周艳
- 作品数：3 被引量：11H指数：1
- 供职机构：扬州大学比较医学中心更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 小鼠肝炎病毒N蛋白间接ELISA方法的建立被引量：1
- 2008年
- 目的运用重组蛋白作为包被抗原建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。方法将大肠杆菌表达小鼠肝炎病毒核衣壳蛋白(Nucleocapsid N)的主要抗原域NP(S)纯化后作为诊断抗原,通过条件优化,建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。结果确定其包被抗原的浓度为300 ng/mL,血清稀释度为1∶200,山羊抗小鼠酶标抗体的稀释浓度为1∶3000。S/P≥0.386则为阳性,S/P<0.308为阴性,两者之间为可疑。经阻断试验、交叉试验和重复性实验,表明该方法特异性强,重复性好。与国家实验动物检测中心的MHV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为94.1%、93.3%和93.9%。用该融合蛋白包被聚苯乙烯板后在-20℃下可保存5个月,应用该方法检测了98份送检的血清样品,有10份检测为阳性。结论本研究建立的间接ELISA特异性强,重复性好,为进一步开发MHV血清抗体诊断试剂盒奠定了基础。
- 周艳胡建华高诚周洁
- 关键词：小鼠肝炎病毒重组N蛋白间接ELISA
- 小鼠肝炎病毒N基因的原核表达和免疫活性初步分析被引量：1
- 2008年
- 目的对小鼠肝炎病毒(mouse hapetitis virus)A59毒株核蛋白(N)基因进行了克隆、表达和重组蛋白的免疫活性分析。方法根据GenBank公布的MHV-A59 N基因序列(AY700211),设计了一对特异性引物,通过RT-PCR扩增出N基因的主要抗原片段NS,将目的片段纯化后与pGEM-T-easy载体连接得到重组质粒pTN,双酶切回收目的基因片段克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建了重组质粒pGEX-NS,转化大肠杆菌BL21,用IPTG进行了诱导表达。对表达裂解物进行SDS-PAGE和Western-blotting验证。结果表达产物相对分子质量约56×103与预期相符;能与MHV阳性血清发生特异性反应,出现单一条带。结论原核表达的NP(S)蛋白有良好的抗原性,为检测小鼠肝炎病毒抗体的ELISA检测方法的研究奠定了基础。
- 周艳胡建华高诚王宗耀
- 关键词：小鼠肝炎病毒N基因克隆原核表达
- 微卫星标记在近交系及封闭群小鼠遗传质量检测中的初步应用被引量：9
- 2008年
- 利用建立的小鼠微卫星检测方法,对来源于2个单位的近交系 BALB/c 小鼠和封闭群 ICR 小鼠进行了遗传分析,结果发现 A 单位 BALB/c 小鼠发生了遗传污染,有部分小鼠在部分微卫星位点发生了变异,而 B 单位 BALB/c 小鼠在所有的检测位点上的结果都与预期的 BALB/c 小鼠位点一致;对 ICR 小鼠分析结果发现 A 单位 ICR 小鼠在22个位点的平均杂合度为0.379,平均多态信息量为0.308,属中度多态,B 单位 ICR 小鼠的平均杂合度为0.287,平均多态信息量为0.227,属低度多态。结果表明微卫星标记可用于检测近交系小鼠的遗传质量,也可用于分析封闭群小鼠的遗传多态性,为一种有潜力的实验动物遗传学检测标记。
- 谢建云冯洁胡建华周艳邵伟娟倪丽菊魏晓锋高诚
- 关键词：微卫星标记近交系小鼠遗传多态性
