查旭
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：首都医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：文化科学医药卫生更多>>
- 129位丝氨酸磷酸化α-突触核蛋白DELFIA检测方法的建立及初步应用被引量：1
- 2021年
- 目的建立解离-增强镧系荧光免疫分析(dissociation enhanced lanthanide fluorescent immunoassay,DELFIA)检测129位丝氨酸磷酸化α-突触核蛋白的方法及初步应用。方法使用体外蛋白重组技术纯化得到人源α-syn蛋白单体(α-syn),用Polo样激酶催化α-syn获得磷酸化α-syn单体(phosphorylatedα-syn monomer,p-α-syn),用4-氧代壬烯醛制备α-syn聚集体(aggregates ofα-syn,OW)及磷酸化α-syn聚集体(aggregates of p-α-syn,OP)。使用Western blotting法和间接ELISA方法验证本实验室前期制备的识别α-syn蛋白N端的多克隆抗体SN16和识别129位丝氨酸磷酸化α-syn蛋白的单克隆抗体C140S。使用SN16作为捕获抗体,C140S作为检测抗体的双抗夹心DELFIA法建立检测OP的标准曲线,并检测Thy 1-α-SYN转基因小鼠血浆内OP的变化。结果考马斯亮蓝染色和Western blotting法检测结果显示体外纯化的人源α-syn蛋白单体(17000)纯度高,并通过催化获得了p-α-syn、OW和OP纯蛋白,均可用作建立标准曲线的标准抗原。Western blotting和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)结果显示SN16对α-syn、p-α-syn、OW、OP这4种形式的蛋白均可识别,C140S可以识别p-α-syn和OP,说明SN16和C140S可以用作双抗夹心法的配对抗体。间接DELFIA检测结果显示C140S对OP的识别效率更好。双抗夹心DELFIA检测结果显示,SN16-C140S作为配对抗体检测标准抗原的范围为:0.625~20 ng/mL,并建立了检测OP的标准曲线。Wt及Tg组小鼠血浆中OP在12月龄均较6月龄有所增加(P<0.001),Tg组6月龄小鼠血浆中OP显著高于同月龄Wt组(P<0.001),Tg组12月龄小鼠血浆OP较Wt组有增高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论本文建立的SN16-C140S配对的双抗夹心DELFIA体系可以检测Thy1-α-SYN转基因小鼠血浆中聚集的磷酸化α-syn变化情况。
- 高歌查旭刘伟进杨慧
- 关键词：帕金森病Α-突触核蛋白
- 泌尿生理实验操作技术改进研究被引量：3
- 2016年
- 泌尿生理是《生理学》学习的重点和难点内容,《泌尿生理及利尿药物的作用》是医学机能学实验中重要的内容之一,本实验通过观察生理盐水、去甲肾上腺素、葡萄糖、抗利尿激素、利尿药及刺激迷走神经对尿液生成量的影响,使学生加深对尿液生成过程及利尿药物的作用机制的理解。为了提高实验成功率,我们在实验操作中用导尿管插管术代替膀胱插管术以记录尿量,并增加了颈静脉插管术以持续补液。改进后的实验操作吸收了现代实验手段,与临床实践更加接近,激发了学生的学习兴趣和主动性。
- 查旭王望黄海霞李丽娟
