宋虎
- 作品数：12 被引量：46H指数：5
- 供职机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划卫生部卫生公益性行业科研专项公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 微小RNA-137调控Notch1基因介导自噬在肝癌细胞增殖和迁移中的作用被引量：4
- 2018年
- 目的探讨微小RNA-137（miR-137）调控Notchl基因并介导自噬对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法体外培养人SMMC7721肝癌细胞系，用miR-137模拟物、miR-137抑制物以及Notchl基因的干扰RNA（siRNA）转染细胞，分为正常对照组（NC组）、miR-137模拟物组、miR-137抑制物组、NotchlsiRNA组。采用实时定量-PCR（RT—PCR）检测SMMC7721细胞转染后miR-137与NotchlmRNA的表达。细胞迁移实验（Transwell）分析miR-137及Notchl基因对SMMC7721细胞迁移侵袭的影响。细胞免疫组化观察SMMC7721细胞B-链蛋白（13-catenin）和波形蛋白（vimentin）的表达情况，自噬双标腺病毒检测SMMC7721细胞自噬体个数的变化。采用蛋白印迹法（Westernblot）检测Notchl基因、上皮型钙黏蛋白（E-Cadherin）、神经型钙黏蛋白（N—Cadherin）、vimentin、选择性自噬接头蛋白（P62）及微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达。结果实时荧光定量PCR（RT—PCR）结果显示miR-137抑制物组Notchl基因的相对表达含量（5．71±0．45）明显高于miR-137模拟物组（0．21±0．06），差异有统计学意义（P〈0．05）。Transwell实验显示miR-137模拟物组（66．00±4．55）和NotchlsiRNA组（88．00±6．78）肝癌细胞侵袭转移的个数较miR-137抑制物组（515．00±35．12）明显降低（P〈0．05）。细胞组化检测显示miR-137模拟物组及NotchlsiRNA组B—catenin表达明显增加且vimentin表达明显下降（P〈0．05）。自噬双标腺病毒检测结果显示miR-137模拟物组自噬体数量（5．50±3．70）明显低于miR-137抑制物组（32．75±4．11），差异有统计学意义（P〈0．05）。Westernblot检测显示，与miR-137抑制物组、NC组比较，miR-137模拟物组Notchl基因、N—Cadherin、vimentin和LC3表达水平明显降低，E—Cadherin、P62表达水平明显增高。NotchlsiRNA组Notchl基因、N-Cadherin、LC3表达水平明显低于NC组，E—Cadherin、P62表达水平明显高于NC�
- 宋虎张建军李世朋王振杜晨阳郑虹沈中阳
- 关键词：肝细胞癌自噬
- miRNA-30a-3p下调Atg3介导的自噬抑制肝癌细胞侵袭和转移被引量：11
- 2018年
- 目的探讨miRNA-30a-3p通过靶向作用自噬相关蛋白3（Atg3）介导的自噬通路，对肝癌细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法利用免疫组化检测人肝癌肝组织中miRNA-30a-3p、Atg3含量及其相关性：体外培养肝癌细胞，模拟饥饿环境诱导自噬，LC3自噬双标腺病毒转染肝癌细胞以检测自噬体形成情况。蛋白印迹实验（Western blot）检测自噬相关蛋白[自噬相关蛋白3（Atg3）、泛素结合蛋白（p62）、自噬微管相关蛋白轻链3（LC3）]和上皮-间充质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）相关蛋白[钙黏附分子N（N—cadherin）、波形蛋白（vimentin）、snail蛋白、胞质紧密粘连蛋白1（ZO-1）]表达水平。CCK-8试剂盒检测肝癌细胞活性。结果促进肝癌细胞中miRNA-30a-3p表达，可降低Atg3、LC3表达、增加p62表达，抑制自噬体形成；反之，可增加Atg3、LC3表达、降低p62表达，促进自噬体形成。抑制A邸表达，可使EMT相关蛋白表达降低。抑制miRNA-30a-3p表达，肝癌活性细胞数量在各个时间点呈升高趋势（F1=10．314，P〈0．05）；而抑制miRNA-30a-3p表达的同时抑制Atg3表达，肝癌活性细胞数量在各个时间点呈下降趋势（F2=6．599，P〈0．05）。结论miRNA-30a-3p能抑制Atg3介导的自噬通路，降低细胞自噬活性，从而抑制肝癌细胞增殖、侵袭和转移。
