杨占武
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：河北农业大学农学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金河北省科技计划项目河北省高等学校科学技术研究指导项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- GbRvd基因沉默后海岛棉受黄萎病菌胁迫下的转录组分析
- 挖掘抗病基因并解析其抗性机制是利用基因工程进行棉花抗病育种的前提条件。实践发现,陆地棉对黄萎病的抗性普遍较弱,而海岛棉对黄萎病具有较强的抗性。因此,本研究以课题组前期构建的黄萎病诱导下的海岛棉(Gossypium bar...
- 杨占武张艳王国宁李志坤王省芬马峙英杨君
- 文献传递
- 棉花GbRvd的亚细胞定位及其超表达烟草抗病性分析被引量：3
- 2016年
- 【目的】研究棉花NB-LRR家族基因GbRvd的亚细胞定位及超表达烟草的黄萎病抗性,为解析GbRvd介导的植物抗黄萎病机制提供依据。【方法】对真核表达载体pJCV52进行改造,在SpeⅠ酶切位点插入gfp,使其兼具亚细胞定位的功能,命名为GPJCV52。应用Gateway技术构建GbRvd的亚细胞定位和超表达载体,并分别转化农杆菌GV3101。利用生物信息学和农杆菌介导的烟草瞬时表达技术对GbRvd分别进行亚细胞定位预测与观察。采用农杆菌介导法转化烟草,并通过组织培养技术获得转基因植株。运用PCR对超表达GbRvd的烟草进行阳性植株筛选,且利用半定量RT-PCR对阳性转基因植株进行表达检测。制备棉花黄萎病菌孢子悬浮液,通过灌根法对T_3代转基因烟草株系进行接种,利用5级标准统计发病情况并计算病情指数。【结果】利用在线分析软件ProtComp预测GbRvd为一种胞外(分泌)蛋白;GbRvd的跨膜预测结果显示其包含3个跨膜域;在线分析软件Wo LF PSORT预测结果显示GbRvd在细胞膜、内质网及叶绿体的预测分值分别为7、3和1,表明GbRvd主要存在于植物细胞膜上。利用农杆菌介导的烟草瞬时表达技术进一步对GbRvd的亚细胞定位进行观察,结果显示在单独表达GFP蛋白的烟草细胞中,荧光信号在细胞核、细胞质和细胞膜均有分布;而GbRvd与GFP融合表达后的荧光信号主要分布于烟草表皮细胞质和细胞膜。综合生物信息学分析和亚细胞定位观察结果,表明细胞膜和细胞质是GbRvd的主要分布位置。利用农杆菌介导和组织培养获得了转基因烟草植株,通过对转基因烟草植株的PCR检测显示,阳性转基因烟草植株能够通过PCR扩增出与预期大小一致的目的条带,而野生型植株未出现相应条带;阳性转基因烟草植株半定量RT-PCR同样能够检测出与预期大小一致的目的条带,由此表明GbRvd成功整合于烟草基因组并能够进行正常转录�
- 杨占武杨君张艳吴金华李志坤王省芬吴立强张桂寅马峙英
- 关键词：棉花亚细胞定位转基因烟草黄萎病
- 大豆细胞色素P450家族GmCYP78A71固氮功能解析被引量：1
- 2023年
- 大豆可与根瘤菌互作进行共生固氮,有效缓解其对土壤氮素的依赖。细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)是一种血红素单加氧酶,参与植物信号分子、植物激素和黄酮类等多种次生代谢物的合成,为探究其在大豆结瘤固氮中的生物学功能,分析了该家族GmCYP78A71基因的结构,并对其表达模式及生物学功能进行了深入解析。qRT-PCR和转启动子大豆毛根的根瘤GUS染色表明,GmCYP78A71在根瘤中特异表达,且随着根瘤的发育表达量逐渐增高,在成熟根瘤中达到峰值;与对照相比,超表达复合植株的根瘤个数、鲜重、固氮酶活性等显著提高,而RNAi毛状根的根瘤个数、鲜重、固氮酶活性等显著降低。上述结果表明GmCYP78A71对根瘤的生长发育和固氮发挥重要作用。
- 杨占武杜汇邢馨竹李文龙孔佑宾李喜焕张彩英
- 关键词：大豆共生固氮根瘤优异种质
- 大豆类胡萝卜素裂解双加氧酶GmCCD8固氮功能解析被引量：1
- 2022年
- 大豆可与根瘤菌共生进行生物固氮,固氮机制受许多基因诱导调控,类胡萝卜素裂解双加氧酶(carotenoid cleavage dioxygenases,CCDs)可调控多种植物激素、色素、芳香类化合物的合成与代谢。为探讨其在大豆生物固氮中的功能,从大豆育成品种中黄15中克隆类胡萝卜素裂解双加氧酶GmCCD8基因,分析了该基因的表达模式及生物学功能。亚细胞定位表明GmCCD8在细胞质中表达。qRT-PCR技术及启动子融合GUS表达载体转化大豆毛状根,发现GmCCD8随大豆根瘤生长发育表达量逐渐上升,且在第28天根瘤中表达量最高。通过构建过表达及RNAi转基因复合植株,验证了GmCCD8影响根瘤发育及固氮能力。利用透射电镜观察根瘤内部结构,发现GmCCD8被干扰后根瘤内泡囊、类菌体和聚β-羟基丁酸盐的含量明显减少。上述结果表明,GmCCD8参与大豆根瘤生长发育及生物固氮过程,为大豆高效固氮分子育种提供了功能基因。
- 邢馨竹杨占武孔佑宾李文龙杜汇李喜焕张彩英
- 关键词：大豆根瘤共生固氮
