王宗耀
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：扬州大学比较医学中心更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 仙台病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用被引量：2
- 2008年
- 以纯化pQE31表达的融合蛋白仙台病毒FP(S)为诊断抗原、融合蛋白FP(S)免疫鼠血清为阳性抗体,建立了小鼠仙台病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法。该抗原FP(S)不与其他常见的小鼠病毒(小鼠肝炎病毒、鼠痘病毒、小鼠肺炎病毒和呼肠孤病毒Ⅲ型)的阳性血清发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于7%,与中国药品生物制品检定所的试剂盒符合率为98%。本研究建立的检测仙台病毒抗体的间接ELISA诊断方法,有很好的特异性和敏感性,为仙台病毒的抗体的检测提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。
- 王宗耀王胜昌胡建华高诚
- 关键词：仙台病毒原核表达
- 小鼠肝炎病毒N基因的原核表达和免疫活性初步分析被引量：1
- 2008年
- 目的对小鼠肝炎病毒(mouse hapetitis virus)A59毒株核蛋白(N)基因进行了克隆、表达和重组蛋白的免疫活性分析。方法根据GenBank公布的MHV-A59 N基因序列(AY700211),设计了一对特异性引物,通过RT-PCR扩增出N基因的主要抗原片段NS,将目的片段纯化后与pGEM-T-easy载体连接得到重组质粒pTN,双酶切回收目的基因片段克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建了重组质粒pGEX-NS,转化大肠杆菌BL21,用IPTG进行了诱导表达。对表达裂解物进行SDS-PAGE和Western-blotting验证。结果表达产物相对分子质量约56×103与预期相符;能与MHV阳性血清发生特异性反应,出现单一条带。结论原核表达的NP(S)蛋白有良好的抗原性,为检测小鼠肝炎病毒抗体的ELISA检测方法的研究奠定了基础。
- 周艳胡建华高诚王宗耀
- 关键词：小鼠肝炎病毒N基因克隆原核表达
- 仙台病毒RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：4
- 2008年
- 目的建立仙台病毒的RT-PCR方法并应用于常规检测。方法根据仙台病毒(gi:9627219)F蛋白的基因序列,设计Ff和Fr引物,以仙台病毒总RNA逆转录的cDNA为模板扩增出约609 bp预期条带;将建立的RT-PCR方法应用于人工感染小鼠和送检细胞样品检测。结果八份感染小鼠样品中全部扩增出约609 bp目的条带,16份肿瘤细胞样品有12份扩增出609 bp目的条带。结论建立的仙台病毒RT-PCR方法是一种灵敏、快速、特异的方法,能够用于常规检测。
- 王宗耀谢建云邵伟娟王胜昌胡建华高诚
- 关键词：仙台病毒逆转录-聚合酶链反应
- 仙台病毒F基因的克隆及原核表达
- 2007年
- 目的利用原核表达系统表达仙台病毒(Sendai Virus)F蛋白主要抗原片段FP(S),并对表达产物进行免疫学初步研究。方法根据GenBank公布的仙台病毒F蛋白(gi:9627219)的基因序列设计特异性引物,通过RT-PCR扩增出F基因的主要抗原片段FP(S),插入pMD-18-T载体中,鉴定正确后克隆入pQE31原核表达载体中,将鉴定正确的pQE31-FP(S)转化大肠埃希菌M15,IPTG诱导表达,对大肠埃希菌裂解物进行SDS-PAGE和Western-blot验证。结果大肠埃希菌表达的FP(S)相对分子质量约26×103,与预期相符;能与SeV阳性血清发生特异性反应,出现单一条带。结论原核表达的FP(S)蛋白有良好的抗原性,为检测仙台病毒抗体的ELISA检测方法的研究奠定了基础。
- 王宗耀王胜昌胡建华高诚
- 关键词：仙台病毒F基因克隆
