宋杰 作品数:44 被引量:66 H指数:4 供职机构: 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 云南省应用基础研究计划面上项目 云南省科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 历史地理 更多>>
CXCL4基因敲除小鼠的饲养、繁殖及基因型鉴定 2016年 目的饲养、繁殖并鉴定CXC趋化因子配体4[chemokine(C-X-C motif)ligand 4,CXCL4]基因敲除小鼠,为深入研究CXCL4的生物学功能奠定基础。方法将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,剪取繁殖成功的子代小鼠耳朵,提取其基因组DNA,采用PCR法鉴定小鼠的基因型;比较野生型小鼠和CXCL4敲除的纯合子小鼠的体重变化及结直肠的长度,通过HE染色观察野生型小鼠和CXCL4敲除的纯合子小鼠的结直肠形态结构;采用ELISA法验证CXCL4野生型和纯合子小鼠血清中CXCL4的表达。结果繁殖成功的子代小鼠有3种基因型:野生型、杂合子及纯合子;4、10周龄雌性纯合子小鼠体重明显重于同龄的野生型小鼠(P<0.05),6、10周龄雄性纯合子小鼠体重明显重于同龄的野生型小鼠(P<0.05);6周龄雌性纯合子小鼠结直肠长度明显长于同周龄的野生型小鼠(P<0.05),但结直肠的形态结构无显著改变;纯合子小鼠血清中CXCL4的表达量明显低于WT小鼠(P<0.05)。结论成功获得了CXCL4基因敲除纯合子小鼠,为深入研究CXCL4的生物学功能奠定了基础。 宋杰 胡云光 胡雅洁 王艳翠 李嘉祺 刘龙丁关键词:基因敲除小鼠 基因型 EV71和CA16研究进展综述 被引量:11 2018年 手足口病(hand-foot and mouth disease,HFMD)是一种全球性的传染病,其主要病原体为肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(cosackievirus A 16,CA16)。EV71与CA16同属于小核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus)肠道病毒A型(Human enterovirus A)的成员,两者在病原学、感染和复制特征以及感染导致的临床症状和免疫反应有相似的方面,但也有明显不同的方面。现将对EV71和CA16相关的病原学、感染和复制特征以及临床症状和免疫反应研究进行综述。 宋杰 胡雅洁 董少忠关键词:肠道病毒71型 柯萨奇病毒A组16型 手足口病 免疫反应 抗树鼩CD4单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定 被引量:1 2019年 目的制备鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法将重组质粒pGEX-5X-1-CD4和pET30a(+)-CD4分别转化感受态E.coli BL21和BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并通过Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲和层析柱纯化重组蛋白GST-CD4和His-CD4。以His-CD4蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选出能分泌抗树鼩CD4的杂交瘤细胞株,制备小鼠腹水单克隆抗体,间接ELISA法检测效价,并通过Protein A亲和层析柱纯化获得鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,Western blot及FACS法分析其生物学特性。结果筛选出3株能稳定分泌抗树鼩CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为37D2、38E1、39F2,腹水单克隆抗体效价分别为1∶204800、1∶204800、1∶3200。经HRP标记的38E1单克隆抗体可与树鼩PBMC总蛋白发生特异性结合,经PECy5.5标记的38E1单克隆抗体能特异性识别树鼩PBMC。结论成功制备了鼠抗树鼩CD4的单克隆抗体,为进一步对树鼩作为动物模型的研究及应用奠定了基础。 