蒲勤
- 作品数：63 被引量：283H指数：9
- 供职机构：天水市第四人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高等学校骨干教师资助计划军队杰出人才基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学语言文字化学工程更多>>
- 人牙周膜成纤维细胞与牙龈成纤维细胞差异表达一条新基因的克隆被引量：4
- 2000年
- 目的 :克隆人牙周膜成纤维细胞 (periodontalligamentfibroblast,PDLF)与牙龈成纤维细胞 (gin givalfibroblast,GF)差异表达的新基因。方法 :采用基于PCR和消减杂交的基因克隆技术构建体外培养的人PDLF与GF差异表达基因的扣除文库 ,采用酶切和反向杂交的方法筛选目的克隆 ,并进行测序和计算机分析。结果 :从构建的人PDLF与GF细胞差异表达基因的扣除文库中筛选到 818bp新基因。结论
- 郭希民吴补领肖明振蒲勤赵忠良
- 关键词：牙周膜成纤维细胞牙龈成纤维细胞基因克隆
- 简化提取核心蛋白聚糖的方法及扩大活性检测范围被引量：2
- 2001年
- 目的简化分离、纯化核心蛋白聚糖的程序 ,了解其对瘤细胞生长的抑制作用。方法经匀浆、溶解沉淀、透析、研磨等步骤制备核心蛋白聚糖 ,MTT染料结合法检测A5 49、BT32 5等四种癌细胞体外生物学活性。结果简化法制备的核心蛋白聚糖得率为 3mg/g大鼠肌肉 ,SDS PAGE显示在相对分子质量 36～ 38kD间有两条带 ,除明显抑制A5 49生长外 ,对Hela、胃 790 1及BT32 5三者同样具有抑制生长活性 ,抑制率依次为 6 9.19%、48.19%、5 4.47%、6 7.80 %。结论此法成本低、纯度好。
- 王国华陈志阳王晓锁蒲勤药立波
- 关键词：核心蛋白聚糖癌细胞株活性检测
- 人骨形成蛋白-3成熟肽cDNA的扩增、克隆和序列测定
- 1997年
- 骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)作为TGF-β超家族成员,可以诱导未分化的间质细胞向软骨细胞分化,然后通过软骨内成骨形成骨组织,对难治性骨折的愈合及各种骨缺损的修复有明显的促进作用。另外,BMP在胚胎发生和神经发育过程中也起重要作用。但是由于BMP在骨组织中含量甚微,提取方法繁琐,故不能满足临床应用和基础研究需要,随着人BMP(hBMP)1～13 cDNA基因的克隆,人们已在COS。
- 朱帮福蒲勤张俊杰陈南春陈苏民
- 关键词：成熟肽大肠杆菌中表达CDNA文库胚胎发生
- 用消减杂交技术克隆人成骨样细胞机械牵张力敏感基因的研究被引量：2
- 2004年
- 目的 对人成骨样细胞机械牵张力敏感基因进行克隆研究。方法 对人成骨样细胞Saos_2进行二维方向上的加载 ,变形幅度为 12 % ,牵拉频率为 6周期 分钟 ,加载 12h后分别提取牵张力作用后Saos_2细胞及未作处理的正常Saos_2对照细胞的mRNA ,反转录制备cDNA ,将cDNA进行消减杂交 ,构建加载细胞与未加载细胞的差异表达基因的扣除cDNA文库 ,克隆后进行序列测定。结果 克隆到的基因片段中 ,功能已知基因片段 15个 ,功能未知基因片段 2个 ,其中牵张力敏感基因 1(SSG1)位于 9号染色体上 ,功能未知 ;牵张力敏感基因 2 (SSG2 )位于 18号染色体上 ,与转录因子 2 ,4高度同源。结论 用消减杂交技术可以对人成骨细胞样机械牵张力敏感基因进行有效的克隆研究。
- 冯雪丁寅段银钟林珠欧阳为明蒲勤
- 关键词：消减杂交基因克隆成骨细胞机械牵张力
- 论《傅青主女科》对月经经期的调节
- 本文对《傅青主女科》调经篇中月经经期调节的理、法、药进行了探索，就清肝肾之虚火与补肝肾之经血在调理月经经期错乱上的灵活应用予以探讨，进而加深对傅氏调经思想的理解。
- 蒲勤
- 关键词：中医妇科学《傅青主女科》中药治疗
- pcDNA_3-hBMP_2基因转染成纤维细胞及其稳定表达被引量：12
- 2001年
- 目的 探讨外源性hBMP2 基因在成纤维细胞获得稳定表达的可行性。 方法 将hBMP2 的cDNA连入真核表达载体pcDNA3 ,形成重组真核表达载体pcDNA3 hBMP2 ,在脂质体介导下 ,将其导入小鼠成纤维细胞株 (NIH3T3)。通过G418筛选获得阳性克隆 ,并继续培养 4周 ,然后用原位杂交和免疫组织化学方法检测BMP2 基因在成纤维细胞NIH3T3内的稳定表达情况。 结果 经原位杂交和免疫组织化学证实 ,转染pcDNA3 hBMP2 后的成纤维细胞NIH3T3内有大量hBMP2 mRNA的转录和蛋白的表达。 结论 在脂质体介导下 ,hBMP2
