赵丽
- 作品数:10 被引量:25H指数:3
- 供职机构:重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金国家科技支撑计划重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 棉鼠SP-D基因的克隆及其在LPS诱导肺损伤模型中的表达分析
- 2016年
- 目的:初步探讨棉鼠肺表面活性蛋白D(surfactant-associated protein D,SP-D)核苷酸和氨基酸序列与其他物种间的同源性和交叉反应性,观察SP-D mRNA水平和SP-D蛋白在棉鼠肺损伤模型中的表达规律,为探究呼吸道疾病发病机制提供科学的实验依据。方法:SPF级棉鼠32只随机分为生理盐水对照组和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)实验组(实验组再按给药后24、48和96 h分为3个亚组,每组8只)。实验组采用腹腔注射给予2 mg/kg的脂多糖,对照组给予相当剂量的生理盐水。提取棉鼠肺总RNA,经RT-PCR扩增SP-D基因并克隆测序,采用生物信息学软件对测序结果进行同源性和系统进化分析;HE染色观察各组棉鼠肺组织病理学变化;real-time PCR检测SP-D mRNA水平;Western blot检测SP-D蛋白表达。结果:棉鼠SP-D基因开放阅读框含1 113 bp,编码370个氨基酸,与部分已知其他物种SP-D核苷酸和氨基酸序列同源性分别在75.64%~90.01%和72.68%~88.56%之间;在SP-D基因构建的系统进化树上,棉鼠与其他啮齿类动物形成一个独特的分支;与对照组相比,实验组肺组织病理特征性变化随LPS刺激时间延长而加剧;SP-D mRNA水平和SP-D蛋白表达水平随LPS处理时间的延长而逐渐增加,在LPS处理24 h后,SP-D mRNA水平和SP-D蛋白表达开始明显增加并出现统计学差异(P〈0.05),48 h时后SP-D mRNA水平和SP-D蛋白表达水平均增加到峰值,96 h后两者仍保持较高水平,与对照组相比有统计学差异(P〈0.01)。结论:棉鼠SP-D核苷酸和氨基酸序列与其他物种间具有较高同源性,且棉鼠和其他物种SP-D蛋白间存在交叉反应性;棉鼠SP-D mRNA水平和SP-D蛋白表达水平在肺损伤模型中均存在时间依赖性,可作为判断肺损伤疾病不同发展阶段的生物标记。
- 冯怡任洛黄道超李娅莎钟海英赵丽
- 关键词:肺表面活性蛋白D克隆脂多糖
- 肝祖细胞移植对四氯化碳诱导急性肝衰竭小鼠模型肝损伤的修复作用被引量:5
- 2015年
- 目的:观察肝祖细胞(HPCs)移植后不同浓度四氯化碳(CCl4)诱导的急性肝衰竭小鼠模型肝脏修复情况,评价HPCs对肝损伤的修复能力,为评估HPCs移植疗效建立理想的肝衰竭模型。方法:96只ICR小鼠随机分为空白对照组、阴性对照组(0.1%CCl4组、0.5%CCl4组、2.0%CCl4组、10.0%CCl4组)和实验组(0.1%CCl4+HPCs组、0.5%CCl4+HPCs组、2.0%CCl4+HPCs组和10.0%CCl4+HPCs组)。空白对照组小鼠灌胃给予生理盐水,阴性对照组和实验组小鼠灌胃给予不同剂量CCl4。CCl4造模后1d,将实验组和阴性对照组小鼠常规麻醉后切开腹腔,实验组小鼠经脾脏注射HPCs,阴性对照组小鼠注射等剂量无菌生理盐水。动态观察小鼠生命体征,监测其存活率;采血检测小鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性;取肝脏计算肝脏指数;HE染色观察各组小鼠肝脏组织病理学变化;Hoechst33342标记外源性HPCs,激光共聚焦显微镜检测移植HPCs在肝脏中的分布情况及肝脏标志蛋白细胞角蛋白18(CK18)和白蛋白(ALB)的表达。结果:与空白对照组比较,0.1%和0.5%CCl4组小鼠存活率、肝脏指数、AST和ALT活性无明显变化(P>0.05)。病理学检测,肝细胞有自我修复作用,HPCs移植治疗的效果不明显。与2.0%CCl4组比较,2.0%CCl4+HPCs组小鼠AST和ALT活性及肝脏指数降低(P<0.01),存活率增加(P<0.01);病理学检测可见肝细胞再生和大量外源性肝细胞,CK18和ALB表达与内源性肝细胞相当,HPCs移植治疗有效。10.0%CCl4组和10.0%CCl4+HPCs组小鼠2d内全部死亡,无法评估HPCs的治疗效果。结论:HPCs移植可提高急性肝衰竭模型小鼠存活率,改善AST和ALT活性,对肝损伤具有较强的修复能力;且2.0%CCl4诱导的ICR小鼠急性肝衰竭模型能有效反映HPCs移植治疗的效果。
- 赵丽黄道超龚梦嘉李娅莎毕杨
- 关键词:四氯化碳急性肝衰竭
- 西酞普兰对APP23小鼠学习记忆及Aβ神经性病变的影响被引量:4
