潘俐玲黄桂菊喻达辉成书营王晓宁
- 关键词：大珠母贝组织蛋白酶D
- 大珠母贝(Pinctada maxima)α-淀粉酶基因cDNA及内含子克隆分析被引量：2
- 2013年
- α-淀粉酶广泛分布于动物、植物和微生物中,是贝类软体动物的主要消化酶,对贝类生长有重要影响。文章首次获得大珠母贝α-淀粉酶基因(命名为pmAMY,Pictada maxima alpha amylase),其cDNA全长1732bp,其中5'UTR 25bp,ORF 1554bp,编码518个氨基酸,3'UTR 153bp,分子量为57.7KDa,等电点7.63。氨基酸序列分析表明,pmAMY的氨基酸序列包括16个氨基酸组成的信号肽序列(MLLIVCSIAFFHSVYG)、8个半胱氨酸位点(Cys46、Cys104、Cys157、Cys176、Cys392、Cys398、Cys464、Cys476)、3个活性催化位点(Asp213、Glu249、Asp314)、4个钙结合位点(Asn118、Arg174、Asp183、His217)、3个氯离子结合位点(Arg211、Asn312、Arg350)和4段保守序列(Ile111—Val116、Val207—Ala215、Phe247—Val251、Val308—Asn315)。pmAMY的氨基酸序列与企鹅珍珠贝(Pteria penguin)同一性最高,为82%;与超嗜热古菌(Thermococcus hydrothermalis)同一性最低仅为27%;与其他物种的同一性在57%—79%之间。克隆获得大珠母贝pmAMY基因的2个内含子,长度分别为846bp、162bp。2个内含子都起始于GT,终止于AG,符合内含子共同剪接位点序列。组织表达分析表明pmAMY只在肝胰脏中表达。本研究为α-淀粉酶基因的功能分析、单核苷酸多态性(SNP,single nucleotide polymorphism)位点分离及其与生长性状的关联分析奠定了基础。
- 潘俐玲黄桂菊成书营王晓宁喻达辉
- 关键词：大珠母贝Α-淀粉酶基因内含子
