王海波
- 作品数：34 被引量：120H指数：5
- 供职机构：海南农垦总局医院更多>>
- 发文基金：海南省自然科学基金海南省重点科技项目海南省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结核分枝杆菌16kDa与GST融合表达及纯化被引量：1
- 2009年
- 目的:构建融合表达GST和结核分枝杆菌16kDa蛋白的表达系统,摸索表达条件及制备方法。方法:根据16kDa蛋白的基因序列设计引物,从结核菌基因组DNA中扩增该基因,酶切后插入表达载体,测序证实后转入大肠杆菌JM109菌株,经IPTG诱导表达,产物经谷胱甘肽-琼脂糖凝胶法纯化。结果:16kDa基因产物大小、酶切片断大小和载体的大小与设计一致、16kDa基因测序的结果与目的基因完全符合。表达纯化的蛋白的大小与蛋白质分子量标准相比较一致。结论:构建的表达载体成功,纯化的蛋白即为目的蛋白。
- 郭庆水朱中元罗越华王海波黄惜刘贤杰
- 关键词：结核分枝杆菌纯化
- 海南省管理人员体检脂肪肝的患病率调查被引量：1
- 2008年
- 目的调查脂肪肝的人群、时间分布等流行病学特征，为降低脂肪肝的危害提出措施和依据。方法对2006年1～12月来我院体检的干部采用彩色B超仪进行检查并进行分级，同时检测ALT，AST，γ-GT，CH，TG，HDL—Ch，LDL—Ch，Lp—a和BS等功能及血脂指标。分析不同性别和年龄人群的脂肪肝发病率。结果脂肪肝的总发病率为34．6％（1597／4612），单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎和脂肪性肝硬化发病率分别为29．6％、4．8％和0．2％。男性的脂肪肝发病具有双高峰。除〈30岁组的脂肪肝发病率较低外，其余各年龄组均检出较高水平。女性脂肪肝发病60～岁组最高，年龄降低和升高患病率均呈下降趋势。性别间的个性脂肪肝发生率具有显著性差异（χ^2=47．7，P〈0.001）。136例脂肪肝患者的T—CH、TG、LDL—CH、Apo B100、Lp—a、ALT、AST、χ-GT和BS均显著高于192例脂肪肝阴性者。前者的HDL—CH和Apo A显著低于后者（P〈0．05）。HBV感染者的脂肪肝阳性率显著高于HBV阴性者（χ^2=5．3，P〈0．05）。结论脂肪肝的发病率高，性别间存在显著差异，脂肪肝患者HBV阳性率升高，血脂水平异常、肝功异常和血糖水平高。
- 陈贻平刘建兵张秋元张余柳王海波
- 关键词：脂肪肝干部
- 基因芯片技术检测结核分支杆菌耐利福平基因突变的研究被引量：2
- 2008年
- 目的建立基因芯片检测结核分支杆菌耐利福平基因突变,结合基因测序和常规药物敏感性试验进行比较,探讨其实用价值。方法根据结核菌rpoβ基因突变特点,设计不同的寡核苷酸探针,点样制备可检测rpoβ基因突变的芯片,检测利福平(Rifompicin,RFP)株的rpoβ变异情况。结果137株临床分离结核菌,49株耐RFP,占35.8%,平均MIC为179.6±135.0μg/mL。Rpoβ突变率为95.7%(47/49),主要为点突变。突变点依次为531 Ser(TCG)→Leu(TTG)(40.8%)、531 Ser(TCG)→Trp(TGG)(12.2%)、526 His(CAC)→Tyr(TAC)(6.1%)、526 His(CAC)→Asp(GAC)(6.1%)、526 His(CAC)→Asn(AAC)(6.1%)、526 His(CAC)→Pro(CCC)(8.2%)、516Asp(GAC)→Val(GTC)(12.2%)、533Leu(CTG)→Arg(CGG)(4.1%)和513Gln(CAA)→Pro(CCA)(2.1%)。结论本研究建立的检测结核菌rpoβ基因突变的基因芯片技术敏感性高,特异性强,可应用于结核菌耐RFP基因的检测。
- 朱中元王海波谢勇谢萌王莉朱义明郭洁
- 关键词：结核分支杆菌利福平
- 结核分枝杆菌DNA疫苗pVS85B的构建及免疫保护实验研究被引量：2
- 2006年
