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利用脂质体法建立转Toll样受体4基因大尾寒羊胎儿成纤维细胞株的研究: 2016年; 利用脂质体转染法获得转Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)基因的成纤维细胞,将其作为供体细胞,再通过体细胞核移植技术构建重构胚,最终生产出转TLR4基因且性别可控的大尾寒羊。本研究通过原代培养大尾寒羊胎儿皮肤成纤维细胞,并进行SRY基因性别鉴定,利用脂质体转染法转入TLR4基因,然后分别从形态学与分子水平检测TLR4基因的表达,将稳定表达转TLR4的成纤维细胞核移植入绵羊去核卵母细胞中构建重构胚。最终获得5个稳定表达TLR4的阳性细胞克隆,经SRY基因性别鉴定为雌性细胞株,通过实时荧光定量PCR分析,在第4代转染的细胞中TLR4表达量最高,比未转染细胞高出7.4816倍(P<0.01),卵裂的重构胚中有EGFP的表达。试验成功构建出含TLR4基因的重构胚,为今后生产出性别可控的抗病转基因绵羊地方新品种奠定基础。; 邢书涵李方舟曹玉桃顾美超倪和民刘云海郭勇; 关键词：大尾寒羊脂质体转染重构胚

程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3基因表达的研究被引量：2: 2017年; 试验旨在研究程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3蛋白的分布及转录水平的差异表达情况,为阐明哺乳动物胚胎在抗冻过程中的相关调控机制提供理论依据。试验选用ICR系雌性小鼠,从妊娠第5天小鼠子宫回收正常孵化囊胚;构建延迟着床模型获取小鼠休眠胚胎,利用激光共聚焦和实时荧光定量PCR技术对各组胚胎进行细胞免疫荧光和C3mRNA相对表达量的检测。结果发现,程序化冷冻前后的正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3在转录和翻译水平均有表达;正常孵化囊胚经冷冻处理后C3mRNA相对表达量显著上调(P<0.05);休眠胚胎冷冻后C3mRNA相对表达量与冷冻前相比显著下调(P<0.05);冷冻前休眠胚胎C3mRNA相对表达量显著高于冷冻前正常孵化囊胚(P<0.05);冷冻后休眠胚胎C3mRNA相对表达量显著低于冷冻后正常孵化囊胚(P<0.05)。结果表明,胚胎中C3基因在转录水平的下调表达对胚胎抗冻具有一定的积极作用,C3基因很可能参与了胚胎抗冻过程的相关调控。; 刘迪倪和民顾美超卢文瑾盛熙晖齐晓龙王相国郭勇; 关键词：小鼠囊胚

程序化冷冻前后小鼠孵化囊胚和休眠胚胎的Hba-α蛋白分布和差异表达被引量：3: 2016年; 目的利用程序化冷冻的方法,探究冷冻前、后小鼠孵化囊胚和休眠胚胎中Hba-α蛋白的分布和差异表达的变化,为今后开发和利用新型哺乳动物源抗冻蛋白提供理论依据。方法从妊娠d5小鼠体内获取孵化囊胚;从小鼠延迟着床模型获取休眠胚胎,利用Confocal显微镜和Western Blot技术对程序化冷冻前、后的各组胚胎进行Hba-α蛋白的分布和表达检测。结果孵化囊胚和休眠胚胎在程序化冷冻前、后均有Hba-α蛋白的表达;孵化囊胚经程序化冷冻后Hba-α蛋白的表达与冷冻前相比差异无显著性(P>0.05);冷冻前休眠胚胎与程序化冷冻前后的孵化囊胚相比,Hba-α蛋白的表达量显著下调(P<0.05);冷冻后休眠胚胎Hba-α蛋白的表达量显著低于其他各组(P<0.05)。结论程序化冷冻处理对小鼠休眠胚胎Hba-α蛋白的表达影响明显大于孵化囊胚;Hba-α基因具有作为新型哺乳动物源抗冻蛋白的潜力。; 刘迪倪和民顾美超李征王力红盛熙晖齐晓龙王相国郭勇; 关键词：小鼠

