任春芝
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
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- 高邮麻鸭白细胞介素-2基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2010年
- [目的]对高邮麻鸭白细胞介素-2(CIL-2)基因进行克隆和序列分析。[方法]以高邮麻鸭外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板,根据已发表的鸭IL-2基因cDNA序列设计并合成1对引物,应用两步RT-PCR技术扩增出IL-2基因的特异性片段。将扩增片段插入pGEM-T-easy载体,并进行测序分析和结果验证。[结果]阳性克隆所含插入片段的DNA序列全长为433bp,与预期大小一致,含有1个423bp大小的开放性阅读框,共编码141个氨基酸的前体蛋白,N端21个氨基酸形成信号肽,成熟蛋白为120个氨基酸,分子量约为13.66kD,含1个糖基化位点。该序列与绿头鸭、绍兴鸭、固始鸭相应序列的同源性均为99.8%,与广州白鸭的同源性为99.3%,存在少量核苷酸差异。[结论]高邮麻鸭IL-2编码区基因相对高度保守,为其用于临床疾病治疗提供了一定参考。
- 陈诚佘步宏任春芝陶建平许金俊
- 关键词：克隆
- 日本大耳白兔干扰素-γ基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2011年
- 提取经ConA刺激后的日本大耳白兔外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR技术对其IFN-γ基因进行扩增和测序。将去除信号肽的IFN-γ基因片段插入原核表达载体pET-30a并在大肠杆菌中进行表达。结果显示,克隆的IFN-γ基因长为504个核苷酸,具有一个完整的开放阅读框,编码168个氨基酸,所测序列与GenBank中已登录的安哥拉兔、中国白兔、欧洲兔、新西兰兔IFN-γ同源性为100%,与獭兔同源性高达99.8%。构建的重组菌经过IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳证实,IFN-γ基因片段在大肠杆菌中得到了融合表达,分子质量约为18 ku,表达量为菌体总蛋白的35%左右。以上结果为下一阶段兔IFN-γ重组蛋白生物学特性及其应用的研究奠定了基础。
- 任春芝季燚刘丹丹李建梅王尚尚陶建平王志强许金俊
- 关键词：日本大耳白兔干扰素-Γ克隆
- 巨型艾美球虫配子体gam82基因的克隆表达与免疫原性分析被引量：5
- 2010年
- 提取巨型艾美球虫(Eimeria maxima)南通株(NT株)配子体总RNA,应用RT-PCR技术对gam82基因进行克隆,并对其核苷酸及氨基酸进行序列分析。结果表明,克隆的基因全长为1791个核苷酸,具有一个完整的开放阅读框,编码596个氨基酸,与GenBank中发表的Houghton株gam82基因同源性为100%。根据对推导的氨基酸序列的二级结构和抗原表位分析的结果,筛选免疫原性良好的区域,命名为gam82-Y,进行原核表达。重组菌经过IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,gam82-Y基因片段在大肠杆菌中得到了融合表达,相对分子质量约为53000。可溶性分析表明,融合蛋白主要以包涵体形式存在。以E.maxima高免血清为一抗进行Western-blot检测,显示重组抗原gam82-Y具有免疫原性。
- 彭昊陶建平许金俊刘丹丹李建梅任春芝
- 关键词：巨型艾美球虫克隆
- 和缓艾美球虫与早熟艾美球虫的分离与鉴定被引量：3
- 2009年
- 采用单卵囊分离技术,获得了2株纯种球虫,鉴定为和缓艾美球虫与早熟艾美球虫。主要鉴定指标:和缓艾美球虫:卵囊呈球形或亚球型,囊壁光滑无色,卵囊内有1极体,无内、外残余体;测100个卵囊的平均大小为(14.96±1.38μm×(13.65±1.20)μm,测100个孢子囊的平均大小为(9.23±1.20)μm×(5.29±0.53)μm;潜在期96h,最短孢子化时间15.5h;虫体主要寄生于小肠下段。早熟艾美球虫:卵囊呈椭圆形或卵圆形,有极体,无内、外残余体;测100个卵囊的平均大小为(19.21±2.10)μm×(16.40±1.75)μm,测100个孢子囊的平均大小为(10.62±0.90)μm×(6.85±0.75)μm;潜在期84h,最短孢子化时间20h;虫体主要寄生于鸡十二指肠与空肠前段。分别用此2株纯种球虫的孢子化卵囊20×104、60×104个感染30日龄黄羽肉鸡各10只,另设1个不感染对照组,结果感染2株纯种球虫的鸡均未发生死亡,但平均增重与不感染对照组差异显著(P<0.05),感染和缓艾美球虫的2组鸡肠道均出现可见病变,感染早熟艾美球虫的2组鸡肠道病变计分为零。
- 李建梅刘丹丹任春芝许金俊陶建平