- 杜晨阳张建军王振宋虎李世朋张海明郑虹沈中阳
- 关键词：微RNAS肿瘤转移
- 细胞焦亡的研究进展被引量：8
- 2018年
- 细胞焦亡(pyroptosis)是促炎形式的程序性细胞死亡,并且依赖于半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(caspases)活性。由caspases通过切割gasermin D(GSDMD)的氨基端和羧基端的连接体调控,后者移位到膜上并穿孔,诱导水分渗透,细胞肿胀并释放炎性因子,继而发生细胞焦亡。细胞焦亡的形态学特征、发生及调控机制等均不同于凋亡、坏死等其他细胞死亡方式,其是机体一种重要的天然免疫反应,在抗击感染以及疾病中均有重要作用。通过对细胞焦亡的更深入研究,可以认知其在相关疾病中的作用,为临床提供新的治疗思路。
- 王星星宋虎杜晨阳王振张建军
- 关键词：半胱氨酸内肽酶类细胞死亡
- FOXO3a调控线粒体自噬在肝脏缺血再灌注损伤中的作用被引量：5
- 2017年
- 目的探讨转录因子FOXO3a调控线粒体自噬对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为Sham组(只模拟开腹手术不夹闭)和再灌注(IR)2、6、12、24 h组,每组6只,建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型。血生化检测各组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)变化,HE染色及TUNEL法观察肝组织损伤及细胞凋亡情况,Western blot及q RT-PCR检测各组细胞中转录因子FOXO3a、线粒体自噬相关蛋白Nix蛋白及其mRNA表达水平。培养小鼠肝AML12细胞,用FOXO3a和Nix干扰RNA处理细胞建立缺氧1.5 h复氧6 h的模型,分为siRNA-NC组(加入10μL siRNA空载对照转染细胞)、FOXO3a siRNA组(加入10μL FOXO3a siRNA转染细胞)以及Nix siRNA组(加入10μL Nix siRNA转染细胞)。MTT法检测各组细胞活力,共聚焦显微镜观察各组细胞内自噬体的数量与分布,Western blot检测FOXO3a、Nix、微管相关蛋白LC3、凋亡蛋白P62及Caspase-3的表达情况。结果 IR各组ALT、AST均明显升高,且再灌注6 h时达到峰值(P<0.05)。HE及TUNEL结果示再灌注6 h时小鼠肝组织损伤以及细胞凋亡最严重。IR各组FOXO3a及Nix的mRNA相对表达量均高于Sham组,且再灌注12 h时FOXO3a的mRNA表达量最高,再灌注6 h时Nix的mRNA表达量最高(P<0.05)。Western blot示再灌注12 h时FOXO3a相对表达水平最高,再灌注6 h时Nix、Caspase-3、LC3Ⅱ相对表达水平最高。干扰FOXO3a的表达后,MTT显示FOXO3a siRNA组细胞存活率降低(P<0.05);Western blot检测显示siRNA-NC组FOXO3a表达水平高于FOXO3a siRNA组,Nix、Caspase-3、LC3Ⅱ表达水平明显低于FOXO3a siRNA组(P<0.05)。共聚焦显微镜观察示siRNA-NC组细胞内自噬体的数量低于FOXO3a siRNA组。干扰Nix的表达后,MTT显示Nix siRNA组细胞存活率升高(P<0.05);Western blot检测显示siRNA-NC组Nix、P62、LC3Ⅱ表达水平高于Nix siRNA组,而FOXO3a表达水平低于Nix siRNA组(P<0.05)。结论 FOXO3a可减轻小鼠肝缺血再灌注损伤,其机
- 宋虎张建军王振杜晨阳郑虹沈中阳
- 关键词：FOX03A缺血再灌注损伤凋亡
- miRNA-30a-3p通过调控Caspase1介导的焦亡抑制肝癌细胞增殖和转移被引量：9
- 2018年