- 2015年
- 目的探讨早期给予低剂量西酞普兰对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆和β淀粉样蛋白(Aβ)病理性变化的影响。方法将5月龄APP23转基因小鼠30只随机分为西酞普兰组和对照组,每组15只。西酞普兰组给予西酞普兰10 mg/kg腹腔注射,对照组腹腔注射等容量的生理盐水,连续3个月。最后一次药物干预后24 h行Morris水迷宫实验,测定小鼠空间学习与记忆能力。水迷宫实验结束后断头取脑,ELISA法检测脑组织中Aβ40和Aβ42水平,免疫组织化学检测老年斑数量,Western blotting检测海马Aβ前体(APP)、β位分解酶1(BACE1)和β-C末端片段(β-CTF)C99/C89的表达水平。结果与对照组比较,西酞普兰组小鼠隐蔽平台逃避潜伏期明显缩短,活动总路径减少,穿越平台次数增加(P<0.05);西酞普兰组小鼠脑组织内Aβ40和Aβ42水平明显低于对照组,老年斑数量明显减少(P<0.05),但APP、BACE1和β-CTF蛋白表达未见明显改变(P>0.05)。结论早期低剂量长疗程给予西酞普兰干预可改善AD小鼠空间学习记忆能力,减轻Aβ神经性病变,其机制可能与西酞普兰上调α分泌酶水平、促进APP在该切割途径代谢增强有关。
- 周维涛黄道超钟海英赵丽
- 关键词:西酞普兰学习记忆阿尔茨海默病
- 过表达CXCR4/CXCR7影响人脐带间充质干细胞迁移和增殖
- 2016年
- 目的探讨SDF-1/CXCR4及SDF-1/CXCR7对人脐带间充质干细胞(h UC-MSCs)迁移和增殖活性的影响。方法用Ad-EASY腺病毒质粒系统分别构建表达CXCR4和CXCR7的重组腺病毒,感染h UC-MSCs后用FCM分别检测细胞膜的CXCR4和CXCR7受体的表达,Transwell法检测细胞迁移,MTT检测h UC-MSCs增殖活性,以及在H2O2诱导细胞毒性作用对细胞存活的影响。结果成功构建表达人源的CXCR4和CXCR7的重组腺病毒,感染后h UC-MSCs细胞膜上的CXCR4/CXCR7受体阳性表达率分别达到93.7%和78.5%(P<0.01),高表达CXCR4和CXCR7均显著增强SDF-1诱导的h UC-MSCs细胞迁移,其中CXCR7效应稍弱;高表达CXCR7而不是CXCR4显著提高SDF-1诱导的h UC-MSCs增殖活性和氧化应激状态下的细胞存活率(P<0.05)。结论 CXCR4/CXCR7均参与介导了SDF-1诱导的h UC-MSCs细胞迁移作用,同时CXCR7还介导了SDF-1诱导的h UC-MSCs增殖和H2O2处理损伤的保护。
- 李娅莎杨珂赵丽谭彬龚梦嘉董世访毕杨
- 关键词:人脐带间充质干细胞细胞迁移细胞增殖
- 肥胖对小鼠肺部炎症和肺功能的影响被引量:3
- 2013年
- 目的:探讨肥胖对小鼠肺部炎症及肺功能的影响。方法:建立肥胖小鼠模型,雄性ICR小鼠母乳喂养21 d离乳,随机分为高脂组与正常组,分别给予高脂与标准饲料喂养150 d。将高脂组中超过正常体质量的10%~20%定义为超重组,超过正常体质量的20%定为肥胖组。进行基础肺功能测定,肺组织HE染色、巨噬细胞特异性标记抗原F4/80免疫组化。结果:(1)肺组织HE染色和免疫组化F4/80示肥胖组支气管周围、肺泡间隔炎性细胞浸润较正常组、超重组明显增多,以巨噬细胞增多为主。(2)肺功能测定显示肥胖组最大吸气流速、最大呼气流速、呼出50%潮气量时呼气流速相对于正常组和超重组无统计学差异(P>0.05)。结论:肥胖可促进肺部炎性细胞浸润,但对通气功能影响较小。
- 叶泽慧黄英肖晓秋刘丹陈笑宜黄道超赵丽
- 关键词:肥胖炎症肺功能
- 低强度聚焦超声通过瞬时受体电位M7促进骨髓间充质干细胞成骨分化
- 2018年
- 目的探讨瞬时受体电位M7(transient receptor potential melastatin 7,Trpm7)在低强度聚焦超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)促进骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化中的作用及其机制。方法分离培养小鼠BMSCs,流式细胞检测其特异性表面标志,茜素红和油红O染色检测其分化能力。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性读数筛选LIPUS作用时间。ALP和茜素红染色观察LIPUS处理后促进成骨分化的能力,q PCR检测Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA水平表达的变化,并检测LIPUS处理后24、48、72 h Trpm7 mRNA水平表达的差异。