张高华
- 作品数：16 被引量：44H指数：3
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- 发文基金：辽宁省博士科研启动基金辽宁省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
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- 一种优化的、高效率的农杆菌介导的花生转化方法
- 本发明涉及一种优化的、高效率的农杆菌介导的花生转化方法。本方法优化了花生再生芽的生成途径，省略了传统农杆菌侵染前的预培养过程，大大缩短了获得再生转化植株的周期。在侵染过程中通过烟草提取物的添加及对花生外植体的超声波处理提...
- 王旭达于树涛张高华王鹤于国庆范琦都兴范
- 獐茅液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因AlNHX转化水稻的耐盐性研究被引量：2
- 2012年
- 为提高转基因植物的耐盐性,本研究利用农杆菌介导的方法将獐茅液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因AlNHX组成型表达在日本晴粳稻中。PCR鉴定结果表明,AlNHX基因已经整合到日本晴粳稻中,并在转录水平上表达。转AlNHX基因水稻的耐盐性明显提高。用NaCl经5d培养处理后,转基因水稻可以在含有0～200mmol/L NaCl的MS培养基中生长,而野生型水稻无法在含盐量超过150mmol/L NaCl的MS培养基中生长。
- 王旭达丰明张高华王鹤李怀梅李树英
- 关键词：水稻獐茅耐盐性农杆菌转化
- 农杆菌介导马铃薯转化体系的优化及转基因马铃薯的耐盐性研究被引量：1
- 2016年
- 通过农杆菌介导的方式将獐茅液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因(AlNHX)表达在马铃薯中,并对影响马铃薯转化的几种因素(抗生素浓度、农杆菌菌液浓度、共培养时间等)进行优化。结果表明:最适农杆菌菌液浓度是OD600=0.6,最适侵染时间是5min,最适共培养时间是2d,马铃薯转化中最适头孢霉素浓度是400mg/L;经PCR检测确认的转基因马铃薯植株在含0.7%NaCl的培养基中可以生长,而野生型马铃薯无法在此培养基中正常生长。在盐胁迫条件下,转基因马铃薯的Na^+、K^+含量及K^+/Na^+的比值均高于野生型马铃薯。研究证实马铃薯植物的的耐盐性可以通过农杆菌转化导入獐茅液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因而得到提高。
- 王旭达丰明王鹤张高华
- 关键词：马铃薯农杆菌转化耐盐性
- 辽棉19号转化耐盐基因AlNHX1的研究被引量：1
- 2017年
- 为提高辽宁棉花品种的耐盐性,利用农杆菌介导上胚轴外植体转化法,将来源于盐生植物獐茅的Na^+/H^+逆向转运蛋白基因(AlNHX1)导入棉花辽棉19号中,分析影响棉花上胚轴外植体农杆菌转化的几个重要因素,建立并优化了该品种的转化体系,结果表明:1)农杆菌侵染的最佳时间为90s,共培养过程中乙酰丁香酮最适浓度为100 mg/L,筛选培养基中潮霉素最适浓度为30 mg/L,生根培养基中吲哚乙酸IBA的最适浓度为10mg/L;2)对转化植株进行PCR检测,表明耐盐基因AlNHX1已导入辽棉19号中;3)在盐胁迫下,转基因植株的电导率,渗透势都显著低于未转化植株。结果表明,通过筛选并优化转化体系,辽棉19号品种的耐盐性有较明显的提升,为沿海滩涂地区种植棉花提供了一定的参考。
- 丰明王旭达王鹤张高华
- 关键词：NA+/H+逆向转运蛋白农杆菌转化相对电导率
- 锌指蛋白基因ZAT12提高转基因高油酸花生抗寒性被引量：3
- 2020年
- 低温和冻害严重影响高油酸花生的产量和品质。为了提高高油酸花生的抗寒性,本研究利用农杆菌介导的转化方式将可以激活低温响应基因的锌指蛋白基因ZAT12导入高油酸花生。同时对影响高油酸花生转化的几种因素(植物生长素ZT和6-BA的使用浓度,侵染时间,烟草提取物添加量)进行改良优化。通过PCR和实时荧光定量PCR检测证明PnZAT12已经整合到高油酸花生基因组中。对转基因植株进行低温胁迫处理,分别测定其相对电导率(relative electrolytic leakage, REL)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量及超氧化物岐化酶(superoxide dismutase, SOD)活性。结果表明,转基因花生的MDA含量和REL显著低于非转基因花生,而SOD活性明显高于非转基因花生。在表型比对方面,转基因花生的叶片黄化程度和植株枯萎程度远低于非转基因花生。结果证实,转基因花生比非转基因花生有更高的抗寒性。研究结果对抗逆基因的改良研究及高油酸花生的分子育种工作都具有重要的参考价值。