- 目的探讨miRNA-30a-3p通过靶向作用Caspase1介导的焦亡，抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和转移。方法利用qRT-PCR和免疫组化染色检测肝癌组织中miR-30a-3p和Caspase1的表达。用肝癌细胞SMMC-7721转染miR-30a-3p激动剂、抑制剂及Caspase1特异性抑制剂。Westernblot检测EMT（epithelialmesenchymaltransition）相关蛋白（N-cadherin、vimentin、snail、MMP．2）和Caspase1、IL-18和IL-1β蛋白表达量。平板克隆、CCK-8和Transwell实验检测肝癌细胞增殖、转移能力。结果肝癌组织中Caspase1高表达（t=17．54，P〈0．05）。过表达miR-30a-3p能抑制肝癌细胞增殖和转移能力，而抑制miR-30a-1β表达可提高肝癌细胞增殖和转移能力。过表达miR030a-3p可降低Caspase1表达（t=12．73，P〈0．05），抑制焦亡诱导，进而抑制炎症介质IL-18（t=3．51，P〈0．05）和IL-1β（t=7．32，P〈0．05）表达。抑制miRNA-30a-3p表达，活性肝癌细胞数量增加（Ft=9．57，P〈0．05）；而miRNA-30a-3p和Caspase1联合抑制活性肝癌细胞数量则减少（-=10．66，P〈0．05）。结论Caspase1在肝癌组织中高表达，miRNA-30a-3p通过作用Caspase1通路以调节细胞焦亡，进而抑制肝癌细胞增殖侵袭和转移。
- 杜晨阳宋虎王星星王振张建军
- 关键词：肝细胞微RNAS肿瘤转移
- 干扰素调节因子1调控线粒体自噬参与小鼠肝缺血再灌注损伤被引量：1
- 2016年
- 【摘要】目的探讨干扰素调节因子-1（IRF-1）调控线粒体自噬对小鼠肝缺血再灌注损伤的影响。方法选择健康雄性C57BL／6小鼠建立活体小鼠肝缺血再灌注损伤模型，用随机数字表法分为假手术组（sham）和缺血再灌注组（IR），每组6只。血生化检测两组小鼠血清ALT、AST变化，罗丹明123染色（Rhodamine123）法检测肝细胞线粒体损伤情况，HE染色观察肝组织病理学改变，TUNEL法检测肝细胞凋亡情况。Westernblot检测IRF-1、Nix、LC3和Caspase-3蛋白表达。AML12细胞系建立离体肝细胞缺血再灌注损伤模型，分为siRNA-NC组和siIRF-1组。PI染色法检测AMLl2细胞凋亡情况，免疫荧光观察AML12细胞内自噬体形成情况，Westernblot检测IRF-1、Nix、LC3和Bax蛋白表达。结果与假手术组比较，缺血再灌注组小鼠血清ALT、AST明显升高（P〈0．0001）；罗丹明123染色法见缺血再灌注组线粒体膜电位明显下降，线粒体损伤严重；病理学检查见缺血再灌注组肝细胞肿胀、脂肪变性，肝窦狭窄，中性粒细胞浸润和片状坏死，肝组织结构破坏严重；TUNEL法检测见IR组肝细胞凋亡率明显增高（P〈0．0001）；Westernblot检测显示，缺血再灌注组IRF-1、Caspase-3蛋白表达水平明显高于假手术组，Nix、LC3Ⅱ表达水平明显低于假手术组。PI染色法示，SiRNA-NC组细胞凋亡率明显高于siIRF-1组（P〈0．0001）。免疫荧光示SiRNA-NC组细胞内自噬体个数明显低于siIRF-1组（P〈0．0001）；Westernblot检测显示SiRNA-NC组IRF-1、Bax蛋白表达水平明显高于siIRF-1组，Nix、LC3Ⅱ表达水平明显低于siIRF-1组。结论IRF-1加重小鼠肝缺血再灌注损伤，其机制可能与IRF-1抑制线粒体自噬，促进肝细胞凋亡有关。抑制IRF-1表达能够提高线粒体自噬，对肝缺血再灌注起到保护作用。
- 王振李世朋于瑶何金丹杜晨阳宋虎张海明张建军
- 关键词：干扰素调节因子-1缺血再灌注损伤
- 微小RNA-375调控自噬抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖和转移
- 2018年
- 目的探讨微小RNA-375(miR-375)通过调控自噬相关蛋白(Atg)14介导的自噬对肝癌细胞(SMMC-7721)增殖和转移能力的影响。方法将SMMC-7721细胞分别用miR-375模拟物、抑制物以及Atg14的干扰RNA处理,并建立缺氧1 h复氧6 h的模型,分为miR-375 NC组、miR-375 mimics组、miR-375 inhibitor组以及siRNA NC组、Atg14 siRNA组、miR-375+Atg14 siRNA组。TargetScan预测miR-375与Atg14基因相关性。荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-375 NC组、miR-375 mimics组、miR-375 inhibitor组miR-375、Atg14 m RNA相对表达量。