进一步分为对照组(LIPUS未处理组)、LIPUS处理组、LIPUS+二甲基亚砜(DMSO)组和LIPUS+Trpm7抑制剂2-氨乙基硼酸二苯酯(2-APB)组,ALP活性读数、ALP染色和茜素红染色评价成骨分化能力,Western blot检测Trpm7和OPN、Runx2的蛋白表达。结果体外培养获得BMSCs,与未处理组比较,LIPUS作用2 min组细胞ALP活性读数升高最为明显,LIPUS处理后细胞的ALP染色和茜素红染色明显增强,成骨分化相关基因OPN、OCN、RUNX2 mRNA表达明显增加(P<0.05),LIPUS处理1、2、3 d后Trpm7 mRNA表达显著增加(P<0.05)。LIPUS+2-APB组的ALP活性较LIPUS组和LIPUS+DMSO组明显降低(P<0.05)。与对照组比较,LIPUS组和LIPUS+DMSO组的ALP染色和茜素红染色显示成骨分化明显增加,Trpm7、OPN和Runx2的蛋白表达也明显增强。与LIPUS+DMSO组比较,LIPUS+2-APB组的ALP染色和茜素红染色显示成骨分化明显下降,Trpm7、OPN和Runx2的蛋白表达也明显降低。结论 LIPUS促进BMSCs的成骨分化,并部分通过Trpm7发挥作用。
- 姚欢郑妍李娅莎赵丽杨珂
- 关键词:骨髓间充质干细胞成骨分化
- 3-D多孔结构的小肠黏膜下组织在兔膀胱再生中的应用被引量:1
- 2016年
- 目的探讨3-D多孔结构的小肠黏膜下组织(small intestine submucosa,SIS)在新西兰大白兔膀胱再生中的应用。方法用物理及化学方法制备具有3-D多孔结构的SIS。将24只雄性新西兰大白兔随机分为3组(n=8),分别行膀胱半切术建立膀胱缺损模型,使用3种不同处理的SIS进行膀胱重建。A组:未经过氧乙酸(peroxyacetic acid,PAA)处理的SIS组;B组:PAA处理的SIS组;C组:PAA处理后100%胎牛血清浸润的SIS组。3组在术前及术后4周测定膀胱容量,并于术后4周取材,行大体观察及组织学检测,评估膀胱再生情况。结果应用SIS行兔膀胱重建术后4周,3组再生膀胱组织与周围组织粘连依次降低,结石率分别为33.3%、28.6%、14.31%。与术前自身比较,术后4周3组膀胱最大容量均缩小且依次增加,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。术后组织学检测示3组膀胱上皮细胞均有再生,与A组比较,B、C组的上皮再生更好,边缘区和中心区无明显差异。3组膀胱平滑肌的再生均不理想,但边缘区平滑肌再生较中心区多;在边缘区和中心区,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。3组在边缘区和中心区的再生血管面积依次增加,3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论经PPA及胎牛血清处理后3-D多孔结构的SIS,具有良好的促进膀胱组织再生能力,是一种比较理想的修复支架材料。
- 储加强马文军张德迎龙春兰龚梦嘉赵丽魏光辉张元原
- 关键词:血管化
- 肌肽对小鼠化学性肝损伤氧化应激和炎症因子的影响被引量:9
- 2018年
- 目的研究肌肽(carnosine,CAR)对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_4)诱导的化学性肝损伤小鼠氧化应激和炎症反应的影响。方法 30只ICR小鼠被随机均分为对照组、CCl_4模型组和CAR组。除对照组外,模型组和CAR组均以10 ml/kg剂量的0.2%CCl_4花生油溶液灌胃,建立肝损伤模型。造模后CAR组连续7 d给予300 mg/kg肌肽干预。第8天采血测定各组血清中谷丙转氨酶((alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、白蛋白(albumin,ALB)和谷氨酰转肽酶(glutamyltranspeptidase,GGT)水平,同时HE染色观察肝组织病理变化,ELISA检测超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和谷胱甘肽(glutathion,GSH)及丙二醛(malonaldehyde,MDA)的含量变化,Western blot检测环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和血红素氧合酶1(heineoxygenase-1,HO-1)的表达;RT-PCR检测炎症因子白介素1β(interleukin1β,L-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白介素10(interleukin 10,IL-10)的水平。