- 栗向东胡蕴玉蒲勤朱邦福
- 关键词：骨缺损基因表达成纤维细胞基因转染基因治疗
- 人牙髓细胞与牙龈成纤维细胞差异表达基因的克隆及特征分析被引量：1
- 2007年
- 目的批量克隆人牙髓细胞(HDPC)与人牙龈成纤维细胞(HGF)的差异表达基因并对其特征进行分析,研究HDPC的生物学特性。方法体外培养HDPC和HGF,应用基于PCR的改良消减杂交技术构建HDPC和HGF的cDNA消减文库,批量克隆HDPC和HGF的差异表达基因并测序,使用GenBank的BLAST对测序结果进行同源序列比较。结果经过序列测定,获得12个差异表达基因的序列,经BLAST分析有2个为未知基因。在已知基因中,含有4个与细胞信号转导机制相关的基因;2个与细胞转运机制相关的基因(包括细胞膜及细胞核膜转运);2个与细胞RNA剪接机制相关的基因。结论HDPC的生物学特性是由某些特定基因的差异表达所决定的,其生长、分化机制可能与相对旺盛的蛋白合成及分泌活性相关。
- 王忠东吴纪楠周琳凌均棨郭希民肖明振朱峰蒲勤柴玉波赵忠良
- 关键词：牙髓细胞牙龈成纤维细胞消减文库
- srhBMP2m、Dex对体外状态下新西兰白兔MSC增殖的影响
- 2003年
- 目的 观察可溶性重组人骨形态发生蛋白2成熟肽(srhBMP2m)和地塞米松(Dex)对体外状态下新西兰白兔骨髓基质细胞(MSC)增殖的影响。方法 经过12d原代培养后将MSC传代再培养5d，用胰蛋白酶消化后将其定量(2×10^3个／孔)接种于96孔板中，按实验要求分别加入不同浓度的上述两种因子，分别在第7天和第3天用MTT法和^3H—TdR掺入法检测细胞的增殖情况。结果 MTT法检测当srhBMP2m浓度≥1200ng／ml时抑制MSC增殖(P<0．05或P<0．01)；^3H—TdR掺入法检测当srhBMP2m的浓度超过1600ng／ml时方才显示对MSC增殖的抑制作用(P<0．05)；两种检测方法均显示当Dex浓度≥10^-7M时明显抑制MSC增殖(P<0．05或P<0．01)。结论 体外状态下高浓度的srhBMP2m和Dex明显抑制MSC增殖，本研究为应用两种因子刺激MSC成骨提供了实验资料。
- 刘丹平栗刚蒲勤郑振家胡蕴玉张男郭韬
- 关键词：DEX新西兰白兔MSC地塞米松骨髓基质细胞细胞增殖
- 昆虫杆状病毒表达系统中人骨形成蛋白3的表达及鉴定被引量：6
- 2000年
- 目的 探索人骨形成蛋白 3(h BMP3)在昆虫杆状病毒系统中的表达规律 .方法 将 h BMP3全长 c DNA克隆入转移载体 Bac PK8中 ,酶切鉴定后 ,将此载体与病毒 DNA经脂质体包裹转染昆虫细胞 ,重组病毒经蓝白筛选后 ,提取其DNA进行 PCR反应 ,鉴定目的基因 .收集重组病毒感染 5 d的细胞进行免疫荧光及电子显微镜观察 .结果 克隆了目的基因的重组载体经内切酶消化后 ,琼脂糖电泳示有相应大小的目的基因片段切下 .PCR电泳结果见有目的基因片段的扩增 .免疫荧光检测见阳性颗粒分布在昆虫细胞的胞质及胞膜 ,电镜下见重组病毒无多角体颗粒 ,与野生型杆状病毒完全不同 .结论 初步证实 h
- 卢兹凡陈苏民陈南春高磊路凡蒲勤
- 关键词：杆状病毒骨形成蛋白蛋白表达
- 人骨形成蛋白-3成熟肽cDNA的克隆、测序及表达被引量：6
- 1998年
- 目的：扩增、克隆人骨形成蛋白－３（ｈＢＭＰ－３）成熟肽ｃＤＮＡ基因，利用大肠杆菌表达ｈＢＭＰ－３成熟肽．方法：ＰＣＲ方法扩增ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，双脱氧终止法测序正确后，克隆入大肠杆菌表达载体ｐＤＨ，受控于ＰＲＰＬ启动子，重组质粒ｐＤＨＢ－３ｍ以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主菌在４２℃进行温度诱导．结果：扩增出ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，序列测定完全正确；含重组质粒ｐＤＨ－Ｂ３ｍ的工程菌诱导后在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新生蛋白带，分子质量为１４．５ｋｕ，与预期ｈＢＭＰ－３成熟肽分子量大小一致，约占菌体总蛋白的２８％．结论：成功扩增、克隆ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因。
- 朱帮福蒲勤陈苏民陈南春张俊杰卢滋凡余清
- 关键词：基因克隆基因表达