免疫细胞化学染色检测3组细胞内N-钙黏素(N-Cadherin)和β-连环蛋白(β-catenin)表达分布情况。绿色荧光蛋白-红色荧光蛋白-轻链(mGFP-RFP-LC3)自噬双标腺病毒转染3组细胞,荧光显微镜下观察自噬体形成情况。平板克隆检测肝癌细胞增殖情况。Western blot检测Atg14、泛素结合蛋白(P62)、轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、酵母Atg6同源物(Beclin1)、N-Cadherin、β-catenin和波形蛋白(Vimentin)表达情况。结果 miR-375与Atg14基因相关性较高,qRT-PCR显示过表达miR-375能抑制Atg14 mRNA表达;反之能促进Atg14 mRNA表达。过表达miR-375能抑制肝癌细胞内N-Cadherin表达、提高β-catenin表达水平,抑制肝癌细胞增殖能力(P<0.01);而抑制miR-375表达能促进N-Cadherin表达、降低β-catenin表达水平,提高肝癌细胞增殖能力(P<0.01)。过表达miR-375能抑制Atg14、LC3Ⅱ、Beclin1表达,促进P62表达(P<0.01);反之能促进Atg14、LC3Ⅱ、Beclin1表达,抑制P62表达(P<0.01)。荧光显微镜下观察到过表达miR-375可抑制自噬体形成,而抑制miR-375表达能促进自噬体形成(P<0.01)。干扰Atg14表达后可增强miR-375对肝癌细胞增殖、转移能力的抑制作用(P<0.01)。结论激活miR-375能抑制肝癌细胞增殖和转移,而抑制miR-375能促进肝癌细胞增殖和转移,其机制可能与miR-375通过靶向调控Atg14抑制自噬,从而抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖和转移有�
- 王星星宋虎杜晨阳王振张建军沈中阳
- 关键词：自噬微RNAS细胞增殖肿瘤转移
- NOD1激活细胞凋亡促进小鼠肝脏缺血再灌注损伤被引量：1
- 2019年
- 目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域1(NOD1)调控肝细胞凋亡对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法建立缺血再灌注损伤动物模型,选择健康、雄性、清洁级C57 BL小鼠30只,完全随机法分为假手术组和缺血再灌注组(IR2 h、6 h、12 h、24 h),每组6只。血生化检测每组小鼠血清ALT、AST水平,采用HE染色及原位末端标记法(TUNEL法)观察肝脏病理学改变及肝细胞凋亡情况,免疫组化检测各组肝组织NOD1的表达与分布,蛋白质印迹(Western blot)检测NOD1、AIM2、pro-Capase-1、active-Caspase-1的表达情况,在AML12细胞中转染NOD1 siRNA及空载对照siRNA,建立细胞缺氧/复氧模型并收集细胞检测NOD1、AIM2、active-Caspase-1表达。结果IR各组的ALT、AST均比假手术组高,且在IR12 h时达到峰值(P<0.05)。病理检查结果显示再灌注12 h时肝损伤最重,TUNEL结果显示再灌注12 h时凋亡细胞数最多。免疫组化结果显示12 h时NOD1表达最多。Western blot显示再灌注12 h时后NOD1的蛋白表达最高。随着再灌注时间的延长,AIM2、active-Caspase-1的表达逐渐增多,pro-Caspase-1的表达逐渐减少。AML12细胞转染NOD1 siRNA后,NOD1、AIM2及active-Caspase-1表达减少。结论NOD1促进肝脏缺血再灌注损伤,这可能与NOD1通过激活细胞凋亡促进肝脏损伤有关。
- 希吉日宋虎王星星李世朋杨爽蔡金贞沈中阳
- 关键词：再灌注损伤肝脏细胞凋亡
- 微小RNA-182-5p调控焦亡参与肝缺血再灌注损伤
- 2018年