结果与模型组相比,经肌肽干预后,CAR组小鼠血清中ALT、AST和GGT水平下调明显(t=5.776,P<0.000 1;t=7.443,P<0.000 1;t=4.548,P<0.000 1),ALB水平回升(t=6.061,P<0.000 1),肝功指标明显恢复;氧化应激标记物SOD活性(t=6.818,P<0.000 1)和GSH含量(t=5.739,P<0.000 1)增加,MDA含量得以明显下降(t=6.526,P<0.000 1);氧化/氧合蛋白酶COX-2表达降低(t=5.754,P=0.001),但HO-1表达仍持续上升(t=2.367,P=0.001);炎症因子TNF-α(t=7.025,P<0.000 1)和IL-1β(t=11.963,P<0.000 1)的mRNA水平获得明显下调,IL-10则有明显增加(t=6.074,P<0.000 1)。结论肌肽可通过缓解机体氧化应激状态和影响炎症反应水平来改善和保护CCl_4诱导的化学性肝损伤。
- 聂星黄道超钟海英赵丽
- 关键词:肌肽氧化应激炎症因子肝损伤
- 棉鼠肺表面活性相关蛋白A基因生物信息学分析及其与肺损伤相关性被引量:1
- 2016年
- 目的 分析棉鼠肺表面活性相关蛋白A(SP-A)的基因序列结构和生物信息学特点,观察棉鼠肺损伤模型中SP-A mRNA和蛋白的表达水平,初探SP-A表达规律与肺损伤的相关性。方法 将32只棉鼠随机均分为4组:3个实验组棉鼠分别腹腔注射2mg/kg脂多糖(LPS)处理24、48和96h,对照组腹腔注射等量生理盐水。建模后提取棉鼠肺组织总RNA,经RT-PCR扩增SP-A基因,并对其进行生物信息学分析;组织切片观察LPS作用不同时期肺组织病理学变化;qRT-PCR分析SP-A mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测SP-A蛋白表达。结果 棉鼠SP-A基因编码区长744bp,编码248个氨基酸,具有多个半胱氨酸保守位点、α螺旋结构和糖基化位点,与其他物种相比其核苷酸(75.4%-90.1%)和氨基酸(70.6%-87.1%)序列均具有较高的同源性。在LPS诱导肺损伤模型中发现,与对照组相比,实验组棉鼠肺组织病理学改变随LPS刺激时间延长而加重,具有时间依赖性;SP-A mRNA和蛋白的表达水平在LPS处理24h后开始迅速增加,差异有统计学意义(P〈0.001和P〈0.01),48h时仍持续上升(P〈0.001和P〈0.01),96h时略有下降,但仍保持在较高水平,与对照组相比差异有统计学意义(P〈0.05和P〈0.01)。结论 棉鼠SP-A基因具有高度保守性;棉鼠SP-A mRNA和蛋白的表达水平与肺损伤严重程度密切相关,可反应肺损伤的不同时程。
- 杨守冯怡赵丽黄轶黄道超
- 关键词:肺损伤计算生物学
- BMP9诱导人脐带间充质干细胞体内外成骨分化的作用研究被引量:2
- 2016年
- 目的:探讨人骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)在体内外诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)成骨分化的作用研究。方法:设立Ad-BMP9处理组和Ad-GFP对照组感染h UC-MSCs,两组细胞分别于3天、5天、7天进行ALP活性检测,14天后采用免疫组织化学染色检测骨钙素(Osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(Osteopotin,OPN)的表达情况,21天后茜素红染色检测矿化结节的形成;然后收集不同分组h UCMSC用于裸鼠皮下注射成骨模型的建立,4周后取出离体骨进行Micro-CT扫描和分析,并进行H&E、Masson Trichrome、Alcain Blue染色。结果:BMP9处理组的ALP活性和矿化结节形成明显高于对照组,免疫组化染色结果显示BMP9诱导组的OCN、OPG的阳性表达明显高于对照组;裸鼠皮下注射成骨模型的观察结果显示,空白对照组没有形成肉眼可见的皮下包块,仅感染AdBMP9的h UC-MSCs能生成异位骨,且形成的异位骨骨量明显,骨密度平均值为396.05±0.60;H&E染色结果显示BMP9诱导生成的异位骨中形成部分成熟的骨基质和骨小梁,Masson Trichrome染色结果显示BMP9明显诱导h UC-MSCs的基质矿化作用,Alcain Blue染色结果显示BMP9明显诱导h UC-MSCs的软骨内成骨作用。结论:BMP9成功诱导人脐带间充质干细胞的体内外成骨作用,为临床骨组织工程的细胞疗法提供了明确的可行性。
- 李娅莎刘星毕杨杨珂赵丽龚梦嘉郭绮
- 关键词:人脐带间充质干细胞成骨分化