- 王旭达张高华王鹤于树涛李怀梅王晓燕范琦
- 关键词：农杆菌转化抗寒性
- 植物跨膜离子转运蛋白与其耐盐性关系研究进展被引量：14
- 2006年
- 盐胁迫下植物吸收过多的N a+,使植物体内的离子平衡受到破坏,为了维持其正常生长细胞内的各种离子就必须保持平衡,而这一过程主要是由位于质膜和液泡膜上的离子转运蛋白完成的,并在植物耐盐性方面起关键作用。本文主要对响应盐胁迫的几种跨膜转运蛋白如:K+/N a+离子转运蛋白、N a+/H+逆向转运蛋白以及与其相关的H+-ATPase等,在植物耐盐分子生物学方面的研究进展进行综述。
- 王景艳张高华苏乔安利佳刘兆普
- 关键词：盐胁迫NA^+/H^+逆向转运蛋白H^+-ATPASE耐盐性
- RLM-RACE法扩增獐茅液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因5′-cDNA末端序列被引量：3
- 2007年
- 根据已获得的盐生植物獐茅(Aeluropus littoralisvar.sinensisDebeaux)液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白(Na+/H+antiporter)基因部分cDNA片段,设计2条特异引物(GSP1、GSP2),采用RLM-RACE(RNA ligase-medi-ated rapid amplification of 5′and 3′cDNA ends)法获得了其5-′cDNA末端序列,并找出了转录起始位点。该片段长816 bp,与芦苇液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因序列同源性最高达91%,与拟南芥、盐角草、水稻、大麦、小麦的同源性分别为81%、82%、86%、87%和81%,为该基因全长的克隆及启动子的研究奠定了基础。与其它测定基因转录起始位点的方法相比,RLM-RACE方法更快捷、简便、准确。
- 王景艳张高华苏乔安利佳刘兆普
- 关键词：獐茅NA^+/H^+逆向转运蛋白转录起始位点
- 草樱组织快繁技术的研究
- 2008年
- 以樱桃砧木草樱的嫩梢为外植体,进行离体培养,筛选出的启动培养基配方为MS+NAA0.3mg/L+6-BA2.0mg/L;诱导丛生苗的培养基配方MS+6-BA1.5mg/L+NAA1.0mg/L;诱导生根的培养基配方1/2MS+IAA1.5mg/L。
- 岳冬梅李怀梅张高华
- 关键词：组织快繁
- 獐茅耐盐基因SOS1的克隆及序列分析被引量：6
- 2012年
- 采用RT-PCR和RLM-RACE方法从单子叶盐生植物獐茅(Aeluropus littoralis(Gouan)Parl)中克隆了质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(AlSOS1,JN936862),并对其基因序列进行了分析。Southern杂交试验显示:AlSOS1基因在獐茅基因组中以单拷贝形式存在。AlSOS1基因cDNA全长3 641bp,其中编码区3 420bp,编码一个1 139氨基酸的蛋白。AlSOS1编码蛋白与芦苇、水稻质膜Na+/H+逆向转运蛋白亲缘关系最为接近,达到82%和77%,与双子叶植物拟南芥的亲缘关系仅为58%;系统发育分析显示AlSOS1基因编码蛋白与其他植物质膜型Na+/H+逆向转运蛋白属于同一分支,而与液泡型Na+/H+逆向转运蛋白属于不同的分支;疏水性分析显示AlSOS1基因编码蛋白N-末端具有12个跨膜结构域,C-末端具有一个很长且面向质膜内腔的亲水尾部。这是獐茅SOS1基因编码区首次被完整克隆,将进一步应用于单子叶农作物耐盐性状改良的基因工程之中。
- 王鹤张高华王旭达丰明李怀梅李树英
- 关键词：獐茅耐盐基因CDNA克隆
- 农杆菌介导花生转化体系的优化及转化AlDREB2A基因花生的耐旱性研究被引量：7
- 2018年
- DREB2As是一类可以激活干旱响应基因表达的转录因子。为了提高花生的耐旱性,本研究通过农杆菌介导的转化方式将AlDREB2A转录因子基因导入花生中。同时对影响花生转化的3种因素(烟草提取物添加量、超声波处理时间、抗生素浓度)进行优化。在聚乙二醇的干旱胁迫压力之下,AlDREB2A转基因花生的叶片相对含水量和脯氨酸含量均明显高于非转基因花生,而丙二醛含量低于非转基因花生。在表型方面,转基因花生的萎蔫程度也低于非转基因花生。研究证实,转基因花生比非转基因花生有更高的耐旱性。
- 王旭达于树涛张高华王鹤丰明都兴范范琦于国庆
- 关键词：花生农杆菌转化耐旱性
