朱文兵 作品数:26 被引量:27 H指数:3 供职机构: 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 更多>> 发文基金: 云南省科技厅科研基金 中央高校基本科研业务费专项资金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
抗树鼩CD4单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定 被引量:1 2019年 目的制备鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法将重组质粒pGEX-5X-1-CD4和pET30a(+)-CD4分别转化感受态E.coli BL21和BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并通过Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲和层析柱纯化重组蛋白GST-CD4和His-CD4。以His-CD4蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选出能分泌抗树鼩CD4的杂交瘤细胞株,制备小鼠腹水单克隆抗体,间接ELISA法检测效价,并通过Protein A亲和层析柱纯化获得鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,Western blot及FACS法分析其生物学特性。结果筛选出3株能稳定分泌抗树鼩CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为37D2、38E1、39F2,腹水单克隆抗体效价分别为1∶204800、1∶204800、1∶3200。经HRP标记的38E1单克隆抗体可与树鼩PBMC总蛋白发生特异性结合,经PECy5.5标记的38E1单克隆抗体能特异性识别树鼩PBMC。结论成功制备了鼠抗树鼩CD4的单克隆抗体,为进一步对树鼩作为动物模型的研究及应用奠定了基础。 吴忠香 张雪梅 张雪梅 宋杰 徐婧雯 朱文兵 宋杰 李卫宇 李慧关键词:树鼩 CD4 单克隆抗体 生物学特性 GⅡ.4型人诺如病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:1 2020年 目的制备抗GⅡ.4型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)衣壳蛋白VP1单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法PCR扩增GⅡ.4型HuNoV VP1基因序列,将其插入至原核表达载体pGEX-5X-1中,构建重组质粒p GEX-5X-1-VP1,转化至E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并通过亲和层析纯化获得重组蛋白GST-VP1。利用杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与经GST-VP1抗原免疫的BALB/c小鼠的脾细胞进行融合,通过间接ELISA法筛选出阳性杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,并进行纯化。采用间接ELISA法、Biacore法和Western blot法分别检测单克隆抗体的效价、亲和力及特异性。结果经菌落PCR及测序鉴定,重组质粒pGEX-5X-1-VP1构建正确。重组蛋白GST-VP1相对分子质量约85000,大部分以可溶形式存在,纯化后浓度为1.100 mg/mL。筛选获得3株能分泌GⅡ.4型HuNoV VP1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为NoV C1、NoV D9和NoV H6,效价均可达1∶10^7以上,亲和力常数KD(M)分别为4.422×10^-7、4.303×10^-8、7.540×10^-7 mol/L,均可与HuNoV VP1天然蛋白及GST-VP1重组蛋白发生特异性结合。结论利用原核表达系统成功表达了GST-VP1蛋白,并通过杂交瘤技术制备了高效价的GⅡ.4型HuNoV VP1特异性单克隆抗体,为GⅡ.4型HuNoV免疫诊断和疫苗的研发奠定了基础。 李慧 徐靖雯 张雪梅 吴忠香 朱文兵 蒋曦 李卫宇 宋杰 董少忠关键词:诺如病毒 衣壳蛋白 基因重组 原核表达 单克隆抗体 抗树鼩CD8分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用 本发明涉及一种抗树鼩CD8分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用,属于分子生物学技术领域。该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心建株,保藏名称为杂交瘤细胞株TSCD8α‑C16,保藏号为CCTCC NO:C2... 董少忠 张雪梅 吴忠香 徐婧雯 朱文兵 蒋曦 宋杰 李慧文献传递 云南省两市区脊髓灰质炎灭活疫苗接种情况调查 被引量:1 2019年 目的:分析云南省昆明市五华区及丽江市脊髓灰质炎疫苗(PV)接种情况及脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)在每个剂次中所占的比率及普及情况。方法:从两地疾病预防控制中心儿童免疫规划信息管理系统中收集2016年5月~2017年7月儿童PV接种数据,应用描述性流行病学方法进行分析。结果:2016年5月~2017年7月,五华区共接种PV 65 349剂,每一剂接种率均为99%以上,第1、2、3及4次剂IPV所占比率分别为86. 02%、33. 62%、26. 30%及20. 33%;丽江市共接种脊髓灰质炎疫苗21 962剂,每一剂次接种率均为99%以上,第1、2、3及4次剂IPV所占比率分别为39. 75%、7. 55%、8. 20%及0. 07%,使用IPV种类多为Sabin-IPV、Salk-IPV、DTa P-IPV/Hib,DTa P-IPV/Hib所占比率最高(62. 63%,χ~2=9 597. 6,P <0. 001);丽江市IPV相对单一,95%为免费Sabin-IPV,五华区IPV接种率明显高于丽江市(χ~2=22 614. 9,P <0. 001)。结论:昆明市五华区IPV接种率明显高于丽江市。 