转TLR4基因的绵羊胎儿成纤维细胞系的建立被引量：2: 2013年; 为了通过脂质体介导的方法获得高效表达目的基因TLR4的绵羊胎儿成纤维细胞作为供体细胞,以便在胚胎移植前的体外筛选过程中确定优越的转基因供体细胞,从而提高体细胞核移植生产抗病转基因绵羊的效率。本研究通过优化脂质体与质粒载体的比例浓度,进而再去转染原代培养的绵羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选,以EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein)作为报告基因,从形态学与分子水平鉴定出已经稳定表达目的基因:Toll样受体4(Toll Like Receptor4,TLR4)基因的细胞系。最终经过筛选与纯化得到3个表达目的基因TLR4的细胞克隆,经RT-PCR与相对荧光定量PCR分析,在第二代转染的细胞中TLR4的表达最高,相对于未转染的绵羊胎儿成纤维细胞升高了9.65倍(P<0.01),并藉此为最终制备抗病转基因羊新品种,从提供稳定表达TLR4基因的转基因供体细胞系角度奠定基础。; 曹玉桃李方舟张全仓顾美超倪和民刘云海郭勇; 关键词：绵羊转基因克隆

冻融后小鼠休眠胚胎超微结构的变化被引量：5: 2014年; 目的从亚细胞超微结构的角度揭示其抗冻能力优于正常孵化胚胎的原因。方法利用透射电子显微镜观察小鼠休眠胚胎与正常孵化期胚胎在细胞连接和各细胞器形态与分布上的差异,以及冻融培养后的变化,并进行相关比较分析。结果通过亚细胞结构对比分析发现:冷冻前小鼠休眠胚胎为紧缩状,处于能量代谢较低的"基态",通过冻融后培养,细胞器结构恢复与正常孵化胚胎冷冻前相似;而正常孵化胚胎经过冻融后,线粒体数量减少,细胞核松散,异染色质增多。结论小鼠休眠胚胎与正常孵化胚胎冻融后相比,其细胞状态更有利于物质储存及能量代谢,表明小鼠休眠胚胎从亚细胞超微结构的角度比其正常孵化胚胎更具抗冻性。; 顾美超卢天罡刘云海倪和民张劭俣翟椿东邢书涵郭勇; 关键词：小鼠超微结构冻融

RhoA重组蛋白在制备提高胚胎抗冻性以及解冻后复苏率的培养液中的应用: 本发明公开了RhoA重组蛋白在制备提高胚胎抗冻性以及解冻后复苏率的培养液中的应用。研究发现，在小鼠正常孵化胚胎的培养液中添加体外重组RhoA蛋白与对照组相比能够显著提高正常孵化胚胎的解冻复苏率。本发明将RhoA重组蛋白首...; 郭勇倪和民刘云海顾美超齐晓龙; 文献传递

经程序化冷冻的小鼠休眠胚胎的基因表达谱差异分析被引量：6: 2012年; 目的探讨小鼠休眠胚胎经程序化冷冻后基因表达谱的变化及相关信号通路的改变趋势。方法采用Affymetrix基因芯片检测小鼠正常休眠胚胎和经程序化冷冻后的休眠胚胎的差异表达基因;采用GO分析和Pathway分析等生物信息学方法进一步了解相关信号通路的改变。结果经程序化冷冻后的小鼠休眠胚胎与正常休眠胚胎相比,存在228个差异表达基因,其中50个基因表达上调,178个基因表达下调。Pathway分析显示黏着斑通路、细胞外基质受体相互作用通路、肌动蛋白细胞骨架调节通路、细胞凋亡通路、细胞通讯通路、泛素介导的蛋白质水解通路、甘油磷脂代谢通路、小细胞肺癌通路、TGF-β信号通路、MAPK信号通路等基因差异表达变化趋势明显。结论小鼠休眠胚胎经程序化冷冻后会导致一系列基因调控变化,并可能影响多条信号通路的协同变化。; 张劭俣刘云海倪和民王灏顾美超阎芃杨菲郭勇; 关键词：小鼠

