张玲
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院基础医学院药理学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金武汉市卫生局科研项目湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- AF0.3启动子调控的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性肝癌细胞的特异杀伤作用被引量：5
- 2006年
- 背景与目的:甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)启动子调控下的目的基因能在AFP阳性肝癌组织中特异性表达;嘌呤核苷磷酸化酶(Escherichiacolipurinenucleosidephosphorylase,PNP)/6-甲基嘌呤-2′-脱氧核糖核苷(6-methylpurine-2-deoxyriboside,MeP-dR)自杀基因系统具有强杀瘤效应。本研究旨在探讨AF0.3启动子调控下的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性肝癌细胞的特异性杀伤作用。方法:构建甲胎蛋白启动子AF0.3调控下PNP基因表达载体pAF0.3/PNP,导入AFP阳性肝癌细胞HepG2和阴性的肝癌细胞株SMMC7721,利用G418筛选获得稳定转染PNP基因的HepG2/0.3-PNP及SMMC7721/0.3-PNP细胞。RT-PCR检测二者在细胞中的表达。台盼蓝拒染法检测细胞增殖效应,MTT法和流式细胞仪检测两株细胞对MeP-dR的敏感性及旁观者效应,高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)检测PNP基因产物活性。结果:不论有氧还是缺氧条件,HepG2/0.3-PNP对MeP-dR均较为敏感,SMMC7721/0.3-PNP则对MeP-dR完全不敏感。在任何一种条件下,HepG2/AF0.3-PNP在混合细胞中比例达25%后,就可致明显旁观者效应;而在同样条件下,SMMC7721/0.3-PNP不导致明显的旁观者效应。HPLC结果显示,pAF0.3/PNP在HepG2细胞中可以将MeP-dR转化为6-MP,但其在SMMC7721中则不具有转化活性。结论:AF0.3启动子调控下的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性HepG2细胞有较好的杀伤作用。
- 蔡晓坤周俊立周鹤俊张玲吴健鸿林菊生
- 关键词：AFP阳性肝肿瘤HEPG2细胞基因治疗
- 淋病奈瑟菌膜蛋白抗原表位的研究被引量：1
- 2007年
- 目的利用人工合成多肽制备针对淋球菌外膜蛋白PIB抗原表位的特异性多克隆抗体,以期用于淋球菌的检测,为进一步建立新型淋病快速诊断方法提供研究基础。方法根据PIB抗原表位的氨基酸序列合成一段多肽(LD1),并将其与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联构成完全抗原LD1-KLH,免疫动物,收集抗血清,用ELISA和Western blot检测其特异性。结果ELISA检测表明,LD1-KLH具有免疫原性,免疫动物能刺激机体产生较强的体液免疫反应,兔血清抗体和豚鼠血清抗体效价最高分别达到1:3200和1:25600;抗血清能与淋球菌临床株特异性结合,与葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌和真菌等其他微生物之间没有交叉反应;Westernblot结果显示,抗血清能识别淋球菌裂解物,产生特异性条带,相对分子质量(Mr)为37300。结论人工合成多肽具有免疫原性,能诱导机体产生识别淋球菌抗原表位的特异性抗体。
- 戴翔廖芳黄进周俊立张玲
- 关键词：淋病奈瑟菌外膜蛋白表位多肽
- 甲型H5N1禽流行性感冒病毒血凝素抗原和霍乱毒素B亚单位融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的构建甲型HSN1禽流行性感冒流感病毒血凝素（HA）抗原和霍乱毒素B亚单位（CTB）融合蛋白真核表达载体，并研究其在COS7细胞中的表达特性，及其在动物体内不同时间点诱导机体产生特异性抗体的情况。方法采用PCR技术分别克隆CTB基因和HA基因，并用BamHI酶切2个基因片段，在T4连接酶的作用下构建CTHA融合基因（CH基因）。双酶切后，将CH基因插入真核表达质粒pCI—neo中，构建甲型H5N1禽流感病毒融合蛋白真核表达载体（pCI—CH）。将pCICH质粒转染COS7细胞，利用Western印迹、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SD孓PAGE）检测HA抗原的表达；间接EI-ISA法检测免疫接种新西兰大白兔后其血清中HA抗原的特异性抗体效价，以及与H1N1、H9N1、H3N2和乙型流感病毒的交叉反应情况。结果pCl—CH真核表达载体（即核酸疫苗）构建成功，可在cos7细胞中高效表达，并能在大白兔体内诱导产生特异性抗pcI-cH抗体。核酸疫苗pC-CH特异性抗血清不仅可以与甲型HSNl流感病毒特异性结合（P／N〉2．1），而且可以与HINl、HgNl和H3N2毒株发生特异性反应；但该抗血清与乙型流感病毒无特异性反应。结论构建的甲型H5N1禽流感病毒核酸疫苗具有良好的免疫原性。
- 张玲肖昕杨旺代淑兰胡春华廖芳
- 关键词：流感病毒A型H5N1亚型病毒血凝素类霍乱毒素融合蛋白质类
- 蛋氨酸亚砜还原酶A负性调控小胶质细胞介导的炎症反应及机制
- 目的 研究蛋氨酸亚砜还原酶A(MsrA)在小胶质细胞中的作用及其机制.方法 PCR,Western blotting,免疫荧光,ELISA,生化检测,基因工程,电子自旋共振谱技术.结果 PCR,Western blott...
- 吴鹏飞范华张玲胡壮丽王芳陈建国
- 关键词：MSRA小胶质细胞脂多糖炎症
- 铜绿假单胞菌LasI基因反义核酸载体的构建及生物学作用研究被引量：2
- 2007年
- 目的构建LasI基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasIantisense,转化入铜绿假单胞菌并分析其生物学作用。方法PCR扩增LasI基因序列,反向克隆法构建LasI基因的反义核酸原核表达载体pUCP18/lasIantisense,并转化铜绿假单胞菌。通过检测转化菌的LasB和LasR基因表达,测定外毒素的活性和绿脓菌素的表达等指标,分析pUCP18/lasIantisense的生物学作用。结果成功构建pUCP18/lasIantisense并转化铜绿假单胞菌,且有效表达,转化菌的毒力因子弹性蛋白酶、外毒素和绿脓菌素表达水平均降低。结论pUCP18/lasIantisense可以降低铜绿假单胞菌毒力因子表达,提示LasI基因可作为医院内铜绿假单胞菌感染治疗的一个新的靶点。
- 周俊立李柏生张玲廖芳贺超
- 铜绿假单胞菌LasR基因反义核酸原核表达载体的构建及对该菌毒力的影响被引量：4
- 2007年
- PCR扩增LasR基因,用反向克隆法构建LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense并转化铜绿假单胞菌,经酶切、PCR及测序鉴定重组载体.RT-PCR检测LasB基因和LasI基因mRNA的表达,NAD法测定外毒素A的活性,紫外分光光度计测定绿脓菌素的产生水平.用转化pUCP18/lasRantisense质粒菌株感染大鼠呼吸道并进行病理组织切片检查.PCR扩增出约720bp片段,与GenBank(No:NC_002516)报道的基因片段大小一致,构建了LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense,并成功转化铜绿假单胞菌,且有效表达,使转化菌的毒力因子弹性蛋白酶、外毒素A和绿脓菌素表达水平均降低.与标准株感染的大鼠比较,转化pUCP18/lasRantisense质粒菌株感染的大鼠支气管炎症明显减轻.上述结果表明,LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense可以降低铜绿假单胞菌的毒力.
- 张玲周俊立李静铭廖芳
- 关键词：反义核酸毒力因子
