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发酵液中色氨酸含量高通量快速测定被引量：2: 2008年; 为了高通量筛选色氨酸工程菌，利用色氨酸与MAA在酸性条件下产生荧光物质（激发波长253nm，发射波长450nm），荧光强度与色氨酸含量在一定范围内成正比的原理，建立了96孔微孔板中高通量测定发酵液色氨酸含量的方法。反应液80℃反应15min后，测量荧光强度。线性范围为1mg·L^-1～100mg·L^-1，为大规模筛选色氨酸基因工程菌打下了基础。; 于金龙郭长江黄英武徐琪寿; 关键词：色氨酸高通量荧光测定

苯丙氨酸生物合成途径关键基因的串联表达被引量：2: 2012年; 目的:改造大肠杆菌苯丙氨酸生物合成的中心代谢途径,优化关键酶基因pheA、aroF、ppsA、tktA的协同表达,进一步提高苯丙氨酸产量。方法:构建重组质粒pZE12-AFPT,鉴定后通过SDS-PAGE观察其蛋白表达量,并转入缺陷菌大肠杆菌MGΔ中构建工程菌,发酵培养后测量苯丙氨酸产量,与本室保存的重组质粒MGΔpZE12-AF做对比;构建重组质粒pZE21-AF和pZA31-PT,将后者转入感受态pZE12-AF和pZE21-AF中,得到双抗性质粒,并比较转化前后苯丙氨酸的产量。结果:工程菌MGΔpZE12-AFPT的苯丙氨酸产量比对照菌株MGΔpZE12-AF提高了近1.6倍,并且实现了4个串联基因的协同表达;质粒pZA31-PT转入pZE12-AF和pZE21-AF后,苯丙氨酸产量比原质粒pZE12-AF和pZE21-AF分别提高了近0.6倍和2.8倍。结论:实现了4个关键酶基因的串联表达,改造了苯丙氨酸的生物合成途径,使得苯丙氨酸产量有所提高,为进一步得到其高产菌株奠定了基础。; 赵越芦佳黄坤央徐琪寿郭军黄英武; 关键词：苯丙氨酸大肠杆菌甘油

系统生物技术——组学时代的代谢工程: 2007年; 高通量实验技术的广泛应用产生了海量数据,利用生物信息学工具整合这些数据,加深了人们对细菌生理活动规律的认识,系统生物学应运而生。系统生物学的出现使代谢工程从局部通路水平上升到整体水平,代谢工程也因此进入了新的发展阶段——系统生物技术时代。系统生物技术通过整合各个层次组学数据,建立数学模型,或通过比较不同菌株或同一菌株在不同条件下基因组、转录组、蛋白组或代谢组的差异以阐明生命活动规律,在此基础上,对影响表型的靶基因进行改造,得到符合预期的表型。随着新的高通量实验技术的不断运用以及生物信息学的发展,系统生物技术必将取得更大进步。; 于金龙黄英武徐琪寿; 关键词：系统生物技术代谢工程基因组转录组蛋白组

大肠杆菌色氨酸生物合成途径关键酶的调控研究被引量：6: 2008年; 为了通过基因工程手段提高大肠杆菌色氨酸产量,对色氨酸生物合成途径中的关键基因trpR、tnaA、aroG和trpED进行了改造。首先通过敲除trpR基因解除了基因组上色氨酸合成和转运关键酶受到的反馈阻遏调控,进而又敲除了tnaA基因,阻断了色氨酸的分解代谢。然后,将色氨酸合成途径的关键酶aroGfbr和trpEDfbr基因串联表达,以去除色氨酸生物合成途径的瓶颈。与对照MG1655相比,trpR基因单敲菌色氨酸浓度提高了10倍,双敲菌色氨酸浓度提高了约20倍。pZE12-trpEDfbr转入双敲菌后色氨酸浓度提高到168mg/L,而将aroGfbr和trpEDfbr转入双敲菌后,色氨酸浓度提高到820mg/L。为构建色氨酸高产菌奠定了基础。; 于金龙王静李剑欣郭长江黄英武徐琪寿; 关键词：色氨酸

人视黄醇结合蛋白基因的高效表达及其专用引物: 本发明公开了一种人视黄醇结合蛋白的基因高效表达方式及其专用引物，其方法为：(1)从人肝组织中提取总RNA；(2)合成上游引物P1：5’TTTGAATTCATATGGAGCGCTACTGCCGAGTGAG3’；下游引物P2...; 徐琪寿梁学颖黄英武刘云刘志红刘耀清; 文献传递

人视黄醇结合蛋白基因的高效表达及其专用引物: 本发明公开了一种人视黄醇结合蛋白的基因高效表达方式及其专用引物,其方式为:(1)从人肝组织中提取总RNA;(2)合成引物;(3)通过逆转录聚合酶链式反应得到人视黄醇结合蛋白基因片段;(4)将基因克隆入pET3a、pET2...; 徐琪寿梁学颖黄英武刘云刘志红刘耀清; 文献传递