蒋曦 朱文兵 王静 詹会莲 李慧 宋杰 董少忠关键词:脊髓灰质炎疫苗 脊髓灰质炎灭活疫苗 接种 CVA16感染对m^6A甲基化相关蛋白表达和定位的影响 被引量:3 2020年 目的本研究旨在探究柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A 16,CVA16)感染后是否会影响N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)甲基化相关蛋白在人呼吸道上皮细胞(16HBE)、ICR乳鼠和SCARB2人源化小鼠中的表达,以及在细胞中的定位。方法病毒分别以感染复数(MOI)=0.1感染16HBE和107 CCID50/ml感染小鼠,Western blot分析甲基转移酶、去甲基化酶和甲基化阅读蛋白的表达变化,免疫荧光观察这些蛋白质在细胞中的定位。结果研究结果发现,随着CVA16病毒感染时间的增加,m6A甲基化相关蛋白在细胞中表达水平逐渐下调,在ICR乳鼠和SCARB2小鼠中无明显变化;病毒感染后,m6A甲基化相关蛋白在细胞核与细胞质中重新分布,甚至发生降解。结论CVA16在宿主细胞中复制时可以改变m6A甲基化修饰相关蛋白的表达和细胞定位。本研究结果提示m6A修饰可能是肠道病毒治疗的潜在新靶点。 李卫宇 蒋曦 郑雪麟 朱文兵 刘卓航 李慧 张雪梅 吴忠香 宋杰 董少忠广谱中和抗EV71、CA16、CA10和CA6人-鼠嵌合IgM型单克隆抗体及应用 本发明涉及一种广谱中和抗EV71、CA16、CA10和CA6人‑鼠嵌合IgM型单克隆抗体及应用,属于生物技术领域。该抗体包括重链可变区和轻链可变区,其所述重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示,所述轻... 董少忠 朱文兵 蒋曦 李卫宇 郑雪麟 刘卓航 张雪梅 徐婧雯 吴忠香 宋杰 李慧 孙明 马绍辉抗树鼩CD3分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用 本发明涉及一种抗树鼩CD3分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用,属于分子生物学技术领域。该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心建株,保藏名称为杂交瘤细胞株TSCD3‑77B2,保藏号为CCTCC NO:C2... 徐靖雯 董少忠 张雪梅 吴忠香 蒋曦 朱文兵 宋杰 李慧 巩蔚 严丽蔚文献传递 抗树鼩CD3ε单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定 被引量:1 2018年 目的:制备鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法:以GST-CD3ε蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术融合免疫后的BALB/c小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,通过间接酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测,筛选出多株能分泌抗树鼩CD3ε的杂交瘤细胞株,经过3次亚克隆筛选后,制备小鼠腹水单克隆抗体,并纯化得到鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体,通过腹水单克隆抗体效价测定、单克隆抗体亲和力测定、单克隆抗体抗原表位分析、Western blot和流式细胞荧光分选技术(fluorescence activated cell sorting,FACS)分析其生物学特性。结果:筛选到5株能稳定分泌抗树鼩CD3ε单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为78I、87I、92D1、75II和35C8,腹水单克隆抗体效价分别为1∶10~6、1∶10~6、1∶10~4、1∶10~6、1∶10~3,亲和力解离常数(Kd)分别为1.8×10^-5、2.9×10^-5、4.9×10^-5、7.3×10^-5、3.6×10^-5。5株单克隆抗体抗原表位分析显示78I、87I和75II识别同一抗原表位,而92D1和35C8识别另一抗原表位。经Western blot检测,HRP标记后的92D1能识别GST-CD3ε蛋白和树鼩外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),并对大鼠、小鼠和猴的PBMC有抗体交叉反应。经FACS检测,PE-Cy5.5标记后的92D1能特异性识别树鼩PBMC。结论:成功制备出鼠抗树鼩CD3ε的单克隆抗体,为进一步应用于树鼩免疫检测奠定基础。 徐婧雯 张雪梅 吴忠香 朱文兵 蒋曦 巩蔚 严丽蔚 宋杰 李慧 董少忠关键词:树鼩 单克隆抗体 狂犬病病毒糖蛋白表达及纯化及其记忆性B细胞结合能力的分析 被引量:3 2017年 表达纯化不同标签、不同大小3个狂犬病病毒糖蛋白,分析其结合功能后,得到具备高亲和力的、可特异性结合记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。本实验通过基因工程的方法,采用不同的原核表达系统分别表达带有不同标签的、全长和膜外区的RVG,纯化蛋白并分析比较其结合功能,荧光标记候选蛋白,结合CD19及CD27的抗体,流式细胞术检测狂犬疫苗免疫后PBMCs中抗狂犬病病毒特异性记忆性B细胞的情况,确认候选蛋白与抗狂犬病毒特异性记忆性B细胞的结合功能。本实验成功构建了3个表达载体pGEX-5X-1-RVG、pET28a-RVG和pET30a-G,优化表达纯化条件成功获得了糖蛋白GST-RVG、His-RVG和His-G。纯化后的GST-RVG、His-RVG和His-G经Western blotting和ELISA鉴定均有抗原特异性;由竞争ELISA法测得3个纯化后糖蛋白与抗狂犬病病毒抗体的亲和力。通过流式细胞术可以检测到狂犬疫苗免疫后阳性志愿者PBMCs中的抗狂犬病病毒特异性记忆性B细胞,从而获得了高亲和力、可用于分选抗原特异性的记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。 严丽蔚 巩蔚 朱文兵 张雪梅 徐婧雯 吴忠香 卢孔杰 孙明 董少忠关键词:狂犬病病毒糖蛋白 流式细胞术 抗GII.4型诺如病毒衣壳蛋白VP1和病毒样颗粒VLP单克隆抗体的制备方法和应用 本发明涉及一种抗GII.4型诺如病毒衣壳蛋白VP1和病毒样颗粒VLP单克隆抗体的制备方法和应用,通过将目的序列插入原核表达载体中构建重组质粒pGEX‑5X‑1‑VP1,利用大肠杆菌表达系统表达并纯化得GII.4型诺如病毒... 董少忠 李慧 宋杰 徐婧雯 张雪梅 吴忠香 朱文兵 蒋曦 李卫宇 郑雪麟 刘卓航文献传递