吴忠香 张雪梅 张雪梅 宋杰 徐婧雯 朱文兵 宋杰 李卫宇 李慧关键词:树鼩 CD4 单克隆抗体 生物学特性 复合免疫佐剂在疫苗开发中的应用研究进展 被引量:3 2020年 随着新型疫苗的不断发展,研发能与疫苗安全高效配伍增强免疫应答的新型佐剂已迫在眉睫。目前研究表明单一佐剂很容易引发一种特定单一类型的辅助T细胞(helper T cell,Th)1或Th2反应,难以引起理想的免疫反应。复合佐剂作为疫苗佐剂研发的新趋势和热点,将两种或两种以上的免疫佐剂进行联合应用,协调发挥各自的优势,实现最大的佐剂效应,展现了复合佐剂协同作用的有利优势,为进一步开发新型佐剂提供了新的思考方向。 李慧 宋杰 董少忠关键词:疫苗 肠道病毒-D68 2A蛋白对抗病毒IFN-Ⅰ通路影响的研究 被引量:1 2019年 目的观察肠道病毒(EV)-D68蛋白2A在EV-D68病毒感染293T细胞过程中对抗病毒IFN-Ⅰ通路的影响。方法免疫印迹法(Western blot)检测重组2A蛋白、IFN-α因子及信号传导及转录激活因子1(STAT1)的蛋白表达水平;免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测细胞内不同时间点EV-D68病毒VP1与2A的表达;通过观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),计算细胞培养半数感染量(50% cell culture infective dose,CCID50)来检测病毒感染性滴度;利用实时荧光定量PCR技术(real-time PCR,RT-PCR)检测IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的表达。结果成功构建pCLIPf-2A质粒,在转染后的24 h,重组蛋白2A有较好的表达。病毒滴度结果表明,2A蛋白在感染后期可以有效促进EV-D68病毒的增殖复制。IFN-α干扰素检测结果表明,EV-D68 2A可以刺激IFN-α的表达。IFN-Ⅰ干扰素相关基因检测表明,EV-D68+2A组、2A组及EV-D68对照组的IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的IFN-α mRNA水平均有不同程度的上调或下调,但是三者诱导相关基因表达上调、下调的趋势不同。对IFN-Ⅰ干扰素通路下游蛋白STAT1检测结果表明,各组均能有效诱导STAT1蛋白的表达。结论EV-D68 2A可以促进抗病毒IFN-Ⅰ通路相关基因及下游蛋白的应答,病毒感染后期,2A可以促进病毒较快增殖。 郑惠文 杨智尧 杨泽宁 宋杰 黄星 李楠 丁丽莎 李恒 李洪哲 郭磊 储曼曼 施海晶 刘龙丁GⅡ.4型人诺如病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:1 2020年 目的制备抗GⅡ.4型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)衣壳蛋白VP1单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法PCR扩增GⅡ.4型HuNoV VP1基因序列,将其插入至原核表达载体pGEX-5X-1中,构建重组质粒p GEX-5X-1-VP1,转化至E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并通过亲和层析纯化获得重组蛋白GST-VP1。利用杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与经GST-VP1抗原免疫的BALB/c小鼠的脾细胞进行融合,通过间接ELISA法筛选出阳性杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,并进行纯化。采用间接ELISA法、Biacore法和Western blot法分别检测单克隆抗体的效价、亲和力及特异性。结果经菌落PCR及测序鉴定,重组质粒pGEX-5X-1-VP1构建正确。重组蛋白GST-VP1相对分子质量约85000,大部分以可溶形式存在,纯化后浓度为1.100 mg/mL。筛选获得3株能分泌GⅡ.4型HuNoV VP1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为NoV C1、NoV D9和NoV H6,效价均可达1∶10^7以上,亲和力常数KD(M)分别为4.422×10^-7、4.303×10^-8、7.540×10^-7 mol/L,均可与HuNoV VP1天然蛋白及GST-VP1重组蛋白发生特异性结合。