米海
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 柯萨奇病毒A组16型VP1蛋白原核表达、纯化及鉴定
- 柯萨奇病毒(Coxsackievirus,CV)可引起呼吸道感染、HFMD、发热性皮疹、疱疹性咽峡炎、及心肌炎、急性弛缓性麻痹和脑炎等疾病，柯萨奇A组16型VP1蛋白（CVA16VP1）是肠道病毒的主要的主要治病病原体。...
- 米海
- 关键词：柯萨奇病毒A组VP1蛋白原核表达
- 文献传递
- 柯萨奇病毒 A 组16型衣壳蛋白 VP1的原核表达被引量：2
- 2014年
- 构建柯萨奇病毒A组16型(CVA16)衣壳蛋白VP1重组质粒pET-41a(+)/VP1,优化诱导表达条件,进行原核表达及蛋白纯化。通过PCR扩增获得VP1基因片段并转进大肠埃希菌E.coli BL21(DE3)内进行表达。从时间、温度、诱导剂浓度三个方面优化表达条件,收集表达菌体,经镍柱和DEAE柱纯化后,用蛋白印迹检测免疫反应性。结果表明,目的蛋白为包涵体,分子质量约为61ku,与设计蛋白分子质量大小相符,以诱导5h、IPTG的浓度为0.20mmoL/L、温度为37℃时蛋白表达量最高。纯化后蛋白纯度达到94%,蛋白印迹检测具有免疫反应性。试验成功获取了柯萨奇病毒A组16型(CVA16)VP1蛋白,且该蛋白具有免疫反应性。
- 王云龙米海李玉林王继创程蕾邓黎黎张春艳孙园园
- 关键词：柯萨奇病毒VP1基因原核表达蛋白纯化
- CYFRA21-1双抗体夹心酶联免疫检测方法的研制被引量：1
- 2014年
- 目的：建立人血清CYFRA21-1双抗体夹心酶联免疫检测方法。方法：以高碘酸钠法标记4株自制的CY-FRA21-1单克隆抗体，从中筛选配对抗体，建立双抗体夹心ELISA检测方法，并对其特异性、稳定性和灵敏度进行评价。结果：在4株单克隆抗体中筛选出1对配对抗体：2 F9株做包被抗体、6 F11株做酶标抗体。以0．50μg/ml的包被浓度、1∶6000的酶标抗体稀释度建立双抗体夹心检测方法。标准曲线在0．7～25 ng/ml范围内成线性关系，相关性为99．08％，最低检测限为0．6668 ng/ml，回收率为98．14％；与血清类似物的交叉性反应低于0．1％；批内（n＝10）、批间（n＝5）精密度分别为6．8％和11．4％，与国外试剂盒检测对比的相关性为91．42％。结论：成功地建立了双抗体夹心ELISA检测人血清CYFRA21-1的方法，为后续的检测试剂盒的生产奠定基础。
- 张慧茹翟晋豫王雪琴刘珍王云龙米海
- 关键词：CYFRA21-1双抗体夹心ELISA肺癌检测试剂盒