板栗总苞多酚对奶水牛抗氧化指标及生产性能的影响被引量：4: 2016年; [目的]本试验选用意大利皮尔蒙特大区某规模化养殖场60头奶水牛,研究不同浓度的板栗总苞多酚对奶水牛抗氧化能力及生产性能的影响。[方法]将试验奶水牛随机分为5组(日粮中植物多酚添加剂量为0.1%、0.2%、0.3%,0.4%),每组12头奶水牛,在饲养的第15天和第30天分别取血样,测定抗氧化性能;每周采集一次乳样、连续4周,记录试验牛日产奶量并测定奶水牛乳汁中乳蛋白率、乳脂率、非脂固形物(SNF)及乳糖(L)的含量和体细胞数量。[结果]结果表明,日粮中添加植物多酚水平为0.3%时,可以显著提高奶水牛机体总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力(P<0.05),并可以显著降低血液中过氧化产物丙二醛(MDA)的含量(P<0.05)。同时0.3%组奶水牛产奶量显著高于对照组(P<0.05),体细胞数量显著低于对照组(P<0.05)。[结论]说明在奶水牛饲粮中添加水平为3%的植物多酚可以显著改善奶水牛的抗氧化指标,提高产奶量和乳品质。; 王峰王继彤赵茜熊颖顾美超Laura Gasco郭凯军; 关键词：奶水牛抗氧化指标产奶量乳品质

利用CNCPS优化奶水牛泌乳高峰期日粮的效果评价: 2016年; 康奈尔净碳水化合物和净蛋白质体系(CNCPS)是国际上公认的最权威的反刍动物营养模型之一。为了验证CNCPS预测奶水牛生产性能的准确性和提高生产性能的可能性,本试验选择产奶量、年龄、胎次和体况均相近的地中海奶水牛45头,平均体重为600 kg,泌乳期为产犊后60天左右。将试验牛随机分成3组,对照组为牧场原有的TMR日粮配方,优化组1和2分别是在原有配方的基础上利用CNCPS生成优化配方1和优化配方2。按照CNCPS 6.5分析奶水牛饲料原料营养组分,并研究利用其优化奶水牛泌乳高峰期日粮的效果。结果表明:应用CNCPS体系评价饲料营养组分有助于对奶水牛日粮配方的优化,奶水牛实际产奶量和代谢蛋白或代谢能允许产奶量无显著差异,优化组产奶量高于对照组。CNCPS体系可以用来预测奶水牛产奶量,并能够优化日粮,提高产奶量。; 赵茜王继彤熊颖顾美超Laura Gasco郭凯军; 关键词：奶水牛 CNCPS 产奶量

通过优化超排后合笼时间高效获取小鼠孵化囊胚被引量：2: 2015年; 本试验旨在优化小鼠超排后的合笼时间,高效获取小鼠孵化囊胚。试验选用150只ICR系8周龄雌性小鼠,随机分为5组,同一时间超排处理后雌、雄按1∶1于18∶00、19∶00、20∶00、21∶00合笼过夜,次日上午08∶00查栓,发现阴道栓这为妊娠第1天(D1)。取妊娠第5天(D5)小鼠处死,剪取双侧子宫角,冲取胚胎。统计每组冲取胚胎的总数及孵化囊胚/未孵化囊胚的比值,作为胚胎获取效率的评价指标;统计内细胞团数/滋养外胚层细胞团数,作为评价胚胎质量的参考指标。结果发现,在数量上组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ囊胚数差异不显著(P>0.05),但有增高趋势,组Ⅳ囊胚数显著高于其他3组(P<0.05)。组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ、组Ⅳ内细胞团数/滋养外胚层细胞团数分别为23.18%、23.55%、21.72%和23.28%,各组间差异不显著(P>0.05)。结果表明,组Ⅳ所对应的合笼时间获取小鼠孵化囊胚获取效率最高,胚胎囊胚质量无明显差异。; 翟椿东顾美超刘迪王力红齐晓龙张嘉楠刘云海倪和民郭勇; 关键词：小鼠超数排卵

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