结论利用原核表达系统成功表达了GST-VP1蛋白,并通过杂交瘤技术制备了高效价的GⅡ.4型HuNoV VP1特异性单克隆抗体,为GⅡ.4型HuNoV免疫诊断和疫苗的研发奠定了基础。 李慧 徐靖雯 张雪梅 吴忠香 朱文兵 蒋曦 李卫宇 宋杰 董少忠关键词:诺如病毒 衣壳蛋白 基因重组 原核表达 单克隆抗体 抗肠道病毒71型血清与病毒间的中和量效反应关系 2023年 目的探讨抗肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)中和血清效价与EV71滴度之间的中和试验量效反应关系。方法将EV71收获液进行系列梯度稀释后,加入不同动物来源的不同效价的血清进行中和试验,观察细胞病变情况,找到能够完全中和不同滴度病毒所需的最低血清效价。结果随着病毒滴度的增加,需要完全中和病毒所对应的血清效价也相应增加,但血清效价增加的趋势较病毒增加的趋势慢,当病毒滴度增加约120000倍时,所需的血清效价增加约1000倍。不同来源的血清对EV71的中和能力相当。结论初步确立了EV71中和血清与EV71滴度间的中和量效关系。 李亚东 解裕萍 徐敏 郎磊 赵勇 杜宋婷 贺凌煜 宋杰 宋杰关键词:肠道病毒71型 量效关系 抗树鼩CD8分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用 本发明涉及一种抗树鼩CD8分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用,属于分子生物学技术领域。该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心建株,保藏名称为杂交瘤细胞株TSCD8α‑C16,保藏号为CCTCC NO:C2... 董少忠 张雪梅 吴忠香 徐婧雯 朱文兵 蒋曦 宋杰 李慧文献传递 云南省两市区脊髓灰质炎灭活疫苗接种情况调查 被引量:1 2019年 目的:分析云南省昆明市五华区及丽江市脊髓灰质炎疫苗(PV)接种情况及脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)在每个剂次中所占的比率及普及情况。方法:从两地疾病预防控制中心儿童免疫规划信息管理系统中收集2016年5月~2017年7月儿童PV接种数据,应用描述性流行病学方法进行分析。结果:2016年5月~2017年7月,五华区共接种PV 65 349剂,每一剂接种率均为99%以上,第1、2、3及4次剂IPV所占比率分别为86. 02%、33. 62%、26. 30%及20. 33%;丽江市共接种脊髓灰质炎疫苗21 962剂,每一剂次接种率均为99%以上,第1、2、3及4次剂IPV所占比率分别为39. 75%、7. 55%、8. 20%及0. 07%,使用IPV种类多为Sabin-IPV、Salk-IPV、DTa P-IPV/Hib,DTa P-IPV/Hib所占比率最高(62. 63%,χ~2=9 597. 6,P <0. 001);丽江市IPV相对单一,95%为免费Sabin-IPV,五华区IPV接种率明显高于丽江市(χ~2=22 614. 9,P <0. 001)。结论:昆明市五华区IPV接种率明显高于丽江市。 蒋曦 朱文兵 王静 詹会莲 李慧 宋杰 董少忠关键词:脊髓灰质炎疫苗 脊髓灰质炎灭活疫苗 接种 CVA16感染对m^6A甲基化相关蛋白表达和定位的影响 被引量:3 2020年 目的本研究旨在探究柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A 16,CVA16)感染后是否会影响N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)甲基化相关蛋白在人呼吸道上皮细胞(16HBE)、ICR乳鼠和SCARB2人源化小鼠中的表达,以及在细胞中的定位。方法病毒分别以感染复数(MOI)=0.1感染16HBE和107 CCID50/ml感染小鼠,Western blot分析甲基转移酶、去甲基化酶和甲基化阅读蛋白的表达变化,免疫荧光观察这些蛋白质在细胞中的定位。结果研究结果发现,随着CVA16病毒感染时间的增加,m6A甲基化相关蛋白在细胞中表达水平逐渐下调,在ICR乳鼠和SCARB2小鼠中无明显变化;病毒感染后,m6A甲基化相关蛋白在细胞核与细胞质中重新分布,甚至发生降解。结论CVA16在宿主细胞中复制时可以改变m6A甲基化修饰相关蛋白的表达和细胞定位。本研究结果提示m6A修饰可能是肠道病毒治疗的潜在新靶点。 李卫宇 蒋曦 郑雪麟 朱文兵 刘卓航 李慧 张雪梅 吴忠香 宋杰 董少忠