王劼
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：陕西省“13115”科技创新工程陕西省国际科技合作计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人MGC5306基因原核、真核表达载体的构建及亚细胞结构的定位
- MGC5306基因作为一个新发现的基因,目前国内外对其研究的相关报道还非常少。有实验证据表明MGC5306参与卵巢癌的发生。MGC5306的功能及其作用机理现在还不完全清楚。我们利用基因重组技术构建了MGC5306的原核...
- 王劼
- 关键词：融合蛋白亚细胞结构共定位
- 文献传递
- 人SUMO-1基因原核表达、纯化及多克隆抗体制备与鉴定被引量：6
- 2009年
- 目的构建人SUMO-1基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备兔抗人SUMO-1抗血清。方法从质粒pcDNA-HA-SUMO1-GG中用PCR方法克隆到编码人SUMO-1N端97个氨基酸的基因片段,构建了SUMO-1原核表达载体pET41a(+)-SUMO1,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导蛋白表达并利用GST亲和层析柱进行纯化,以纯化后的融合蛋白GST-SUMO1为抗原免疫家兔,获得抗血清。Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清。结果成功构建原核表达载体,纯化到融合蛋白GST-SUMO1,用纯化的融合蛋白免疫家兔制备了多克隆抗体,Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论成功获得了人SUMO-1多克隆抗体,为进一步研究人SUMO-1蛋白的功能奠定了基础。
- 宋振王劼安宁杨振雷鸣郭泽坤
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 人SUMO-2基因原核表达、纯化及多克隆抗体制备被引量：1
- 2008年
- 目的:构建人SUMO-2基因的原核表达载体,纯化融合蛋白GST-SUMO2-SUMO2并以其为抗原免疫家兔,制备人SUMO-2多克隆抗体。方法:用PCR的方法得到人SUMO-2基因并克隆至pET41a(+)原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS诱导融合蛋白GST-SUMO2-SUMO2表达;所获得的可溶性蛋白经亲和层析纯化、SDS-PAGE电泳鉴定后,免疫家兔制备抗血清,分别采用ELISA、Western blot检测抗体效价和特异性。结果:测序证实重组质粒pET41a(+)-SU-MO2-SUMO2构建成功;SDS-PAGE结果证实获得Mr为52000的GST-SUMO2-SUMO2融合蛋白且为可溶性蛋白;经过GST亲和层析有效纯化;以该融合蛋白免疫家兔制备得到的抗血清经Western blot检测证实能与目的蛋白发生特异性结合,ELISA检测为阳性。结论:获得了人SUMO-2蛋白及特异性多克隆抗体,对进一步研究人SUMO-2及SUMO第二类家族的功能提供了有用工具。
- 杨振宋振安宁王劼郭霭光雷鸣郭泽坤
- 关键词：原核表达蛋白纯化抗血清