- 评价构建的结核DNA疫苗pVS85B免疫小鼠后脾细胞体外产生细胞因子和抵抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的能力。利用基因操作技术将结核菌ag85b插入pVAX1载体,构建表达结核菌Ag85B分泌型蛋白的DNA疫苗pVS85B。将雌性C57BL/6小鼠分成5组,每组20只,分别用pVS85B、pVAX1、pIL2S和PBS分别免疫3次,均间隔2周,以相同剂量加强免疫2次。另一组用BCG(105CFU)免疫1次。每组10只鼠在最后一次加强免疫后,无菌取脾培养,检测上清细胞因子。另10只鼠用结核菌H37Rv经静脉攻击,2周后取脾、肝和肺培养结核菌并进行菌落计数。结果是pVS85B免疫组鼠脾淋巴细胞培养上清的mIL-2和mIFN-γ平均含量分别为(311.3±46.2)和(273.6±55.4)pg/ml,显著高于3个阴性对照组(P<0.001),与BCG免疫组无显著性差异(P>0.05)。5个组的平均mIL-6和mIL-10无显著性差异。pVS85B免疫组小鼠的脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为(47 716.6±5 689.0)、(50 113.4±6 532.2)和(51 095.3±2 788.9)CFU/g,分别低于pVAX1、pIL2S和PBS三个阴性对照组的相应器官的结核菌载量(P<0.001)。pVS85B免疫组脾、肝和肺的结核菌载量显著高于BCG免疫对照组。提示,表达结核菌分泌型Ag85B的DNA疫苗pVS85B能够刺激机体产生抗结核菌所需的Th1型免疫应答,免疫鼠获得抵抗H37Rv攻击的能力。
- 刘建兵朱中元王海波谢勇张春发张颖
- 关键词：DNA疫苗结核分泌蛋白细胞免疫免疫保护
- 结核分枝杆菌MPT63抗原蛋白的表达及纯化
- 2011年
- 目的克隆结核分枝杆菌MPT63抗原蛋白的编码基因Rv1926c,并在大肠杆菌中表达纯化,获得结核分枝杆菌重组MPT63蛋白。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,PCR扩增Rv1926c基因编码序列,克隆入原核表达载体pET-30a,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌后用IPTG诱导表达,纯化表达产物,获得重组MPT63抗原蛋白。结果测序表明重组质粒pET30aRv1926c具有正确的编码序列,质粒构建成功,重组蛋白MPT63在大肠杆菌中以包涵体形式稳定表达。结论结核分枝杆菌MPT63重组蛋白能在大肠杆菌工程菌种成功表达,为进一步的应用研究奠定基础。
- 杨倩朱中元王海波
- 关键词：结核分枝杆菌克隆蛋白
- 通用引物PCR法在人乳头瘤病毒基因检测中的应用被引量：3
- 2007年
- 目的建立通用引物PCR法检测人乳头瘤病毒(HPV)基因的方法,探讨其在临床辅助诊断中的应用。方法收集787份标本,其中来自男性160份,女性标本627份。标本均使用通用引物对MY11/09扩增HPVL1基因片段。同时扩增β球蛋白(β-globin)基因作为内对照。结果787份标本中,191份标本HPVL1基因阳性,阳性率为24.3%。男性20～岁组HPV的检出率最高,女性30～岁组HPV的检出率最高,但均无年龄上的显著性差异。患有性病(淋病、尖锐湿疣)、不孕症、宫颈炎、非淋菌性阴道炎等疾病的女性,HPVL1基因的检出率分别为83.3%、20.9%、22.7%、28.0%。男性性病(淋病、尖锐湿疣)、前列腺炎、非淋菌性尿道炎、不育症患者的HPVL1基因检出率分别为42.9%、18.9%、12.5%、7.8%。结论HPVL1基因的检出率较高。通用引物PCR法在临床检验中具有较高的敏感性和特异性。
- 王海波谢勇郭洁
- 关键词：HPV通用引物PCR
- 结核分枝杆菌Mtb8.4DNA疫苗构建及免疫保护研究被引量：4
- 2005年