人视黄醇结合蛋白在大肠杆菌中的高效表达及其活性测定被引量：9: 2000年; Retinol\|binding protein(RBP)is the transport protein of vitamin A and is one of the members in the family of proteins which may all bind small hydrophobic molecules.In order to study the structure\|function relationship of RBP,the plasmid pET3a\|RBP was constructed,and RBP was expressed in E.coli Bl21(DE3)successfully.The expressed protein,with molecular weight of about 21 kD,was about 36.95 percent of the total bacteria protein as detected by SDS\|PAGE and densitometry analysis.Then the production was confirmed by probing Western blot of E.coli lysate separated on SDS\|PAGE with antisera against hRBP.In succession,the fluorescence enhancement properties and shift in absorption spectrum had also confirmed the production’s functional characteristics.It could bind ROH in ratio of 1∶1 and K d=1.5×10 -7 mol/L.; 梁学颖黄英武刘云刘志红王洪徐琪寿public.east.cn.net; 关键词：视黄醇结合蛋白大肠杆菌基因表达生物活性

产L-苯丙氨酸工程菌的构建及不同碳源对其产量的影响: 2012年; 目的构建L-苯丙氨酸高产工程菌株,并比较甘油和葡萄糖两种碳源对工程菌产L-苯丙氨酸的影响。方法 PCR克隆glpK基因,改变其核糖体结合位点(RBS)序列,分别与载体pZE12-AF连接,得到pZE12-AF-RBSⅠ-glpK和pZE12-AF-RBSⅡ-glpK两个重组质粒,再将它们分别导入E.coli MG△观察其SDS-PAGE蛋白电泳;采用HPLC法检测在不同碳源中L-苯丙氨酸的产量。结果工程菌E.coli MG△pZE12-AF-RBSⅠ-glpK中甘油激酶表达量较工程菌E.coli MG△pZE12-AF-RBSⅡ-glpK有所提高;以甘油为碳源时,工程菌E.coli MG△pZE12-AF-RBSⅡ-glpK的L-苯丙氨酸产量分别是工程菌E.coli MG△pZE12-AF-RBSⅠ-glpK的14.16倍,工程菌E.coli MG△pZE12-AF的3.18倍,E.coli MG△的63.31倍。以甘油为碳源时,工程菌苯丙氨酸产量高于以葡萄糖为碳源时的苯丙氨酸产量。结论 RBS的改变和glpK基因的表达有利于苯丙氨酸产量的提高,甘油较葡萄糖更适宜作为工程菌生长的碳源。; 黄坤央芦佳赵越徐琪寿黄英武; 关键词：L-苯丙氨酸发酵聚合酶链反应

中国人视黄醇结合蛋白cDNA的克隆与序列分析被引量：1: 1999年; 目的：　为了进行中国人视黄醇结合蛋白（ｈｕｍａｎｒｅｔｉｎｏｌ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏ－ｔｅｉｎ，ｈＲＢＰ）的原核表达，克隆出ｈＲＢＰ的ｃＤＮＡ。　方法：　利用反转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法获得ｈＲＢＰ的ｃＤＮＡ，克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体后，在美国ＡＢＩＤＮＡ自动测序仪上以双脱氧法进行核苷酸序列测定。结果：　扩增出了约０．５８ｋｂ的特异片段，并筛选出阳性重组克隆质粒ｐＧＥＭ－ＲＢＰ，核苷酸序列测定表明其含有一段５８０个碱基的插入片段，与文献报道的一致。结论：　我们已获得了中国人ＲＢＰ的ｃＤＮＡ，可用于进行原核表达。; 梁学颖黄英武刘云刘志红刘耀清徐琪寿; 关键词：视黄醇结合蛋白 RT-PCR 测序克隆 CDNA

苯丙氨酸生物合成关键酶基因pheA与aroF协同表达: 2012年; 目的:优化L-苯丙氨酸生物合成通路上的关键酶基因pheA、aroF的蛋白表达,构建高产L-苯丙氨酸的工程菌株。方法:通过设计酶基因的间隔调控序列,分别构建重组质粒pZE12-RBS-AF和pZE12-AF,SDS-PAGE观察蛋白表达量,转入营养缺陷菌MGΔ中构建工程菌,并发酵培养。结果:工程菌MGΔpZE12-AF苯丙氨酸的产量比工程菌MGΔpZE12-RBS-AF高1倍,实现了L-苯丙氨酸生物合成关键酶基因pheA和aroF协同,匹配表达。结论:调整串联酶基因之间的间隔调控序列可实现苯丙氨酸合成酶基因的协同表达,提供了一种新的提高苯丙氨酸工程菌产量的方法。; 芦佳黄坤央赵越徐琪寿郭军黄英武; 关键词：L-苯丙氨酸

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黄英武

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