- 目的探讨微小RNA-182-5p(miR-182-5p)靶向调控叉形头转录因子O亚型3a(FoxO3a)调节焦亡对肝缺血再灌注损伤的影响。方法建立小鼠肝脏缺血再灌注模型。按随机数字表法将40只小鼠分为5组,每组8只,分别为假手术(sham)组,缺血再灌注(IR)各组(缺血1.5 h,按再灌注时间分为IR 2 h组、IR 6 h组、IR 12 h组和IR 24 h组)。细胞实验分组分为两部分,(1)缺氧模型建立,分为control组和IR组。(2)缺氧/复氧模型建立,分为对照组、mimic组,inhibitor组和inhibitor+siRNA组。HE染色观察肝组织病理变化;免疫细胞化学染色检测FoxO3a表达分布情况;荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测miR-182-5p、FoxO3a、半胱天冬酶-1(Caspase1)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18表达情况;分析miR-182-5p与FoxO3a基因相关性;免疫荧光检测Caspase1表达情况;ELISA检测IL-1β和IL-18表达情况;CCK-8试剂盒检测细胞活性变化情况。结果 IR处理后小鼠肝组织损伤增加,再灌注12 h时损伤最重,同时FoxO3a、Caspase1、IL-1β、IL-18表达增加(P<0.05),诱导焦亡产生;IR处理后小鼠肝组织内miR-182-5p表达水平较sham组升高(P<0.05)。体外培养小鼠肝细胞AML12,IR处理后miR-182-5p表达上调,FoxO3a表达下调,同时Caspase1表达升高(P<0.05)。过表达miR-182-5p能降低FoxO3a表达水平;反之能增加FoxO3a表达量,进而降低Caspase1、IL-1β、IL-18的表达,增加肝细胞活性(P<0.05)。结论激活miR-182-5p能加重肝缺血再灌注损伤,而抑制miR-182-5p能减轻肝缺血再灌注损伤,其机制可能与miR-182-5p通过靶向调控FoxO3a激活肝细胞焦亡、影响Caspase1、IL-1β、IL-18表达有关。
- 杜晨阳宋虎王星星王振张建军
- 关键词：再灌注损伤微RNAS叉头转录因子类
- miR-223-3p调控FOXO3a介导自噬在肝脏缺血再灌注损伤中的作用被引量：1
- 2020年
- 目的发现和探讨miR-223-3p可能通过调控FOXO3a介导自噬在肝缺血再灌注损伤中发挥作用。方法采用C57/BL6小鼠建立小鼠缺血再灌注(IR)模型,根据再灌注时间不同分为2 h组、6 h组、12 h组和24 h组,假手术组不进行钳夹肝蒂操作。培养小鼠肝AML12细胞,用miR-223-3p mimics、miR-223-3p inhibitor以及FOXO3a的干扰RNA处理细胞,并建立缺氧1 h复氧6 h的模型,分为miRNA对照组、miR-223-3p模拟物组、miR-223-3p抑制剂组以及siRNA对照组、FOXO3a siRNA组。HE染色、TUNEL检测不同时间点肝脏的损伤及细胞凋亡状况。免疫组化检测肝细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)和Caspase-3的变化。RT-PCR和Western blot检测肝组织以及肝细胞内miR-223-3p、FOXO3a、LC3、p62和Caspase-3的表达变化。结果 HE染色、TUNEL结果显示12 h肝组织再灌注损伤以及细胞凋亡最严重。在肝组织IR模型中,RT-PCR结果显示IR各组miR-223-3p、FOXO3a的表达均高于假手术组(1.00±0),miR-223-3p在12 h时(9.13±2.12)达最高,FOXO3a在6 h时(5.23±0.90)达最高(P<0.05)。Western blot结果显示再灌注6 h时FOXO3a表达水平最高,12 h时LC3和Caspase-3表达水平最高(P<0.05)。在细胞缺氧复氧模型中,RT-PCR结果显示miRNA对照组(1.00±0)FOXO3a mRNA的表达较miR-223-3p模拟物组(0.45±0.21)降低,反之在miR-223-3p抑制剂组(2.73±0.53)升高(P<0.05)。Western blot检测显示FOXO3a蛋白表达在miR-223-3p抑制剂组最高,miR-223-3p模拟物组最低,反之LC3和Caspase-3均在miR-223-3p模拟物组表达最高(P<0.05)。siRNA对照组中FOXO3a表达较FOXO3a siRNA组高,同时FOXO3a siRNA组中Caspase-3和LC3表达更高。结论研究表明FOXO3a对肝缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与其抑制细胞自噬以及凋亡有关,而miR-223-3p通过下调FOXO3a介导自噬促进损伤,提示miR-223-3p和FOXO3a成负相关且可能是肝脏损伤的潜在基因治疗靶点。
- 王星星宋虎杜晨阳王振张建军
- 关键词：肝移植缺血再灌注自噬