- 目的评价构建结核菌DNA疫苗pVS84免疫小鼠体外产生细胞因子的能力和抵抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的效果。方法利用基因技术将结核菌Mtb8.4插入pVAXl载体,构建表达结核菌Mtb8.4蛋白(分泌型)的DNA疫苗pVS84。将雌性C57BL/6小鼠分成5组,每组20只,分别用pVS84、pVAXl、plL2S和PBS分别各免疫3次,每次均间隔2周,以等剂量加强免疫2次。另一组用BCG(105CFU)皮内注射免疫1次。每组10只鼠在最后一次加强免疫后,无菌取脾培养,检测上清细胞因子。另10只鼠则用结核菌H37Rv经静脉攻击,2周后取脾、肝和肺培养结核菌并进行菌落计数。结果pVS84免疫组鼠脾淋巴细胞培养上清的mIL-2和mlFN-Y平均含量分别为(290.0±112.9)pg/ml和(501.7±79.4)pg/ml,显著高于3个阴性对照组(P<0.001),与BCG免疫组无显著性差异(P>0.05)。5个组的平均mIL-6和mIL-10无显著性差异。pVS84免疫组小鼠的脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为(39176.9±3702.6)、(18780.1±2535.8)和(24410.3±1846.8)CFU/g,分别低于pVAXl、plL2S和PBS三个阴性对照组的相应器官的结核菌载量(P<0.001),仅脾结核菌载量显著高于BCG免疫对照组。结论构建的DNA疫苗pVS84能够刺激机体产生抗结核菌所需的Thl型免疫应答,免疫鼠抵抗H37Rv攻击的能力与BCG接近。
- 朱中元刘建兵王海波谢勇张春发张颖
- 关键词：结核分枝杆菌DNA疫苗分泌蛋白免疫保护
- 通用引物PCR法在人乳头瘤病毒基因检测中的应用被引量：5
- 2007年
- 目的建立通用引物PCR法检测人乳头瘤病毒(HPV)基因,探讨其在临床辅助诊断中的应用价值。方法收集400份标本,其中男性119份,女性281份。标本均使用通用引物对MY11/09扩增HPV L1基因片段。同时扩增β球蛋白(β-globin)基因作为内对照。结果400份标本中,72份标本HPV L1基因阳性,阳性率为20.5%。20～岁组男女HPV的检出率最高。患有性病(淋病、尖锐湿疣)、不孕症、宫颈炎、非淋菌性阴道炎等疾病的女性,HPV L1基因的检出率分别为75.0%、25.0%2、1.4%、19.1%。男性性病(淋病、尖锐湿疣)、前列腺炎、非淋菌性尿道炎、不育症患者的HPV L1基因检出率分别为66.7%、16.7%、13.6%、5.7%。结论HPV L1基因的检出率较高。通用引物PCR法在临床检验中具有较高的敏感性和特异性。
- 郭洁朱中元王海波王莉
- 关键词：HPV通用引物PCR
- 结核分支杆菌耐异烟肼基因inhA突变的测序研究被引量：1
- 2000年
- 目的 :对多耐药株结核分支杆菌的inhA基因进行测序分析。方法 :inhA片段为引物 ,聚合酶链反应扩增产物 ,克隆后制备质粒 ,直接测定DNA序列。结果 :在17个耐异烟肼菌株中 ,11株出现inhA基因变异 ,突变率为64.7%。主要为碱基置换和缺失 ,各菌株变异不同。katG和inhA同时出现变异的比例高。结论 :结核菌的耐异烟肼 (INH)和乙胺丁醇 (EMB)变异与inhA突变有关 。
- 朱中元邵寒霜陈允凤王海波
- 关键词：结核分支杆菌异烟肼基因突变耐药性
- 抗结核分枝杆菌多种抗原的抗体检测蛋白芯片研究被引量：33
- 2004年
- 目的 建立检测结核分枝杆菌多抗原IgG抗体的蛋白芯片检测系统 ,并验证抗结核分枝杆菌多种抗原的抗体检测蛋白芯片的临床应用价值。 方法 采用棋盘滴定法标定检测结核菌抗体的包被蛋白及金标记二抗的最低工作浓度 ,建立完整的检测系统。结核病人和正常对照者的血清经芯片识别仪和DIGFA法试剂同时检测 ,计算敏感性、特异性和总符合率。 结果 结核芯片系统检测的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和诊断效率分别为76 74% (3 5 3 /4 60 )、81 70 %、5 6 48%、91 90 %和 15 8 44 %。而DIGFA法检测的敏感性、特异性分别为 68 3 1% (2 91/4 2 6)和 72 2 %。两者检测的总符合率为 85 2 1%。检测结果间无显著性差异 (χ2 =6,P >0 0 5 )。全部检测过程只需 5min。 结论 芯片系统检测的敏感性和特异性符合临床检验要求 ,具有简便、快速和单人份操作的优点 ,可用于临床快速诊断结核病。
- 朱中元王海波刘爱国谢勇
- 关键词：抗原抗结核蛋白芯片抗体检测多抗
